肿瘤细胞诱导T细胞下调表达腺苷脱氨酶

目的 蛋白质组学分析鉴定与肿瘤细胞共培养T细胞的表达差异蛋白.方法 双向电泳分离有/无肿瘤细胞共培养的T细胞蛋白,PDQuest软件分析筛选肿瘤细胞诱导表达异常的蛋白点,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MAL-DI-TOF MS)对酶解消化样品进行肽质量指纹图谱(PMF)分析,结合数据库搜索鉴定蛋白质.结果 PDQuest分析有/无肿瘤细胞共培养的T细胞蛋白双向电泳图谱,70余个蛋白点表达水平差异显著,其中与肿瘤细胞共培养的T细胞有一明显表达下调的蛋白点,质谱分析结合数据库检索表明该蛋白点为腺苷脱氨酶.结论 肿瘤细胞诱导T细胞下调表达腺苷脱氨酶.     

农杆菌介导鼠源轮状病毒vp4基因转化马铃薯条件优化研究

目的　获得马铃薯再生和农杆菌介导的遗传转化体系。方法　以马铃薯品种“台湾红”为受体材料 ,对其再生和农杆菌介导的遗传转化体系进行了研究。结果　诱愈培养基为MS + 0 1mg L 2 ,4-D + 1mg LBA ,出芽培养基为MS + 1mg LZT +5 0mg LGA3 ,卡那霉素浓度为 5 0mg L ,农杆菌液浓度为A6 0 0 =0 5。通过该体系将一鼠源轮状病毒外壳蛋白基因vp4导入马铃薯中 ,获得了具卡那霉素抗性的转化植株。经PCR验证 ,外源基因已导入马铃薯基因组中。结论　获得相对高效的马铃薯遗传转化体系 ,并成功地将外源基因转入马铃薯中。     

CTL的免疫识别

免疫识别是机体免疫系统产生特异性免疫的基础 ,通过对抗原的特异性识别 ,激发机体产生免疫应答 ,最终由效应细胞和 /或效应分子 (Ａｂ)清除病原体或“异己”物质。对特异性抗原的大量研究 ,并由此研制的疫苗在预防、控制多种传染性疾病方面起到重要作用。近年来 ,细胞毒性Ｔ细胞 (ＣＴＬ)引起人们的重视 ,发现人类面临的多种难以攻克的疾病 ,如肿瘤、ＡＩＤｓ、乙型肝炎等 ,ＣＴＬ扮演着关键角色。现就ＣＴＬ免疫识别方面的问题作一综述。1　ＣＴＬ免疫识别的结构基础　　ＣＴＬ仅能识别表达于抗原提呈细胞 (ＡＰＣｓ)表面并与ＭＨＣⅠ类分…     

系统性红斑狼疮中内皮细胞相关自身抗原的鉴定

目的在内皮细胞中筛选与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)疾病相关的自身抗原。方法用免疫沉淀法以SLE病人血清中自身抗体捕获人脐带内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)相关抗原,并用双向电泳法分离免疫沉淀产物,然后用LC-MS-MS串联质谱鉴定与SLE病人血清反应的蛋白点。最后用Western blot法验证部分鉴定蛋白。结果相对于正常人血清对照,SLE病人血清捕获了多个内皮细胞相关蛋白,质谱鉴定结果显示:通过免疫沉淀与双向电泳结合的方法成功鉴定了包括GAPDH等已知SLE自身抗原在内的一系列蛋白,其中钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase,CASK)为新发现SLE候选自身抗原。并以重组人CASK蛋白证实SLE病人血清中CASK抗体水平显著高于正常人对照。结论内皮细胞蛋白CASK可能作为一个新的SLE相关自身抗原。     

凝集性生长毛乳头细胞蛋白质组的差异分析

目的分析凝集性生长状态下,毛乳头细胞胞浆蛋白组的表达。方法提取第3代和第10代毛乳头细胞的胞浆总蛋白,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术进行分离,考马斯亮蓝G250染色后经PDQuest软件分析电泳图谱,对差异显著的蛋白点应用MALDI-TOF质谱仪测定其肽质量指纹图谱,在NCBInr数据库鉴定蛋白质。结果获得了较好的双向电泳图谱。图像分析显示:在第3代和第10代毛乳头细胞的样品中分别检测到608±39个和595±31个蛋白质点;对表达显著差异的24个蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析,17个得到良好的肽质量指纹图谱,经数据库检索后初步鉴定出15个相匹配的已知蛋白,大多为一些与代谢、信号转导、凋亡和蛋白合成相关的蛋白。结论毛乳头细胞的蛋白组表达模式与其凝集性生长状态密切相关。     

FLK1265-2493与C3d3融合基因真核表达质粒的构建及表达

目的 构建FLK1265-2493与C3d3融合基因真核表达质粒,并在体外进行表达和鉴定。方法采用PCR技术扩增FLK1265—2493片段,将该片段插入到pMDT-18载体中后,亚克隆至真核表达载体pSG．SS．C3d3．YL,构建FLD1265-2493与C3d3融合基因表达质粒。经限制性酶切鉴定和DNA序列测定结果证实后,将重组质粒pSG．SS．FLK1265—2493．C3d3．YL转染Hela细胞,检测其体外表达。结果免疫印迹和免疫细胞化学分析结果分别表明转染细胞上清液和胞浆内均有目的分子的存在。结论构建的DNA疫苗可在真核细胞内正确表达,这为进一步的动物实验打下了基础。     

人源轮状病毒转基因马铃薯口服免疫小鼠的免疫应答研究

目的分析人源轮状病毒转基因植物抗原的口服免疫应答反应。方法在根癌脓杆菌介导获得系列转基因马铃薯植株的基础上，用ELISA分析转基因马铃薯中目的蛋白表达水平。马铃薯块茎直接口服免疫Balb／c小鼠，ELISA分析免疫小鼠血清、唾液、粪便提取物特异抗体水平。结果获得一株最高表达量的转化株；口服免疫可诱导较强的血清IgG反应和强烈的黏膜sIgA反应，粪便的sIgA最高，唾液次之，尿液中无sIgA；加霍乱毒素B亚单位（CTB）佐剂免疫组小鼠和霍乱毒素（CT）佐剂免疫组小鼠抗体水平无显著差异，无佐剂免疫组小鼠抗体水平略低。结论人源轮状病毒转基因植物疫苗联合黏膜佐剂免疫动物可诱导特异的系统与黏膜免疫应答，且黏膜免疫强度略高于系统免疫。     

利用2DE-MS技术筛选和鉴定大肠癌血清标志物

目的 利用2DE-MS技术对大肠癌患者血清和正常人血清蛋白进行比较分析,筛选和鉴定差异蛋白.方法 收集正常人(n=10)和大肠癌患者(n=15)术前血清,进行去除白蛋白和免疫球蛋白及脱盐浓缩预处理,应用2DE-PAGE分离处理后血清蛋白,比较两者的差异蛋白质点,采用MALDI-TOF分析鉴定差异蛋白质.结果 血清经预处理后,可提高样品的上样量,2DE-PAGE图谱的蛋白质点数明显增加,水平条带明显减少.大肠癌患者血清中共筛选2个差异的蛋白点,经质谱鉴定为转甲状腺素蛋白( transthyretin,TTR)和细胞角蛋白1(cytokeratin-1,CK-1).其中TTR在大肠癌患者血清中为低表达,而CK-1为高表达.大肠癌患者血清中TTR含量为(245.87±60.72) mg/L,明显低于大肠腺瘤组和正常血清组[分别为(299.53±67.91)、(311.31±67.01) mg/L,P＜0.01].结论 2DE-MS技术是筛选和鉴定疾病血清标志物的良好工具,TTR可能是大肠癌潜在的血清标志物.     

斯氏按蚊黑化包被约氏疟原虫卵囊时血淋巴蛋白的二维电泳分析

目的以斯氏按蚊-约氏疟原虫为模型,用二维电泳技术分析比较约氏疟原虫感染后雌性斯氏按蚊吸饲硝喹蔗糖水和蔗糖水蚊血淋巴蛋白差异.方法用挤压法分别收集吸硝喹糖水3 d、吸感染血和吸蔗糖水雌斯氏按蚊成蚊血淋巴,Bradford法检测血淋巴蛋白浓度,继而对血淋巴进行双向电泳,凝胶考马斯亮蓝染色,ImageMaster VDS-CL对二维电泳凝胶蛋白斑点扫描和用ImageMaster 2D Elite软件进行蛋白质斑点自动分析.结果用药组血淋巴蛋白浓度总是低于吸感染血组和吸糖水组,用药组蚊血淋巴蛋白点有101个,对照组有115个,有51个蛋白点相同.50个仅在用药组中检测到,64个仅在对照组中检测到;蛋白点的分子量和等电点主要位于(40～60)×103和碱性端.结论二维电泳技术可直接反映蛋白质的差异,其蛋白浓度和白点的差异与硝喹诱导疟原虫卵囊黑化有关.     

MHCⅠ类分子在内质网中的组装研究进展

MHCI类分子在内质网中组装形成肽 MHC复合体。抗原肽主要来自于胞内蛋白 ,在蛋白酶体作用下形成的 8～ 10个氨基酸小肽。内质网中的多个伴侣分子与I类分子相互作用形成肽组装复合体。这些伴侣分子对于Ⅰ类分子的有效组装以及配体的选择均有重要作用。