β-catenin在四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化过程中的定位、表达及意义

目的 探讨肝纤维化发生过程中β-连环蛋白(β-catenin)定位、表达及意义.方法 健康雄性昆明小鼠(n=45)随机分为对照组(n=15)与实验组(n=30).实验组小鼠皮下注射50% 四氯化碳(CCl4)-粟米油混合液(6ml/kg),2次∕周,对照组皮下注射同等剂量的粟米油.各组分别于造模1周、4周和8周后取小鼠肝脏,常规制作石蜡切片,Masson染色及Desmin免疫组织化学法观察比较不同组别小鼠肝纤维化病理变化,RT-PCR及免疫组织化学方法检测不同时间点各组小鼠肝组织内β-catenin的表达及定位.结果 Masson染色结果显示,对照组肝汇管区结缔组织内及血管壁有少量细小纤维,实验组小鼠肝脏汇管区和中央静脉及其周围胶原纤维增多;随损伤时间延长纤维增生愈加明显.Desmin免疫组织化学结果显示,各组别均有阳性表达,但损伤组各时间点desmin阳性表达细胞数明显高于对照组(P<0.05 或P<0.001).RT-PCR结果显示,CCl4损伤1周后肝内β-catenin mRNA水平与对照组相比无明显差别(P＞0.05),损伤4周及8周β-catenin mRNA水平则明显下降,与对照组相比差异均有显著性(P<0.01).免疫组织化学结果显示,对照组β-catenin弱表达于肝细胞膜及胆管上皮细胞膜和胞质,而损伤组β-catenin阳性反应主要定位于肝内增生的细胞团及新生胆管上皮细胞质,各组间积分吸光度值差别有显著性(P<0.01).结论 CCl4诱导的肝纤维化过程中β-catenin mRNA表达与蛋白表达不同步,阳性表达细胞主要为新生的细胞团及胆管上皮细胞.     

慢病毒介导的RNA干扰HMGA2基因表达对HL-60细胞增殖及细胞周期素B2、A2表达的影响

目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰沉默高迁移率族蛋白A2(HMGA2)基因表达对人急性白血病细胞系HL-60细胞增殖及细胞周期素(cyclin) B2、cyclin A2表达的影响.方法 制备表达HMGA2基因短发夹RNA(shRNA)的重组慢病毒载体,转染HL-60细胞.通过半定量RT-PCR和Western blot检测特异性shRNA转染后HL-60细胞HMGA2基因表达;CCK-8法检测细胞增殖抑制率;软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术(FCM)检测细胞周期; RT-PCR及Western blot检测cyclin B2、cyclin A2 mRNA和蛋白表达水平.结果 RT-PCR和测序证实,成功构建了表达HMGA2 shRNA的重组慢病毒载体;RT-PCR和Western blot证实经嘌呤霉素筛选出的阳性克隆转染的HL-60细胞HMGA2 mRNA和蛋白表达水平与空载体组相比明显受抑,抑制率分别达(80.66 ± 7.98)%和(76.35±12.72)%;CCK-8比色结果显示,HMGA2表达受到稳定干扰的HL-60细胞增殖活力明显受到抑制,细胞增殖曲线低平,缺乏指数增殖特征.FCM检测显示,与对照组相比,转染特异性shRNA的HL-60细胞出现了明显的G2/M期阻滞,G2/M期细胞分别为(13.90±4.07)%和(30.00±5.78)%(P<0.05).HMGA2特异性shRNA转染的HL-60细胞cyclin B2 mRNA和蛋白表达与未转染细胞相比,抑制率分别为(67.55±7.69)%和(51.77±4.81)%(P<0.01).而cyclin A2的表达无明显改变.结论 HMGA2基因沉默可下调cyclin B2表达,从而使细胞出现明显的增殖抑制和G2/M期阻滞.     

不同性别小鼠化学性肝损伤后的肝再生能力比较

背景:肝脏再生能力受多重因素的影响,而性别是否是再生修复过程的一个重要因素尚无定论。目的:比较不同性别小鼠化学性肝损伤后肝脏再生能力是否有差异。方法:采用四氯化碳小鼠皮下注射方法建立急性化学性肝损伤模型。120只昆明小鼠随机均分为糖原染色组和5-溴脱氧尿嘧啶核苷组,各组再按照性别均分为雌雄两组,于造模后第1,3,5,7,10天完整取下小鼠肝脏并称质量,取材前称量小鼠体质量。结果与结论:造模后第7天雌性鼠恢复原肝质量/体质量比,而雄性鼠则表现为下降趋势,不同性别小鼠肝质量/体质量比在各时间点差异无显著性意义(P>0.05);四氯化碳诱导的急性肝损伤主要部位为肝小叶周围的门管区及界板区,损伤部位肝细胞出现脂肪变,少数肝组织出现点状坏死;损伤后1,5,7d雌性小鼠糖原染色明显强于雄性组(P<0.05);肝损伤后3d雌性鼠肝脏5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记指数高于雄性小鼠(P<0.05),而第1,5,7,10天则未见明显差异(P>0.05)。说明肝损伤后雌性鼠的再生修复比雄性鼠强,于第7天完成修复。不同性别的昆明小鼠对四氯化碳诱导的急性肝损伤后恢复期中肝脏再生能力具有差异性。     

EZH2与β-catenin在骨肉瘤中的研究进展

果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)是多梳抑制复合物(polycomb repressor complex 2,PRC2)的催化核心蛋白,能够催化组蛋白3的27位赖氨酸的三甲基化(H3K27me3),然后沉默与细胞分化、抑制增殖相关基因的表达,导致肿瘤的发生。β-连环蛋白(β-catenin)作为经典Wnt/β-catenin信号通路上关键的效应分子,在细胞的生长及分化中发挥着重要作用,影响着肿瘤的形成。骨肉瘤是青少年常见的原发性恶性骨肿瘤,以往的研究证实EZH2和β-catenin都参与其中,但是二者在它的发生发展中是否存在关联,尚无研究报道。本文就EZH2及β-catenin在骨肉瘤中的研究进展作一综述。     

肝硬化部分切除后肝再生及结构变化

背景：肝脏自身具有强大的再生能力,临床资料显示大部分肝癌患者合并有肝硬化,切除肿瘤后肝脏质量可逐渐恢复,提示硬化的肝脏仍具备修复潜能。目的：尝试用肝部分切除方法诱导小鼠硬化肝组织内具再生能力的细胞增殖,观察再生肝脏的结构变化。方法：使用CCl₄皮下注射方法制备小鼠肝硬化模型。对肝硬化小鼠行肝部分切除,于切除后1,3,5,7,10,14及21 d取小鼠肝组织并称质量。观察比较肝部分切除后不同时间小鼠再生肝组织的结构变化;评估肝再生率;免疫组化方法分析肝星形细胞标志分子结蛋白及肝星形细胞活化标志分子α-平滑肌肌动蛋白的表达变化;5-溴脱氧尿核苷标记技术对增殖细胞进行定性、定位。结果与结论：肝硬化小鼠肝部分切除后第1,3,5,7,14,21天肝再生率分别为6.58%,22.03%,21.39%,29.05%,45.22%,50.98%。苏木精-伊红染色和Masson染色显示CCl₄注射8周后呈早期肝硬化病理改变,肝部分切除后肝组织结构逐步改善。免疫组化结果显示肝部分切除后第1天再生肝组织内结蛋白表达减少,但第3天至第14天呈上升趋势,21 d则明显减少;肝再生过程中各时间点α-平滑肌肌动蛋白表达依时递减。5-溴脱氧尿核苷阳性细胞在肝部分切除后1-7 d主要为肝细胞,肝部分切除后14-21 d阳性细胞定位于肝血窦内皮及窦腔内。结果表明早期肝硬化小鼠大部肝切除后3 d出现明显的再生反应,并逐步恢复正常的肝组织结构。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

不同性别小鼠化学性肝损伤后的肝再生能力比较

背景：肝脏再生能力受多重因素的影响,而性别是否是再生修复过程的一个重要因素尚无定论。 目的：比较不同性别小鼠化学性肝损伤后肝脏再生能力是否有差异。 方法：采用四氯化碳小鼠皮下注射方法建立急性化学性肝损伤模型。120只昆明小鼠随机均分为糖原染色组和5-溴脱氧尿嘧啶核苷组,各组再按照性别均分为雌雄两组,于造模后第1,3,5,7,10天完整取下小鼠肝脏并称质量,取材前称量小鼠体质量。 结果与结论：造模后第7天雌性鼠恢复原肝质量/体质量比,而雄性鼠则表现为下降趋势,不同性别小鼠肝质量/体质量比在各时间点差异无显著性意义(P > 0.05);四氯化碳诱导的急性肝损伤主要部位为肝小叶周围的门管区及界板区,损伤部位肝细胞出现脂肪变,少数肝组织出现点状坏死;损伤后1,5,7 d雌性小鼠糖原染色明显强于雄性组(P < 0.05);肝损伤后3 d雌性鼠肝脏5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记指数高于雄性小鼠(P < 0.05),而第1,5,7,10天则未见明显差异(P > 0.05)。说明肝损伤后雌性鼠的再生修复比雄性鼠强,于第7天完成修复。不同性别的昆明小鼠对四氯化碳诱导的急性肝损伤后恢复期中肝脏再生能力具有差异性。     

表皮干细胞仿生膜对毛囊细胞修复创面的影响

目的 选择新生1d大鼠表皮干细胞(ESCs)接种在胶原修饰几丁质膜(C-CBM),构建具有生物活性的覆盖物,评估其修复效果及应用前景.方法 将16只裸鼠随机分4组(n=4):Ⅰ型胶原组(A组)、几丁质膜组(B组)、几丁质膜+ ESCs组(C组)和Ⅰ型胶原修饰几丁质膜+ESCs组(D组),制备裸鼠背部全层皮肤缺损模型,术后定期取材,组织包埋切片,苏木素-伊红(HE)染色,免疫组织化学检测CD34和CD200表达,观察创面早期滤泡性毛囊增生情况.结果 6周创面愈合皮肤以D组修复较好,肉眼观察创面较厚、红润,有皮纹;A组和B组的修复则较薄、呈淡紫色,易出血;C组愈合较慢;并发现表皮巢形成有规律地增多,D组＞C组＞B组＞A组;D组CD34和CD200在手术后3d开始有毛囊干细胞增生,CD34表达延续到第4周,CD200表达延续到第6周,而C组CD34出现在第4周后,CD200出现在7d,D组是C组的2倍,A组和B组新生毛囊干细胞较少.结论 ESCs在C-CBM上生长良好,细胞可利用胶原的天然材料的黏附性,充分扩展,并参与创面修复,这些结果显示仿生膜有可能成为诱导性生物材料.     

创伤性髋部异位骨化关节镜下切除治疗一例并文献回顾

本文报道一个因严重外伤继发创伤性髋部异位骨化的病例,病人因车祸伤致全身多发骨折,继发创伤性异位骨化,表现为髋部疼痛及活动受限,经保守治疗无效后,行髋关节镜下异位骨化切除术,术后远期随访效果满意,病人恢复正常生活和工作。通过文献复习,详述近年来国内外关于创伤性异位骨化的临床报道,并讨论关节镜手术治疗该疾病的临床应用价值。