约氏疟原虫丝/苏氨酸磷酸酶5抗血清对有性阶段生长抑制作用的研究

目的:探讨约氏疟原虫丝/苏氨酸磷酸酶5(PyPP5)作为传播阻断疫苗候选抗原的可行性。方法:PCR扩增PyPP5蛋白优势抗原表位,克隆入pET32a (+)载体。IPTG诱导PyPP5重组蛋白(rPyPP5)表达后,纯化并免疫小鼠获取抗血清。体外实验观察抗-PyPP5免疫血清对配子体出丝、动合子形成和转化率的影响。结果:成功制备抗-PyPP5免疫血清。抗-PyPP5免疫血清(1∶5倍稀释)使配子体出丝率、动合子数目和动合子转化率分别下降29.89%(P<0.05)、38.59%(P<0.05)和64.30%(P<0.01)。结论:PyPP5蛋白具有良好的抗原性。抗-PyPP5免疫血清可有效抑制约氏疟原虫传播。     

约氏疟原虫丝/苏氨酸磷酸酶6免疫血清对原虫有性阶段发育抑制作用的研究

为探讨约氏疟原虫丝/苏氨酸磷酸酶6(Plasmodium yoelii Protein Phosphatase 6, PyPP6)作为传播阻断疫苗候选抗原的可行性,采用PCR扩增PP6优势抗原表位并克隆入pET32a(+)载体,诱导PyPP6重组蛋白(rPyPP6)表达与纯化,免疫小鼠获取抗-PyPP6免疫血清(anti-PyPP6)。采用ELISA和Western Blot方法检测anti-PyPP6血清效价和特异性,IFA检测PyPP6蛋白在约氏疟原虫各期定位,体内外实验检测anti-PyPP6血清对雄配子出丝、动合子形成和卵囊发育的影响。结果显示,成功诱导rPyPP6表达,anti-PyPP6血清抗体滴度为1:128000,PyPP6部分定位于约氏疟原虫质膜。与对照组相比,anti-PyPP6免疫血清1∶5倍稀释可显著抑制61.5%配子体出丝,动合子数目和动合子转化率分别降低了75%和19.7%,卵囊形成数量减少了35%。结果表明,PyPP6重组蛋白具有良好的免疫原性和抗原性,抗-PP6免疫血清具有显著的传播阻断效果。     

缅甸流行区间日疟原虫Duffy结合蛋白的基因多态性和自然选择分析?

为明确缅甸流行区间日疟原虫红内期疫苗候选抗原Duffy结合蛋白(DBP)的基因多态性特点,提取20例缅甸流行区(Bilin和Paletwa)间日疟原虫基因组DNA,通过PCR扩增和测序检测,参考Mandalay流行区(缅甸)相应序列,对pvdbp-Ⅱ基因进行多态性分析。结果表明,各流行区pvdbp-Ⅱ基因的π值分别为0.002、0.009和0.002,且d_N/d_S均大于1。中性检验表明各流行区pvdbp-Ⅱ基因处于阳性选择;pvdbp-Ⅱ基因在Bilin和Mandalay流行区存在基因重组,各流行区群体间存在不同程度的遗传分化,H14是21种不同的单倍型中出现频率最高的单倍型。Pvdbp-Ⅱ基因存在多态并经历阳性选择,提示其作为红内期疫苗候选靶点;H14高频率的出现,提示以其为基础研制pvdbp-Ⅱ基因作为红内期疫苗候选抗原的可能性。