异亮氨酸改善上消化道出血患者肝脏和肌肉蛋白合成功能

2007年3月出版的《肝脏病学》杂志上（Hepatology，2007，45：560-568）Damink等通过经鼻胃内灌注氨基酸溶液模拟肝硬化患者上消化道出血（UGB）发作，同时静脉注射异亮氨酸，结果发现异亮氨酸可以明显改善“出血患者”肝脏和肌肉的蛋白合成功能，有望成为治疗并改善UGB预后的一个新方法。     

非酒精性脂肪肝与胆石症的关系

目的 探讨非酒精性脂肪肝与胆石症的关系，为临床预防与治疗提供理论依据。方法 以B超室进行肝胆检查的门诊、住院患者及健康体检者为研究对象，检测血脂、血糖、体重、身高。结果 资料完整的1356例检查者中，非酒精性脂肪肝并发胆石症的患病率明显高于其他疾病引起的脂肪肝组（19．6％ vs 7．5％，χ^2=30．317，P=0．000）；胆石症组的非酒精性脂肪肝患病率亦显著高于非胆石症组（31．7％ vs 13．3％，χ^2=30．317，P=0．000）。且非酒精性脂肪肝合并胆石症的比率显著低于胆石症患者合并非酒精性脂肪肝的比率（19．6％ vs 31．7％，P=0．000）。结论 非酒精性脂肪肝与胆石症关系密切，可能有共同的发病危险因素。     

抗体库优化策略对特异性抗肝癌单链抗体的人源化

目的:对特异性抗肝癌单链抗体(single chain variable fragment,scFv)DM同步进行人源化和优化,以获得亲和力高和免疫原性低的人源化抗肝癌单链抗体.方法:通过分子结构和序列分析,确定对抗原结合位点的构象有重要影响的骨架区(FR)残基,把难以判断回复突变残基的人、鼠源副本同时编入人源化抗体序列中;通过重叠延伸PCR技术合成人源化抗体全基因,利用噬茵体展示技术构建人源化组合抗体库;通过肝癌细胞筛选阳性克隆,ELISA方法测定各个克隆抗原结合活性;用硫氰酸盐洗脱法测定并比较亲本抗体和人源化scFv的相对亲和力.结果:成功构建人源化组合抗体库,实际库容4.77×10 5,包含由2 5不同重链和2 2不同轻链组成的128种人源化DM;经过筛淘及ELISA鉴定,获得HDM1、HDM2和HDM3 3个阳性克隆,相对亲和力指数分别为HDM1 1.6 mol/L、HDM2 1.2 mol/L和HDM3 2.2 mol/L.结论:抗体库优化法是一个高效、简便的人源化方法;获得的3株阳性克隆HDM1、HDM2、HDM3与亲本抗体DM同样具有良好的抗原结合特异性和较高的亲和力.     

蜱叮咬伴特发性肺纤维化1例

患者,男,63岁,因左足趾蜱虫咬伤40余天,伴咳嗽1周于2014年8月1日入院。患者40余天前在当地山区中行走时左足第三、四足趾间不慎被蜱虫咬伤,被咬处感刺痛、麻木、肿胀,强行拔除虫体后到当地医院就诊,诊断为蜱虫咬伤,局部给予碘伏消毒、外涂抗生素软膏等处理。以后一直感局部不适、稍肿痛。1周前出现咳嗽,咳少量痰,间断胸闷,遂就诊于我院,入住普通外科。既往有吸烟史20余年;否认肺炎、支气管哮喘、结核病等呼吸系统疾病病史。     

以剧烈呕吐为首发症状的甲状腺功能亢进一例

患者女，30岁。因“反复呕吐半月余”于2006年5月15日入院。患者入院前半月余无明显诱因剧烈呕吐黄绿色胃内容物，非喷射性，餐后明显，每日10余次，伴恶心、腹胀、头晕、乏力。无反酸、烧心、腹痛、心悸、头痛等不适。精神、胃纳欠佳，尿量略减少，大便正常，体重减轻约10kg。体检：     

携带融合基因穿梭质粒的构建及在人肝癌细胞中的表达

构建携带胸苷激酶(tk)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因穿梭质粒,并观察其在肝癌细胞系HepG2细胞中的表达。应用基因重组技术,构建EGFP与tk的融合表达穿梭质粒载体,经限制酶切鉴定和测序分析,脂质体转染将其导入HepG2中,48h后用荧光显微镜观察荧光的表达,RT-PCR法检测融合蛋白tk和EGFP的mRNA表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测转染融合蛋白载体后不同浓度的更昔洛韦(GCV)对HepG2细胞的细胞毒作用。酶切鉴定和测序分析证实重组质粒中插入融合目的基因片断及载体DNA大小、方向和插入位点正确,在转染此穿梭质粒的HepG2细胞中检测到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR检测到融合蛋白tk和EGFP的mRNA表达;GCV对转染了携带tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体有明显的细胞毒作用。成功构建携带tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体,转染人肝癌细胞株HepG2中tk和EGFP的独立表达没有受到影响,该载体可利用绿色荧光蛋白作为报告基因监测tk的表达并可用于肝癌的自杀基因治疗。     

乙型肝炎病毒X蛋白通过降低P4启动子甲基化水平上调人IGF-II基因的转录

目的:构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝癌细胞株HepG2-HBx,探讨HBx对胰岛素样生长因子 II(IGF-II)基因P4启动子甲基化水平及转录表达的影响。方法:应用基因重组技术,构建含HBx基因的重组逆转录病毒载体pBABE-puro-HBx,采用磷酸钙共沉淀法将其转染293FT包装细胞产生逆转录病毒,感染HepG2肝癌细胞,采用嘌呤霉素进行阳性克隆筛选,Western blotting鉴定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-HBx。采用亚硫酸氢盐测序法及实时荧光定量RT-PCR检测HepG2-HBx细胞中P4启动子甲基化水平及P4 mRNA表达水平变化。进一步将体外甲基化的人IGF-II基因P4启动子驱动的荧光素酶报告载体pGL3-P4及含HBx基因的pCMV-tag2B-X质粒共转染HepG2肝癌细胞,采用亚硫酸氢盐测序法及双萤光素酶实验检测pGL3-P4载体上P4启动子甲基化水平及转录调控活性变化。结果:(1)经Western blotting鉴定,成功构建了稳定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-HBx;(2)表达HBx蛋白的HepG2-HBx细胞中P4启动子甲基化CpG位点的比例(9.0%)明显低于对照细胞HepG2-control(25.0%)(P<0.01),而其P4 mRNA表达水平则为对照细胞HepG2-control的2.8倍;(3)共转染pCMV-tag2B-X质粒的HepG2细胞中pGL3-P4载体上P4启动子甲基化CpG位点的比例(60.8%)明显低于共转染对照质粒pCMV-tag2B的HepG2细胞(84.1%)(P<0.01),而前者P4启动子相对萤光素酶活性(14.12±0.89)则明显高于后者(4.61±0.76)(P<0.01)。结论:HBx蛋白可降低IGF-II基因P4启动子甲基化水平,进而上调其转录表达。     

适量饮酒与脂肪性肝病或非酒精性脂肪性肝病发病风险的Meta分析

目的 系统评价适量饮酒与脂肪性肝病(FLD)或非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病风险的关系.方法 检索PubMed、EMbase、Wed of Science、The Cochrane Library、中国知网(CNKI)、万方数据库、维普数据库(VIP)中关于适量饮酒与FLD或NAFLD发病风险关系的研究.检索时限从建库至2015年11月.采用Stata12.0统计软件进行Meta分析.结果 共纳入16个研究,包括13个横断面研究,2个横断面加纵向研究,1个队列研究,研究对象共计76967例.Meta分析结果显示:①微量及少量饮酒可使FLD或NAFLD的发病风险分别降低17％及27％,而中量饮酒组边缘性地与FLD或NAFLD的发病风险降低相关.②不同性别亚组结果显示:女性微量及少量饮酒可使FLD或NAFLD发病风险分别降低29％及33％,但女性中量饮酒与对照组相比无统计学差异;男性少量饮酒可使FLD或NAFLD发病风险降低23％,但男性微量及中量饮酒与对照组相比无统计学差异,亚洲男性少量及中量饮酒可使FLD或NAFLD的发病风险分别降低29.7％及30.3％.结论 适量饮酒可能不增加FLD或NAFLD的发病风险;相反,女性微量及少量饮酒可显著降低FLD或NAFLD的发病风险,而男性,尤其是亚洲男性少量及中量饮酒亦可显著降低FLD或NAFLD的发病风险.     

姜黄素对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的　观察姜黄素对体外培养肝星状细胞 (HSC)增殖与凋亡的影响。方法　不同浓度姜黄素处理HSC株HSC T6 ,MTT法检测细胞增殖 ,流式细胞仪、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果　在 2 0～ 10 0 μmol/L浓度范围内 ,姜黄素可剂量依赖性地抑制HSC增殖 (P <0 .0 1)。 2 0、4 0、6 0 μmol/L姜黄素处理HSC 2 4h后 ,细胞周期分析发现S期细胞减少 ,G2 /M期细胞显著增加 (P <0 .0 1) ;流式细胞术检测到明显的亚G1峰 ,各组的凋亡指数 (% )分别是 15 .3± 1.9,2 6 .7± 2 .8,37.6± 4 .4 ,与对照组 (1.9± 0 .6 )相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;4 0 μmol/L姜黄素作用 12、2 4、36、4 8h ,凋亡指数 (% )分别是 12 .0± 2 .4、2 6 .7± 3.5、33.8± 1.8和 4 9.3± 1.6 ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;透射电镜观察到细胞皱缩、核染色质浓缩沿核膜排列和凋亡小体形成等 ;琼脂糖凝胶电泳可见到明显的DNA梯带形成。结论　姜黄素可显著抑制HSC增殖 ,使细胞周期停滞于G2 /M期 ,并诱导其凋亡 ,其作用具有时间和剂量依赖性