RET 基因p.M918T 突变导致多发性内分泌肿瘤-IIb 型1例

多发性内分泌肿瘤-IIb 型(multiple endocrine neoplasia type-IIb，MEN-IIb)是一种罕见的由RET基因突变 引起的常染色体显性遗传病，具有特殊的临床表型，如黏膜神经瘤、类马方综合征体型、甲状腺髓样癌及嗜铬细胞 瘤等。临床医生对此病认识不足，诊断往往延迟。2018 年11 月中南大学湘雅三医院收治了1 例MEN-IIb 患者，该患 者自幼有舌黏膜神经瘤，曾因二尖瓣脱垂及脊柱畸形接受手术治疗，于22 岁时被诊断为甲状腺髓样癌并接受手术治 疗，但直至28 岁发现嗜铬细胞瘤才临床诊断为MEN-IIb。基因检测提示该患者携带一新发RET基因p.M918T杂合突 变。在临床工作中早期识别内分泌系统以外的临床表现并进行RET基因筛查是早期诊断及治疗的关键。     

老年2型糖尿病合并血管并发症患者血白细胞和游离脂肪酸的变化

目的研究2型糖尿病(T2DM)和T2DM合并血管并发症患者血白细胞和游离脂肪酸(FFAs)的变化及其相关性，探讨白细胞和游离脂肪酸在T2DM血管并发症发生中的作用．方法用血细胞计数法测定38例T2DM伴血管并发症组、22例T2DM无血管并发症组及20例正常人组的白细胞数，用发色底物法测定三组病人的空腹血清FFAs水平，并将白细胞数与FFAs浓度做相关性分析。结果(1)DM组与正常对照组比较，血白细胞计数、游离脂肪酸水平显著升高(P＜0．05)。(2)T2DM有血管并发症组与无血管并发症组比较，血白细胞计数、游离脂肪酸水平显著升高(P＜0．05)。(3)有并发症组白细胞数与FFAs呈显著正相关(r=0．366，P＜0．05)，FFAs与无并发症组亦呈正相关(r=0．424，P＜0．05)。结论T2DM合并血管并发症患者血白细胞数、FFAs升高，白细胞可与FFAs一样作为非特异性炎症的生物标志物。     

低深度全基因组测序检测以甲状腺功能减退起病的Williams-Beuren综合征一例

目的探讨1例不明原因智力低下、生长发育迟缓、具有特殊面容及甲状腺功能减退的5岁男性患儿的临床表型和遗传学病因。方法用常规G显带技术分析患儿及其父母染色体核型,应用全外显子组测序及低深度全基因组测序技术(low-coverage massively parallel CNV sequencing,CNV-seq)对患儿进行可能致病突变及染色体拷贝数变异的分析。结果患儿染色体核型为46,XY,其父母未见明显的染色体异常。CNV-seq分析显示患儿在染色体7q11.23区域存在大小为1.56 Mb的杂合性缺失,缺失区域包含24个编码蛋白质的基因,其缺失与Williams-Beuren综合征相关。通过对其父母检测CNV-seq,发现该缺失为一新发缺失。结论本研究用CNV-seq技术确诊了1例以甲状腺功能减退起病的Williams-Beuren综合征患儿,有助于提高临床医师对Williams-Beuren综合征表型与发病机制的认识。     

pEGFP-C3 -insig2融合基因真核表达质粒的构建、表达及其对下游基因的影响

目的：构建insig 2基因的真核表达质粒, 转染3T3-L1细胞并观察对下游脂肪酸结合蛋白（AP2）mRNA、脂联素mRNA表达的影响.方法：采用RT-PCR法获取小鼠全长insig 2基因, 并克隆入真核表达载体pEGFP-C3中.酶切、测序鉴定后, 经脂质体转染入3T3-L1细胞, 通过荧光显微镜观察及RT-PCR检测其在3T3-L1细胞中的表达及下游基因的变化.结果：成功地构建了pEGFP-C3-insig 2融合基因的真核表达载体, 荧光显微镜观察到pEGFP-C3-insig 2融合蛋白在转染的3T3-L1细胞胞质中的表达, insig 2基因的转录明显上调.转染后24 h、 72 h较0 h AP 2 mRNA和脂联素mRNA的转录水平明显下调.结论：构建了insig 2基因的真核表达质粒, 在转染的3T3-L1细胞中insig 2的过表达可能影响该细胞的脂肪代谢.     

翻转课堂联合CBL在内科见习循证医学思维培养中的应用

目的探讨基于微信平台的翻转课堂联合案例教学法在内科见习循证医学思维培养中的应用效果。方法选取湘雅医学院临床医学本科八年制的学生50人作为研究对象,将其随机分为两组,每组各25人。实验组采用翻转课堂联合CBL(case-based learning,CBL)教学法,对照组采用传统授课教学法。教学完成后,通过问卷调查和理论考试的方式评价教学效果。结果翻转课堂联合CBL培养循证医学思维的教学法得到大多数学生的好评,实验组学生对教师授课方式的满意度高于对照组(92.0%vs. 64.0%),差异具有统计学意义(P 0.05)。理论考试成绩显示,两组理论知识和概念题成绩对比,差异无统计学意义(P 0.05);实验组学生病例分析成绩高于对照组,差异具有统计学意义(P 0.05)。结论在内科见习阶段开展翻转课堂联合CBL教学模式能够提高医学生的循证医学思维能力,激发学生的学习积极性。     

PAI-1和TNF-α在老年代谢综合征患者中的变化及二甲双胍对其影响

目的 探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与代谢综合征(Metabolic syndrome,MS)及并发冠心病发病的关系,并探讨二甲双胍对PAI-1、TNF-α及MS的影响.方法 老年MS患者60例,分成两组各30例:二甲双胍组予生活方式及二甲双胍干预治疗,生活干预组仅予生活方式干预.另选择同期健康体检者30例为对照组,发色底物法检测血浆PAI-1水平,ELISA法检测TNF-α水平.结果 (1)老年MS患者血PAI-1活性、TNF-α水平[(0.95±0.05)AU/ml、(24.81 ±3.87) ng/ml]明显高于对照组[(0.66 ±0.10) AU/ml、(1O.76±2.00) ng/ml](P＜0.001);(2)MS组合并CHD者血PAI-1活性、TNF-α水平[(0.96±0.05) AU/ml、(26.12±2.83) ng/ml]明显高于未合并CHD者[(0.94 ±0.03) AU/ml、(23.71±4.27)ng/ml](P＜0.05);(3)二甲双胍干预治疗能使PAI-1、TNF-α明显下降[△值分别为(0.20 ±0.17) AU/ml、(4.42±0.85 ng/ml),P＜0.01],并能有效改善MS的多种成分.结论 PAI-1、TNF-α参与老年MS及其并发症的发生,二甲双胍能降低这些患者的PAI-1及TNF-α水平,控制代谢综合征的各成分.     

二甲双胍治疗老年人代谢综合征临床观察及其对肿瘤坏死因子-α和抵抗素的影响

代谢综合征（metabolic syndrome,MS）是伴有胰岛素抵抗（IR）的一组疾病的聚集,其中以老年患者居多。我们通过比较老年MS患者和健康老年人血清中的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、抵抗素浓度及临床生化指标,分析老年MS患者的发病机理;并应用生活方式干预和生活方式＋二甲双胍对老年MS患者进行治疗,为老年MS患者的治疗提供依据。     

人TSARG4真核表达载体的构建及稳定转染HeLa细胞系的建立

目的: 构建人TSARG4基因真核表达载体,转染HeLa细胞,建立稳定转染TSARG4的HeLa细胞系.方法: 应用 RT-PCR从人睾丸中扩增TSARG4的开放阅读框(ORF),并将 PCR产物插入到pUCm-T载体中测序验证.随后,将TSARG4进一步克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中.用脂质体将经过测序、验证的pcDNA3.1(+)/TSARG4质粒转染HeLa细胞,通过G418筛选建立TSARG4稳定转染的HeLa细胞系.RT-PCR和组织原位杂交技术检测TSARG4在稳定转染的HeLa细胞系中的表达.结果: 成功构建了pcDNA3.1(+)/TSARG4表达质粒,建立了稳定转染的HeLa细胞系.RT-PCR和组织原位杂交检测结果表明,TSARG4基因在该细胞系中成功表达.结论: TSARG4真核表达载体成功构建和稳定转染HeLa细胞系的建立为进一步体外研究TSARG4的功能奠定了基础.     

全外显子组测序诊断2例Gitelman综合征

中南大学湘雅三医院内分泌科收治了2例疑诊Gitelman综合征的患者。抽取2例患者外周血进行基因组DNA抽提,然后采用全外显子组测序进行基因学检测,寻找致病位点,并通过生物信息学软件对突变位点进行功能分析。全外显子组测序及Sanger测序验证发现2例Gitelman综合征患者均携带SLC12A3基因复合杂合突变：c.486＿490delTACGGinsA、p.R943W、p.D486N及p.R928C。其中c.486＿490delTACGGinsA插入缺失突变将造成框移及蛋白质截短,而p.R943W、p.D486N及p.R928C突变经SIFT、PolyPhen2和Mutation Taster预测为有害。这4个突变既往均有报道,其中p.R943W为首次在中国人群中发现。Gitelman综合征临床较罕见,漏诊率高。对Gitelman综合征患者及早进行基因检测有助于明确病因及指导治疗。