高危型人乳头瘤病毒DNA检测在宫颈癌筛查中的作用

目的:探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)DNA检测在宫颈癌筛查中的作用。方法:2005年4月~2006年4月在我院妇科门诊就诊2 340名妇女进行宫颈癌前病变筛查,采用第2代杂交捕获试验(HC-Ⅱ)检测高危型HPV DNA联合薄层液基细胞学检查,同时进行阴道镜检查,并以宫颈活检的组织病理学为确诊标准。结果:筛查并经病理诊断为HPV感染365例,宫颈上皮内瘤变(C IN)Ⅰ级71例,C INⅡ48例,C INⅢ55例,宫颈浸润癌31例。以组织病理学为确诊标准,高危型HPV DNA检测C INⅡ、C INⅢ的敏感度是91.33%,特异度是74.51%,阳性预测值是5.21%,阴性预测值是99.79%。宫颈细胞学筛查C INⅡ、C INⅢ,以未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)为分界点的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别是90.80%、80.45%、12.30%、99.50%;以高度鳞状上皮内病变(HSIL)为分界点的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别是98.90%、73.98%、4.90%、100.00%。高危型HPV DNA在不同宫颈病变中的阳性率分别是:宫颈癌88.57%(31/35),C INⅢ91.67%(66/72),C INⅡ87.50%(56/64),C INⅠ42.00%(21/50)。结论:高危型人乳头瘤病毒DNA检测在宫颈癌前病变的筛查中有很高的敏感度和阴性预测值,高危型HPV DNA联合细胞学检查可使敏感度和阴性预测值有提高,但特异度未能提高。     

老年冠心病患者载脂蛋白B100基因突变的研究

目的探讨老年冠心病发病基因水平上的原因,为冠心病的诊断提供理论依据。方法采用ＰＣＲ与限制性内切酶ＭｓｐⅠ酶切的方法对１８３例老年冠心病患者进行了载脂蛋白Ｂ１００基因突变的研究。结果７４例心绞痛病例中,基因水平有改变者为１８例（２４．４％）;１０例心肌梗死患者基因水平有改变者３例（３３．３％）,余者基因水平无改变。结论老年冠心病患者中心绞痛和心肌梗死两类冠心病部分病人病因与其基因水平碱基突变有关。     

新型冠状病毒重组蛋白疫苗的构建、表达及鉴定

目的 利用毕赤酵母系统表达重组新型冠状病毒受体结构域蛋白RBD,以期作为新冠病毒重组蛋白候选疫苗。方法 选择新型冠状病毒的RBD(受体结合域)蛋白为靶点,通过基因工程技术将RBD基因序列克隆到毕赤氏酵母表达载体pPIC9K中。通过载体将外源基因整合到毕赤酵母染色体上,获得遗传性稳定重组子。毕赤氏酵母表达载体含有醇氧化酶基因的调控序列,加入甲醇进行诱导,通过前导信号肽引导外源蛋白的分泌表达。结果 成功将RBD基因序列克隆到表达载体中并整合到酵母染色体上,获得遗传性稳定重组子。能通过前导信号肽引导目的蛋白的分泌表达,表达产物免疫动物刺激产生高水平的血清IgG抗体,IgG抗体效价为1∶2.73×10⁶。结论 重组新型冠状病毒受体结构域蛋白RBD的设计具有可行性,为重组蛋白候选疫苗在预防新型冠状病毒感染中具有潜在的应用价值。     

H1N1亚型流感病毒mRNA候选疫苗的构建、表达及鉴定

目的 从mRNA序列优化和体外转录(IVT)系统优化角度,设计2条基于血凝素(HA)基因的抗H1N1亚型流感病毒mRNA疫苗,分别连接到3种体外转录系统(含不同UTRs序列)中进行候选疫苗抗原的表达及鉴定,并确定候选疫苗所使用的最佳体外转录系统。方法 确保抗原基因(HA)氨基酸序列不变,以2种优化策略对HA基因的密码子进行优化,分别命名为JLH1HA和JLHA,并分别克隆至骨架载体pGEM-T7-Hα(UTRs来自人源α球蛋白)、pGEM-T7-Mα(UTRs来自鼠源α球蛋白)、pGEM-n3(UTRs来自人源β球蛋白)上,通过线性化处理、体外转录、纯化及Cap1加帽处理,获得功能性mRNA,转染A549细胞后通过Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定目的蛋白的表达。结果 成功构建6组mRNA候选疫苗且均能表达抗原蛋白,以pGEM-T7-Hα为骨架载体构建的体外转录系统蛋白表达量较高。结论 抗原的设计具有可行性,筛选出的最优体外转录系统为以pGEM-T7-Hα为骨架载体构建的体外转录系统。密码子优化对蛋白表达量的影响并不显著,可能在动物免疫效果上能够体现。     

昆虫杆状病毒系统表达人流感多表位基因盒的研究

目的 通过昆虫-杆状病毒表达系统表达人流感病毒多表位基因盒,为进一步研发通用型流感疫苗提供实验依据。方法 将甲型流感病毒H1N1颈部区(345aa-566aa)和H1/H3/B亚型HA2片段经4GS Linker串联M2e及ferritin蛋白构成的HA2-M2e-ferritin(简称HMf),参照A/Jilin/JYT-01/2018(H1N1)毒株的全基因组序列,将其HA2基因和HMf基因序列按照昆虫细胞密码子偏好性进行优化合成,经两次双酶切后分别克隆至pFastBacTM双载体中。热激法将重组质粒转化入DH10BacTM大肠埃希菌感受态,含目的基因的pFastBacDual-HA2-HMf转移载体与DH10Bac的Bacmid质粒重组,构建重组转移质粒rBacmid-HA2-HMf。在脂质体介导下,用rB-HA2-HMf转染Sf9细胞进行重组杆状病毒的拯救。通过限制性酶双酶切、测序、重组Bacmid PCR、Western blot和间接免疫荧光法(IFA)鉴定目的蛋白的表达。用重组杆状病毒感染悬浮sf9细胞,收取细胞悬液,经超速离心、蔗糖密度梯度离心获得重组蛋白,利用透射电镜...     

PCR-SSCP在淋球菌氟喹诺酮耐药基因突变研究中的应用

目的 探讨用PCR-SSCP方法检测淋球菌氟喹诺酮耐药基因突变的研究。方法 自行设计gyrA基因特异性扩增引物，运用PCR-SSCP银染色方法检测基因突变。结果 在30例淋球菌临床分离株中选取13例，对其gyrA基因342bp扩增产物进行DNA序列测定，其91位和95位位点发生突变。结论 通过本研究所使用PCR-SSCP的方法检测临床分离出的淋球菌是否对氟喹诺酮耐药，并通过序列分析了解到淋球菌耐药基因突变以gyrA基因编码91位及95位点的氨基酸的碱基突变为主。通过此方法可以早期、准确、快速地检测出从临床获得的淋球菌菌株是否对氟喹诺酮耐药，从而指导临床用药及治疗。     

LBL结合PBL教学法在中医院校实验诊断学肝脏功能教学中的应用

目的 探讨LBL结合PBL教学方法 在中医院校实验诊断学肝脏功能教学中的教学效果.方法 分别采用LBL、LBL结合PBL的教学方法对A、B 2组学生就实验诊断学生化领域肝脏功能内容进行教学,评估两种教学方法的教学效果.结果 B组学生在理论知识考核及专业技能操作考核方面的表现均优于A组学生;调查问卷发现B组学生普遍认为LBL结合PBL的教学方法提高了自学能力、对肝脏功能的理解和临床应用能力.结论 LBL结合PBL教学法不仅能让学生巩固肝脏功能基本理论知识、提高临床应用能力,更培养和提高了学生的自主学习能力.     

产ESBLs肺炎克雷伯菌多重耐药性与Ⅰ类整合子的相关性研究

目的了解来源于不同临床标本的肺炎克雷伯菌的耐药性、携带第1类耐药整合子的特征及基因盒的种类。方法使用常规方法分离肺炎克雷伯菌;运用法国梅里埃VITEK细菌分析系统进行鉴定;应用PCR法扩增第1类整合子;应用纸片扩散法对22种抗生素进行耐药性监测和分析。结果 191株产ESBLs肺炎克雷伯菌中检测出Ⅰ类整合子178株,检出率为93.2%,Ⅰ类整合子阳性菌对氨基糖苷类、喹诺酮类及头孢菌素类药物表现出较高的耐药,其多重耐药率明显高于Ⅰ类整合子阴性菌株。结论Ⅰ类整合子广泛地存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中,Ⅰ类整合子对细菌多重耐药性的产生和传播起着重要作用。