循环胎儿DNA及其在产前诊断中的应用

孕妇血浆循环胎儿DNA的存在，为非损伤性的产前诊断开辟了一种新的途径，显示出极为广泛的临床应用价值。该文着重介绍了循环胎儿DNA的来源、特点及在产前诊断中的应用。     

γH2AX和53BP1蛋白在肺正常上皮细胞DNA氧化损伤反应中的表达

目的探讨肺正常上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBE)中磷酸化组蛋白H2AX(phosphorylated H2AX,γH2AX)和p53结合蛋白1(p53-Binding protein 1,53BP1)在DNA氧化损伤反应中的表达。方法用0、25、50、100、200、400μmol/L过氧化氢(H2O2)处理HBE细胞1 h,对其造成氧化损伤引起DNA双链断裂(double strand breaks,DSBs);CCK-8比色法检测H2O2对HBE细胞活性的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜检测HBE细胞核内γH2AX和53BP1蛋白的聚集情况,western blot检测γH2AX、53BP1、BRCA1蛋白的表达水平。结果与对照组比较,25μmol/L H2O2处理组细胞活性(1.07±0.01)升高,50、100、200、400μmol/L H2O2处理组细胞活性(分别为0.97±0.01,0.96±0.01,0.95±0.01和0.94±0.01)降低,差异具有统计学意义(F=50.35,P<0.01)。细胞凋亡检测结果显示,与对照组[(4.65±0.32)%]比较,50、100、200、400μmol/L H2O2处理组细胞凋亡率[分别为(7.54±0.57)%、(7.84±0.68)%、(8.40±0.50)%和(14.03±1.03)%]升高(F=35.879,P<0.01)。与对照组比较,经25、50、100、200、400μmol/L H2O2处理后γH2AX的平均荧光强度升高(F=223.97,P<0.01),而经50、100、200、400μmol/L H2O2处理后53BP1的平均荧光强度降低(F=117.78,P<0.01);western blot结果显示,随着H2O2浓度升高,γH2AX蛋白表达水平升高,BRCA1和53BP1的表达水平下降,差异均具有统计学意义(F分别为96.20,11.55,21.92,P均<0.01)。结论在H2O2导致HBE细胞的氧化损伤中,γH2AX可作为DNA氧化损伤标志物,但53BP1的表达下降提示HBE细胞可能通过其他途径进行DNA氧化损伤的修复。     

单细胞凝胶电泳检测非小细胞肺癌患者淋巴细胞DNA损伤

摘要：目的：探讨单细胞凝胶电泳（SCGE）检测淋巴细胞DNA双链断裂（DSBs）水平在非小细胞肺癌（NSCLC）诊疗中的应用价值。 方法：收集132例NSCLC患者、39例肺部良性疾病以及42例体检健康者血液标本,分离外周血淋巴细胞,用SCGE检测DNA DSBs情况,并分析尾部DNA百分含量（%Tail DNA）及Olive尾距（OTM）与NSCLC患者病理类型、临床分期和疗效间的关系。 结果：SCGE结果表明,NSCLC患者%Tail DNA和OTM均高于肺部良性病变组（t=2.637、2.460,P<0.05）及健康对照组（t=8.832、9.682, P<0.05）;NSCLC组%Tail DNA和OTM与患者病理类型及临床分期之间无关（P均>0.05）;NSCLC治疗有效患者治疗后淋巴细胞DSBs水平显著低于治疗前（P<0.05）。 结论：SCGE分析淋巴细胞DNA DSBs可能成为NSCLC辅助诊断和疗效评价的新指标。     

网吧环境和槟榔致口腔颊黏膜细胞DNA损伤研究

目的 研究网吧环境和槟榔对口腔颊黏膜细胞DNA的损伤。方法 通过系统抽样抽取长沙市岳麓区5家网吧,在网吧内及网吧所在社区通过单纯随机抽样的方法选取无吸烟、饮酒等习惯的18~40岁健康男性,分别作为对照组(n=50)、网吧上网组(n=41)、咀嚼槟榔组(n=47)、网吧上网且咀嚼槟榔组(n=58)。收集受试者口腔颊黏膜细胞标本,采用单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis, SCGE)及颊细胞微核试验(buccal micronucleus cytome, BMCyt)检测DNA损伤情况。结果 网吧上网组和咀嚼槟榔组较对照组SCGE尾部DNA百分含量(%Tail DNA)及BMCyt微核频率(‰MN)显著增高(P＜0.05)。网吧上网且咀嚼槟榔组较网吧上网组和咀嚼槟榔组%Tail DNA及‰MN均显著增高(P＜0.05)。DNA损伤程度与网吧上网累积时间和槟榔咀嚼量呈剂量效应关系。结论 网吧环境和槟榔可分别导致口腔颊黏膜细胞DNA损伤,两者同时暴露会进一步增加DNA损伤程度。     

FK228对HepG2细胞NF-κB活化及炎症因子转录的影响

目的:研究FK228对TNF-α诱导的人肝癌细胞HepG2核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活化及炎症因子IL-6、IL-8转录的影响。方法:培养的HepG2细胞分为对照组、TNF-α刺激组和FK228干预组。分别用TNF-α刺激和FK228+TNF-α共同作用,免疫印迹(Western blot)法分析细胞核中NF-κBp65及其细胞浆中抑制因子IκBα的表达;RT-PCR对炎症因子IL-6、IL-8 mRNA作半定量分析。结果:FK228(4～32μg·L~(-1))干预组与TNF-α刺激组比较,细胞核内NF-κB显著减少(P<0.01);FK228(8～32μg·L~(-1))减少胞浆中IκBα的降解且各组之间差异有统计学意义(P<0.01);FK228降低TNF-α诱导的IL-6、IL-8 mRNA表达,FK228干预组与TNF-α刺激组相比,差异具统计学意义(P<0.01)。结论:FK228减少胞浆中IκBα降解、阻碍NF-κB的过度活化可能是降低炎症因子释放、发挥抗炎作用的重要机制。     

车前草水煎液对氧自由基清除作用的研究

目的　研究车前草对氧自由基的清除作用。　方法　利用邻苯三酚自氧化体系产生超氧阴离子自由基 ( O·2 )及邻二氮菲 Fe2 / H2 O2 体系产生羟自由基 (· OH) ,采用分光光度法研究鲜车前草和干车前草水煎液对氧自由基的清除作用。　结果　鲜车前草及干车前草水煎液对 O·2 和·OH均有显著的清除作用 ( P<0 .0 1)。鲜车前草和干车前草水煎液对氧自由基清除作用无显著差异 ( P>0 .0 5 )。　结论　车前草抗氧自由基的药理作用可开发利用     

不断改革实验教学 提高学生实验能力

临床生化检验是一门实践性很强的学科。实验教学的核心是如何提高学生的实验能力，实验能力的培养也是一种智能的培养。我们所说的实验能力是一种综合实验能力，主要包括两个方面：即基本实验能力．表现在一般的实验技能，操作能力等；创造实验能力，加实验的总体设计、实验方向的选择、实验方案的确定、综合性分析、新知识的探索等方面。我们根据教学目的和培养方针，提出了教学要。夯实基础，适当提高”。所谓“夯实基础”．即注重学生基本实验能力的培养，给学生以规范的操作、全面的实验技术和方法；所谓“适当提高”．一方面将先进的技术、方法介绍给学生，另一方面给学生以基本的科研能力的培养。     

Silica-KI快速提取外周血基因组DNA的实验研究

目的 建立一种快速的外周血基因组DNA提取方法。方法 用硅胶-碘化钾(Silica—KI)吸附法直接从外周血提取基因组DNA。结果 提取的基因组DNA相对分子质量大，纯度较高，A260／280nm为1．75～1．93。每毫升外周血可获得25～35μg DNA，体外扩增和限制性内切酶酶切结果满意。结论 Silica—KI吸附法是一种简单、高效、快速、安全、适用于大量临床标本处理DNA的提取方法。     

三种肾脏病人血浆中抗碳酸酐酶Ⅳ抗体检测方法的建立

目的 建立使用间接酶联免疫吸附法（ELISA）检测人血浆抗碳酸酐酶Ⅳ抗体的方法，阐明血浆抗碳酸酐酶Ⅳ抗体滴度与肾病综征合（NS）、慢性肾小球肾炎（CGN）和2-型糖尿病肾病（2-DN）三种肾脏病的联系。方法 建立并使用间接ELISA法检测三种肾脏病人血浆中抗碳酸酐酶Ⅳ抗体的滴度。结果 成功建立使用间接ELISA检测人血浆抗碳酸酐酶Ⅳ抗体的方法，其特异性、稳定性和精密度均可靠。CGN和2-DN病人血浆抗碳酸酐酶Ⅳ抗体的滴度均显著高于对照（P〈0．05），NS病人血浆抗碳酸酐酶Ⅳ抗体的滴度与对照无统计学差异（P〉0．05）。结论用间接ELISA法检测人血浆抗碳酸酐酶Ⅳ抗体是可行的。在CGN和2-DN中，Ⅳ型碳酸酐酶可能是靶抗原，说明Ⅳ型抗碳酸酐酶抗体在肾脏疾病体液免疫方面的发生发展中起到了重要作用。