胃癌组织中核基质蛋白的变化

目的：研究胃癌组织核基质蛋白的改变。方法：应用SDS－PAGE技术及Geneools定量分析软件，对22例胃癌组织及正常组织的核心基质蛋白进行了研究，结果：胃癌组织与正常组织比较，Mr为30000，28000的核基质蛋白表达量明显减少（P＜0．05），不同分化类型及不同临床分期胃癌组织间比较，此种核基质蛋白表达量差异无统计学意义（P＞0．05），结论：胃癌组织中核基质蛋白的改变可能在肿瘤的早期已经发生，是胃癌发生的早期分子事件。     

胃泌素和5—羟色胺在胃癌和慢性萎缩性胃炎中的表达

应用ＰＡＰ免疫组织化学技术对胃泌素（ＧＡＳ）和５－羟色胺（５－ＨＴ）在胃癌和慢性萎缩性胃炎（ＧＡＳ）中表达的免疫反应性（ＩＲ）进行了研究。结果：在正常胃粘膜ＧＡＳ－ＩＲ（２６．５±６．２）明显高于５－ＨＴ－ＩＲ（９．２±４．３）。ＧＡＳ－ＩＲ和５－ＨＴ－ＩＲ在胃癌明显高于正常组织。在ＣＡＧ，ＣＡＳ－ＩＲ和５－ＨＴ－ＩＲ均显高于正常组织（Ｐ均〈０．０１）。ＧＡＳ－ＩＲ在低分化癌中表达增强，而５－Ｈ     

ras和erbB—2癌基因在胃癌,癌旁和正常组织的表达

应用ｒａｓ癌基因产物Ｐ２１蛋白一段氨基酸序列的合成肽的单克隆抗体ＥＢ２４１１和ｅｒｂＢ－２癌基因产物Ｐ１８５抗体，对人胃癌、癌旁和正常组织中ｒａｓ和ｅｒｂＢ－２的表达进行免疫组化研究，结果：Ｐ２１在正常、癌旁和癌组织的阳性率分别为１３．３％、７９．３％和６８．９％；阳性细胞数分别为（４．０±１．５），（２１．９±１０．４）和（１４７．２±４０．０）ｍｍ＾－２，三之间呈显性差异（Ｐ〈０．０１）。     

癌组织中p16基因甲基化分析

目的探讨抑癌基因p16在胃癌组织中是否存在甲基化异常及其与胃癌发生发展的关系.方法对20例胃癌组织及相应正常胃粘膜组织应用甲基敏感酶(HpaII)和甲基非敏感酶(MspI)酶切,结合PCR扩增技术,对p16基因外显子1、外显子2的二核苷酸胞嘧啶特定序列5'-CCGG-3'位点甲基化进行检测.结果20例胃癌组织中,p16基因外显子1、2异常甲基化分别为5例(25%)和9例(45%),正常组织未发现甲基化异常;14例高甲基化标本中,中分化胃癌4例,低分化7例,高分化1例;有2例存在外显子1、2同时甲基化异常,二者均为低分化胃癌,进展期胃癌(Ⅲa、Ⅳ期各1例)中1例呈现泳动易位;外显子2甲基化异常多发生于晚期肿瘤患者(P<0.05).结论p16基因甲基化异常可能会造成基因功能丧失,从而失去对细胞增殖的负性调控作用,导致胃癌发生与进展;外显子2高甲基化与临床进展有关,可能为晚期事件.     

胃癌组织p16基因微卫星DNA的不稳定性

目的：检测胃癌组织中p16基因D9s171、D9s1604微卫星位点杂合性缺失（LOH）,探讨p16基因微卫星不稳定性（MI）与胃癌发生发展的关系。方法：采用PCR－变性聚丙烯酰胺凝胶电泳－银染技术对20例胃癌和癌旁组织LOH进行分析。结果：癌组织D9s171和D9s1604的LOH分别为3例和10例,癌旁组织分别为2例和4例。两位点LOH发生率差异无显著性（P＞0．05）。胃癌组织较癌旁组织LOH发生率明显增高（P＜0．05）;早期胃癌与进展期胃癌两个微卫星位点LOH的发生率分别为50％（4／8）和58．3％（7／12）（P＞0．05）;两位点LOH发生存在相关性（P＜0．05）。结论：D9s171,D9s1604微卫星位点的LOH与胃癌的发生发展有关,而与癌细胞的分化程度或胃癌的临床分期无显著相关性。     

转化生长因子β1对人肝细胞癌HepG-2细胞株增殖的影响

目的 检测转化生长因子TGF-β1对人肝细胞癌HepG-2细胞株增殖的影响,探讨TGF-β1在原发性肝癌发病中的作用.方法 应用噻唑蓝(MTT)比色法检测TGF-β1对人肝细胞肝癌HepG-2细胞株增殖的影响,探讨其调控HepG-2细胞生长的浓度效应和时间效应.结果 TGF-β1对人肝细胞肝癌HepG-2细胞有增殖抑制作用(P＜0.05),且不同浓度TGF-β1(1.0～100.0)μg/L产生的效果不同.结论 TGF-β1对HepG-2细胞的增殖有抑制作用,短时间内在一定浓度范围内呈剂量依赖性.     

SV40T抗原真核表达载体的构建及表达

目的:构建SV40T抗原的特异性真核表达载体,并导入胃癌细胞株SGC7901进行表达鉴定.方法:扩增小鼠H /K ATPase β亚基启动子,与pMT18-T载体相连,并将其亚克隆至真核表达载体 pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)/HK; 从含有SV40T基因的pLITAg质粒酶切回收SV40T基因,与pcDNA3.1(-)/HK相连,构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV,同时构建非特异性表达载体pcDNA3.1(-)/SV,进行酶切及测序鉴定.用脂质体转染的方法将构建的载体导入胃癌细胞株SGC7901,PCR扩增基因组DNA,RT-PCR检测SV40T mRNA的表达.结果:限制性内切酶分析与测序结果显示,真核表达载体pcDNA3.1/HKSK构建成功;转染该载体的SGC7901细胞可检测到SV40T基因DNA的存在,且有SV40T mRNA的表达.结论:特异性表达SV40T基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV构建成功.     

不同胃癌细胞系中B7-H1分子的表达水平及定位

目的 通过检测胃癌细胞系SGC7901/VCR、SCC7901和BGC-823,以及永生化胃上皮细胞系GES中B7-H1的表达,探讨B7-H1与胃癌的发生及多药耐药(MDR)的关系.方法 上述细胞系培养于含10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基中,利用RT-PCR技术、细胞免疫化学染色以及细胞免疫荧光染色技术与流式细胞术检测4种细胞系中B7-H1 mRNA与B7-H1蛋白的表达情况,并比较其在4种细胞系中的表达强度.结果 B7-H1 mRNA在4种细胞系中均有表达,表达强度按照GES-1、BGC-823、SGC-7901、SGC-7901/VCR的顺序递增;细胞免疫化学染色与免疫荧光染色表明,B7-H1蛋白主要表达在上述细胞的细胞膜和少量细胞浆中.结合流式细胞术检测进一步证实,B7-H1蛋白在4种细胞系中的表达结果与mRNA的表达一致.结论 B7-H1表达在胃上皮细胞上,可能通过抑制机体免疫反应,促进胃癌细胞生长及MDR基因表达.     

ZAC基因在奥曲肽抑制胃癌细胞体外增殖通路的作用

目的 探讨ZAC基因在生长抑素类似物奥曲肽（OCT）抑制胃癌细胞增殖通路的作用。方法 分别以不同浓度OCT处理胃癌细胞BGC823和 SGC7901不同时间,MTT法筛选其增殖抑制的有效条件。OCT处理胃癌细胞（有效浓度/不同时间,有效时间/不同浓度）,Western blotting检测
OCT对胃癌细胞ZAC基因的效应。设计3条ZAC基因RNA干扰片段,分别插入pSUPER-EGFP-I载体,构建3个ZAC-shRNA表达载体（pSUPER-EGFP-ZAC/1 pSUPER-EGFP-ZAC/2和pSUPER-EGFP-ZAC/3）。经酶切和序列分析鉴定后,分别转染胃癌细胞BGC823和SGC7901。经G418筛选,RT-PCR鉴定,建立
ZAC基因敲低（knock-down）的胃癌细胞系。以有效条件OCT孵育胃癌细胞（对照组）和ZAC基因敲低胃癌细胞（实验组）,MTT法检测OCT对胃癌 细胞的生长抑制效应。结果 OCT抑制胃癌细胞增殖的有效条件为10nmol/L 孵育24h;OCT以时间和浓度依赖的方式诱导胃癌细胞ZAC基因表达。酶切及序列分析鉴定表明ZAC-shRNA表达载体构建成功。转染shRNA-ZAC/2的胃癌细胞,其ZAC mRNA水平明显降低（P<0.05）,为ZAC基因敲低胃癌 细胞。ZAC基因敲低胃癌细胞的增殖明显高于对应的BGC823细胞和SGC7901细胞（P<0.05）。OCT孵育后,BGC823细胞和SGC7901细胞的增殖明显降低（P<0.05）。然而,ZAC基因敲低胃癌细胞的增殖无明显改变（P>0.05）。结论 OCT以时间和浓度依赖的方式诱导胃癌细胞ZAC基因表达;ZAC 基因在OCT抑制胃癌细胞增殖通路中具有重要作用。     

医学英汉双语角在七年制组织学与胚胎学PBL教学中的应用

我国临床医学七年制的教育目标是培养高层次临床医学人才,要求学生掌握宽厚的医学知识和技能,具备一定的科研能力、终身学习能力和国际交流能力.通过教学实践我们认为以问题为基础的教学(problem based learning,PBL教学)在强化基础理论,锻炼临床思维等方面确有优势,然而单纯的PBL教学在提高专业外语能力方面的优势并不突出. 医学英汉双语角(medical English-Chinese corner,MECC)[1]是以提高七年制学生和来华留学生医学外语水平并有效促进其临床能力为目的,以医学知识水平近似的中外医学生为会话双方,以英汉两种语言为交流媒介,以医学知识为会话内容的,规定话题的,阶梯性语言训练模式.实践证明该模式在提高医学外语交流能力方面效果突出[2].因此,我们大胆将MECC与PBL结合起来在七年制组织学与胚胎学教学中进行实践,取得了较好的效果与反响.