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1.
目的:建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法:用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果:定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log(X)+25.99和Y=-3.409log(X)+24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论:用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。 相似文献
2.
妊娠可看作是一种成功的同种半异体移植.在这个过程中,母体免疫系统存在特殊的免疫调节,使胎儿不被排斥.妊娠早期人类白细胞抗原G,E,C(HLA-G,HLA-E,HLA-C)在绒毛外细胞滋养层表达,作用于免疫细胞,调节母体免疫.妊娠晚期胎盘产生细胞因子调节细胞免疫和体液免疫平衡,维持正常妊娠.如这种调节机制异常,会导致病理性妊娠,如子痫前期.对正常妊娠及子痫前期的免疫调节进行综述. 相似文献
3.
4.
患者,女,40岁,(5年前行女扎术)以反复右下腹疼痛1年,加剧3天为主诉入院。患者1年前无明显诱因出现右下腹疼痛,继而转移到右下腹钝痛,当即来我院急诊,拟为“急性阑尾炎”,经过抗炎、补液等治疗住院5天后,病情好转出院。3天前,患者出现右下腹持续性疼痛伴畏冷、发热,在当地医疗所打针服药(具体用药不详),病情未见缓解,于2000年6月4日21时来我院求治门诊,拟为“慢性阑尾炎急性发作”收入住院。其家属要求做阑尾切除术(因当时化验室人员进修未回,未做常规化验)当时体检面色稍白, 相似文献
5.
目的:探讨无精子症患者遗传学因素与性激素变化的关系。方法:采用回顾性方法对630例无精子症患者进行染色体核型分析,并采用化学发光法测定各组血清中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)和催乳素(PRL)水平。结果:630例无精子症患者中共检出染色体畸变110例,占17.46%,其中性染色体94例,占异常总数的85.45%,常染色体异常16例,占异常总数的14.55%,性染色体数目异常中Klinefelter综合征76例,占异常总数的69.09%;性激素检测中,无论核型正常与否,FSH、LH显著升高,T值降低,其差异有统计学意义(P<0.01),核型异常组FSH、LH升高更为明显。结论:无精子症与遗传因素及性激素改变密切相关,对无精子症患者进行遗传学检查、性激素检查是十分必要的。 相似文献
6.
异丙苯过氧化氢体内致大鼠睾丸和附睾过氧化的初步研究 总被引:3,自引:1,他引:2
目的:建立异丙苯过氧化氢(cHP)体内过氧化模型,探讨cHP体内过氧化对大鼠睾丸组织和附睾精子的影响,及对精子核DNA断裂的影响。方法:90日龄雄性W istar大鼠52只,设cHP 1/10 LD50、1/6 LD50、1/4 LD503个剂量组和对照组,cHP 1/10 LD50、1/6 LD50组和对照组每组大鼠12只,1/4 LD50组大鼠16只。用无菌生理盐水稀释70%cHP水剂配制,按2 m l/kg经腹腔每日1次注射,对照组给同体积生理盐水,观察一般中毒症状和体征。连续1周,最后1次给药24 h后处死动物。分光光度法测定睾丸组织匀浆、附睾头部和尾部精子丙二醛含量,用单细胞凝胶电泳检测睾丸生精上皮细胞、附睾头部和尾部精子核DNA断裂发生率,计数附睾尾部精子活动率,睾丸和附睾常规石蜡切片,苏木精-伊红染色观察病理变化。结果:给予cHP大鼠活动稍差,无死亡,1/6 LD50、1/4 LD50 cHP组体重降低明显(P<0.001)。1/6 LD50、1/4 LD50 cHP组大鼠睾丸和附睾精子丙二醛浓度均明显高于对照组,附睾尾部精子活动率均明显降低,睾丸生精上皮细胞和附睾头部精子核DNA断裂发生率明显高于对照组,附睾尾部精子核DNA断裂的发生率与对照组差异无显著性(P>0.05)。1/10 LD50 cHP组大鼠体重变化、睾丸丙二醛浓度、附睾尾部精子活动率、睾丸生精上皮细胞和附睾精子核DNA断裂与对照组比较,差异均无显著性(P>0.05)。结论:1/6 LD50、1/4 LD50 cHP能在体内使大鼠睾丸和附睾精子发生过氧化,并使细胞核DNA发生断裂,核DNA断裂的主要部位可能在睾丸组织,对附睾尾部精子核DNA断裂无明显影响。 相似文献
7.
8.
奥硝唑对大鼠精子的影响及作用机制探讨 总被引:6,自引:1,他引:5
目的: 探讨奥硝唑降低大鼠精子活动力的影响因素及作用机制。 方法: 20只SD大鼠随机分为低剂量组(n=5)、高剂量组(n=8)和正常对照组(n=7)。低剂量组和高剂量组分别给予 200、400mg/kg奥硝唑灌胃,正常对照组给予0. 5%羧甲基纤维素钠灌胃,连续 20d。末次给药 24h后戊巴比妥钠麻醉,取附睾及睾丸,观察精子密度、精子活动力;检测睾丸、附睾组织匀浆中乳酸脱氢酶、α 葡糖苷酶、丙二醛、果糖的浓度变化。观察睾丸与附睾有无形态学改变。 结果: 奥硝唑 200、400mg/kg,连续灌胃给药 20d,能显著降低精子活动力(P<0. 01),对精子密度无明显影响(P>0. 05)。与正常对照组比较,高剂量组乳酸脱氢酶水平明显降低 (P<0. 01),丙二醛含量明显升高(P<0. 05)。 结论: 奥硝唑通过增加细胞脂质过氧化产物丙二醛,抑制附睾中的能量转换酶或非蛋白类物质使精子细胞受损、活动力降低,这是奥硝唑致弱精子症动物模型的作用机制之一。 相似文献
9.
10.
目的 体外诱导和采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测人类B细胞产生的抗HLA抗体.方法 对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC)并体外培养5 d,以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原(PWM)、葡萄球菌A蛋白菌体(SAC)体外刺激PBMC,采用EHSA和ELISPOT方法分别测定培养上清中Ig浓度和抗体分泌B细胞数,探索体外诱导PBMC产生Ig的适宜方法.采用该刺激方法和HLA特异的ELISPOT法,诱导和检测9例拟行肾移植预致敏对象PBMC产生的抗HLA抗体.结果 与PWM单刺激相比,PBMC在PWM和SAC联合刺激后,有更多细胞存活的趋势(P=0.052),且培养上清中IgM的水平明显增加(P=0.03),而IgG的水平无明显变化(P>0.05).6例预致敏对象诱导和检测到抗HLA抗体.其特异性与各自培养上清中检测到的抗HLA抗体一致.结论 PWM和SAC体外刺激PBMC,结合HLA特异的ELISPOT方法,能诱导和榆测到人类B细胞产生的HLA抗体. 相似文献