HIV-1 P24人源化单克隆抗体的制备及鉴定

目的 通过建立新型人源化抗HIV-1 P24单克隆抗体制备技术平台,研制1～2种抗HIV-1 P24抗体.方法 使用连接P24的磁珠分选特异性分泌P24抗体的B细胞,有限稀释后,提取总mRNA,采用逆转录和巢式PCR扩增免疫球蛋白重链和轻链基因,经测序鉴定后克隆到真核表达载体Cloning vector AbVec-hIgG1、Cloning vector AbVec-hIgKappa、Cloning vector AbVec-hIgLambda中;通过瞬时转染293T细胞得到重组抗体;使用proteinA亲和层析纯化抗体.结果 成功筛选到5对抗HIV-1 P24的人源单克隆抗体基因.结论 本研究初步成功地建立了人源化HIV-1 P24单克隆抗体的制备及纯化方法,为HIV早期诊断以及筛选其他人源化单克隆抗体奠定了基础.     

改良大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型不同时间窗的状态研究

目的:通过制作改良大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型,研究不同时间大鼠神经功能评分和大脑梗死面积的变化情况。方法:采用线栓法制作改良SD大鼠(185.0±10.0g)MCAO模型,缺血2h后再灌注。将纳入大鼠分为三组,1天组、7天组和14天组。于不同时间对大鼠进行神经功能缺损评分(mNSS)后,大鼠取脑后切片,用TTC染色显示脑组织梗死面积。结果:mNSS显示,1天组和7天组比较,有显著性差异(P0.05);7天组和14天组比较,无显著性差异(P0.05)。TTC染色证实,1天组和7天组比较,无显著性差异(P0.05);7天组和14天组比较有显著性差异(P0.05)。结论:改良大鼠MCAO模型术后7天时就发生了行为学的改变,而在14天时才发生形态学的改变,提示行为学改变与形态学改变并非同时发生的。     

EV71 VP1人源单克隆抗体筛选

目的 通过建立新型人源化单克隆抗体制备技术平台,筛选抗EV71 VP1单克隆抗体.方法 使用耦联EV71 VP1抗原的磁珠对EV71感染者外周血淋巴细胞进行分选,得到分泌EV71VP1特异性抗体的B淋巴细胞.有限稀释后,低渗裂解细胞,采用逆转录和巢式PCR扩增免疫球蛋白重链和轻链基因,经测序鉴定后克隆到真核表达载体Cloning vector AbVec-hIgG1、Cloning vectorAbVec-hIgKappa、Cloning vector AbVec-hIgLambda中.通过瞬时转染293T细胞得到重组抗体.结果 成功筛选到1对抗EV71 VP1的人源单克隆抗体基因.结论 本研究初步成功地建立了人源化单克隆抗体的筛选方法,为手足口病早期诊断、治疗以及筛选其他人源化单克隆抗体奠定了基础.