抗人CD86单链抗体的基因克隆、表达及结合活性分析

目的 构建并在CHO细胞中表达抗人CD86单链抗体(CD86-scFv),研究该抗体与抗原的结合特性及介导的生物学功能.方法 从分泌鼠源CD86抗体的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL基因,构建含有前导肽L-VH-Linker-VL抗体编码基因的表达载体并转染CHO细胞.经筛选高分泌株并扩大培养后收集上清进行纯化.流式细胞术分析CD86-scFv对不同细胞膜型CD86分子的识别及与鼠源亲本抗体1D1的竞争抑制效应.MTT法分析CD86-scFv与Raji细胞表达的CD86结合后对细胞生长的影响.结果 获得了稳定表达抗人CD86-scFv的CHO细胞株及相应抗体.CD86-scFv与CD86基因转染细胞株L929-CD86、天然表达CD86分子的人B系淋巴瘤细胞Raji和Daudi细胞的阳性结合率分别为67.0％、72.3％和80.5％.CD86-scFv对鼠源亲本抗体1D1具有竞争结合能力,将CD86-scFv(终浓度20μg/mL)加入Raji细胞共同培养72 h时的细胞生长抑制率为28.3％.结论 成功构建了稳定分泌抗人CD86-scFv的CHO细胞株(命名为SA-IV).该抗体能够识别CD86分子并具有良好的生物学活性.     

青少年近视进展及其相关影响因素

目的：了解青少年近视进展情况并分析其相关影响因素。方法：纵向调查研究。通过随机抽取的方式选取青岛市黄岛区1所小学（3~6年级）和1所中学（7年级、8年级）中的6个年级,其中每个年级随机选取2个班级,共纳入320名近视学生作为研究对象。先于2018年1月寒假期间完成对所有入选学生裸眼远视力、电脑验光、裂隙灯显微镜、睫状肌麻痹验光及最佳矫正视力检查并获取基线数据。再于2019年1月寒假期间再次重复上述检查获取随访数据并通过现场调查问卷的方式获取受检者1年内包括近距离工作时间、户外活动时间等影响因素的相关信息。采用ANOVA、χ2检验、Logistic单因素和多因素回归分析方法等对相关数据进行统计分析。结果：共获得296名（92.5%）学生的完整数据。所有学生随访1年后的近视等效球镜度（SE）增长（-0.56±0.62） D（t=7.71,P<0.001）,其中6年级近视进展最快（P<0.001）。各年级男、女生近视进展速度差异无统计学意义。入选近视学生中双亲均近视的比例最高,其次为单亲近视,双亲均无近视的比例最低（χ2 =27.92,P<0.001）。单因素回归分析显示近视进展与双亲近视[OR=1.68,95%可信区间（CI）：1.22~2.13,P=0.042]、近距离工作距离<30 cm（OR=1.23,95% CI：1.02~1.59,P<0.001）、连续近距离工作时间≥30 min（OR=1.34, 95% CI：1.02~1.61,P=0.021）有相关性;进一步多元回归分析显示,近视进展仅与连续近距离工作时间≥30 min（OR=1.28, 95% CI;1.08~1.68,P=0.042）有相关性。结论：所有受检者随访1年的SE增长为（-0.56±0.62）D。各年级近视进展速度呈先快后慢的规律,其中,6年级（13岁）可能是近视进展速度变慢的一个转折点。连续近距离工作时间≥30 min是影响近视进展的重要危险因素。     

RNA m5C甲基化修饰在肿瘤中的研究进展

5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine,m5C）是RNA中重要的甲基化修饰之一,也是近年来的研究热点。随着甲基化测序技术的发展,在编码RNA及非编码RNA中均证实存在大量的m5C甲基化修饰。RNA m5C甲基化修饰受m5C甲基转移酶、去甲基化酶及m5C甲基化结合蛋白的调控。m5C甲基化修饰调节RNA的稳定性、转运、翻译和压力应激等,并参与调节肿瘤的发生发展、侵袭转移、肿瘤耐药等进程。本文对RNA m5C甲基化修饰的调控机制、功能以及在肿瘤中的研究进展进行综述,以期为肿瘤诊治研究提供新思路。      

抗人CD80单链抗体对不同肿瘤细胞膜型CD80分子的识别与体外增殖的影响

目的:制备真核细胞CHO表达的CD80单链抗体(CD80-scFv)并研究其对不同肿瘤细胞膜型分子的识别及增殖的影响。方法:将表达CD80-scFv的CHO细胞大规模无血清培养收集上清,采用IMAC亲和层析法纯化获取抗人抗体。采用免疫荧光及流式细胞术分析其对人恶性B系淋巴瘤细胞株Daudi、人黑色素瘤细胞株A375、神经胶质瘤细胞株U251及人多发性骨髓瘤细胞株8266及U266细胞膜型CD80分子的识别。在上述肿瘤细胞的培养体系中加入不同浓度的CD80-scFv,MTT法分析其对肿瘤细胞增殖的影响。以天然高表达CD80分子的8266细胞经丝裂霉素处理后作为APC,人PBMC作为效应细胞,分析抗体通过阻断共刺激信号对PBMC增殖的影响。结果:从CHO细胞培养上清中获取的抗人CD80-scFv纯化品的量为6.67 mg/L;该抗体与Daudi、U251、A375、8266及U266的阳性结合率分别为96.8%、39.6%、20.5%、99.9%及3.8%。抗体对高表达CD80分子的Daudi及8266细胞具有增殖抑制作用,加入抗体(终浓度为25μg/mL)培养72 h时的抑制率分别为24.04%及24.16%。同时,抗体通过阻断CD80-CD28介导的共刺激信号,抑制PBMC的增殖。结论:CD80-scFv能够特异识别细胞膜型CD80分子,并对高表达细胞的体外增殖具有抑制作用。     

日间手术内镜切除结直肠息肉的效果与安全性分析

目的 回顾分析日间手术应用于我院消化内科结直肠息肉切除术的安全性。方法 2019年6月至2020年2月,我院共168例患者采用日间手术行结直肠息肉切除术,238例患者通过普通住院完成结直肠息肉切除,比较两组的疗效、安全性及住院花费等。结果 日间组患者均顺利完成肠息肉切除手术,2例患者出现便血,术后出血发生率为1.19%(2/168),日间组直径≥1cm的息肉术后出血发生率和普通组患者差异无统计学意义(p=0.777)。日间组平均住院时间和住院平均花费较同期普通肠息肉住院患者显著降低。结论 日间手术应用于内镜下直径1cm以上的结直肠息肉切除是安全有效的,能够降低患者医疗负担。     

正视人群夜间近视与高阶像差相互关系的研究

目的:研究正视人群夜间近视转换与高阶像差的相互关系,探讨夜间近视转换发生的可能机制。方法:选择正视受试者60名,在明、暗状态自然瞳孔下利用Tracey波前像差仪测量各组像差及客观验光,并比较高阶像差和客观验光等效球镜值的变化,分析高阶像差与夜间近视的相互关系。结果:正视人群暗视条件下会出现大约-0.22D的近视。暗视条件下人眼高阶像差随着瞳孔的增大而成倍增高,其中球差增加3.5倍,彗差增加约1.3倍,高阶像差均方根增加约1.3倍。暗视条件下出现的近视与球差、彗差、高阶像差均方根的增大成正相关。结论:正视人眼暗视条件下会出现大约-0.22D的近视,而解决这种问题的本质在于消除暗视条件下增加的高阶像差。     

抗人CD86双价抗体的表达及与抗原的结合特性

目的:用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达抗人CD86双价抗体(CD86-diabody),鉴定该抗体对表达CD86分子肿瘤细胞的识别及介导的生物学效应.方法:从分泌抗人CD86小鼠源抗体的杂交瘤1D1中克隆抗体重、轻链可变区基因VH及VL.SOE-PCR构建VH-(GGGGS)-VL双价抗体基因,整合到真核表达载体plRES2-EGFP中,脂质体法转染CHO细胞,FCM筛选G418加压培养的阳性克隆.IMAC纯化并定量抗体.免疫荧光法分析抗体对人B系淋巴瘤细胞株Raji及Daudi膜型CD86分子的阳性结合率,将抗体加入到Raji细胞的培养体系中,培养72 h,MTT法分析抗体对细胞体外增殖的影响.结果:获得了稳定分泌抗人CD86-diabody的CHO细胞株.培养上清中抗体纯品的得率为5.24 mg/L.抗体与Raji及Daudi细胞的阳性结合率分别为77.2％及70.6％.经抗体孵育72 h,Raji细胞体外增殖抑制率为37％.结论:成功制备了抗人CD86-diabody,可特异性结合细胞膜型CD86分子,并对表达该分子的肿瘤细胞体外增殖具有抑制效应.     

Epi-LASIK术后应用不同透氧性角膜接触镜对角膜上皮愈合的影响

Pallikaris等提小了机械法准分子激光上皮下角膜磨镶术（epipolis laser in situ keratomiteusis,Epi—LASIK）。Epi-LASIK制作完整而保持活力的角膜上皮瓣十分简便,避免了乙醇的刺激作用和制作上皮瓣带来的一些并发症,术后haze程度轻,但无法避免术后角膜上皮愈合慢及轻微疼痛的缺点,术后需用绷带式角膜接触镜保护角膜上皮瓣。     

D-半乳糖致衰老小鼠脾脏T细胞亚群的改变及其意义

目的:探讨D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠脾脏T细胞亚群的改变及其意义。方法:运用100 g/L D-半乳糖溶液建立小鼠亚急性衰老模型,并对此衰老模型进行生物学鉴定。ELISA检测模型小鼠血清中IFN-γ和IL-4的含量;流式细胞术检测模型小鼠脾脏中初始、活化及调节性T细胞相关分子的改变。结果:模型组小鼠血清中IFN-γ和IL-4含量分别为(82.93±2.74)pg/mL和(125.41±3.16)pg/mL,与对照组[(125.41±3.16)pg/mL和(8.28±2.47)pg/mL]相比含量降低(P<0.01)。脾脏中初始T细胞相关分子CD45RA表达下降[模型组:(4.46±1.21)%,对照组:(7.38±1.03)%,P<0.01];活化T细胞相关分子CD25表达下降[模型组:(6.74±0.81)%,对照组:(5.14±1.25)%,P<0.05];Foxp3在CD4+CD25+T细胞中表达上升[模型组:(18.32±1.44)%,对照组:(10.14±1.52)%,P<0.05]。结论:机体衰老时脾脏中初始和活化T细胞减少,CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Tr)增多,T细胞活化及免疫调节能力下降。     

甘露醇治疗外伤性前房积血33例体会

近四年来,我们对外伤性前房积血33例病人,应用了甘露醇静脉滴注治疗,获得了满意的效果。在进行治疗时,我们将前房出血按照国内分法分为四级:一级积血占前房1/4;二级积血占前房1/4至1/2;三级积血占前房1/2以上,但前房积血未满;四级前房积血为前房充满积血。1疗效观察在对33例前房出血患者进行甘露酵治疗