Caveolin-1对MGC803细胞增殖、分化的影响及其机制

为了研究caveolin-1对胃癌细胞生物学行为的影响，探讨caveolin-1作为基因治疗的候选基因的可能性，用Lipofectin将caveolin-1基因稳定转染胃癌细胞系建立稳定表达caveolin-1的胃癌细胞系MGCS03／Cav-1，并将空载体转染MGC803作为对照(MGC803／pcl-neo)。采用免疫细胞化学及western blot检测转染及未转染的MGC803细胞中caveolin-1的表达情况。     

细胞周期与PTCA术后再狭窄

球囊损伤后内膜增生部分是由于血管平滑肌细胞的增生和迁移所致 ,而血管平滑肌细胞的增殖受细胞周期调节蛋白控制。在球囊损伤模型中 ,细胞周期正调控蛋白、负调控蛋白在时间和空间上分别与血管平滑肌细胞增殖动力学呈正相关和负相关关系 ,即两者协同作用控制着血管平滑肌细胞的增殖与非增殖的平衡。以这些蛋白为目标 ,利用反义寡核苷酸、转基因技术有望限制增殖性血管疾病的发生和发展 ,同时也可据此研究药物作用的新机制 ,并为寻求防治心血管疾病新药提供新途径     

Caveolin-1表达及其与胃癌生物学行为关系的研究

目的 :探讨候选抑癌基因Caveolin 1在胃癌中的表达及其与胃癌生物学行为的关系。方法 :应用免疫组织化学SABC法对 43例胃癌存档蜡块组织及 15例胃炎活检标本进行Caveolin 1蛋白检测 ,采用 χ2 检验进行统计学分析。结果 :Caveolin 1在胃癌的阳性表达率为 3 0 2 % ( 13 / 43 ) ,明显低于胃炎组 10 0 % ( 15 / 15 ) ,P <0 0 1;其中高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌中的阳性率分别为 6/ 6、3 / 5、17 4% ( 4 / 2 3 ) ,而印戒细胞癌及黏液腺癌中无阳性表达 ,五者之间差异有统计学意义 ,P <0 0 1;浸润至浆膜或超过浆膜组的Caveolin 1表达阳性率13 8% ( 4 / 2 9)明显低于未达浆膜组 64 3 %( 9/ 14 ) ,两组之间差异有统计学意义 ,P <0 0 1;淋巴结转移组Caveolin 1阳性率 7 7%( 1/ 13 )明显低于无淋巴结转移组 40 0 %( 12 / 3 0 ) ,两组之间差异有统计学意义 ,P <0 0 5。结论 :候选抑癌基因Caveolin 1的表达与胃癌细胞的分化、浸润和转移密切相关 ,对胃癌生物学行为评估有重要意义     

酸性核糖体磷酸化蛋白P(0-2)的研究进展

酸性核糖体磷酸化蛋白P0、P1、P2是位于真核生物核糖体60S大亚基上的三种核糖体磷酸化蛋白,它们在核糖体上共同组成一个独特的向外侧凸出的五聚体复合物核糖体茎区,此茎区与核糖体上的28 SrRNA的一个保守结构域共同形成一个GTPase相关位点,并在蛋白质翻译延伸过程起着重要的作用。此外,酸性核糖体磷酸化蛋白P0、P1、P2还与细胞凋亡、肿瘤和免疫性疾病的发生、发展密切相关。本文就这三个蛋白结构、功能及其相关作用机制作一综述。     

构建成人高等医学教育教学质量管理与监控体系

本文在分析全面质量管理(total quality management,TQM)内涵的基础上,借鉴TQM的质量第一、系统管理、过程控制、预防为主和不断改进的核心理念与工作思路,提出了构建南华大学成人高等医学教育教学质量管理与监控体系研究方案.同时,对该质量管理体系的研究任务与目标、基本构建框架与管理要素以及运行该质量管理体系的保障机制等问题进行了初步研究与实践.     

Bcl-XL siRNA对肺腺癌细胞A549/DDP药物敏感性及凋亡的影响

目的：探讨小干扰RNA沉默Bcl-XL对肺腺癌耐药细胞株A549／DDP药物敏感性的影响及其凋亡机制。方法：将Bcl-XL siRNA质粒载体转染至A549／DDP细胞，MTT、流式细胞仪检测细胞药物敏感性的改变；丫啶橙／溴化乙锭（AO／EB）染色法检测细胞凋亡；RT-PCR检测Bcl-XL mRNA水平；Western-Blot检测Bcl—XL、caspase-3蛋白表达的变化。结果：分别用0．2、2、20、200μg／mL顺铂处理细胞48h，MTT显示转染Bcl-XL siRNA细胞组A570吸光度值较阴性siRNA细胞组和未转染对照组明显降低，细胞生长抑制率明显增高；用20μg/mL顺铂处理细胞48h，流式细胞仪检测，转染Bcl-XL siRNA组凋亡率较转染阴性siRNA组和未转染组增加；AO／EB染色显示转染Bcl-XL siRNA的细胞较转染阴性siRNA及未转染者凋亡率增加；转染Bcl-XL siRNA降低了Bcl-XL mRNA和蛋白水平，升高了caspase-3活性形式蛋白表达。结论：Bcl-XL siRNA特异性下调A549／DDP细胞Bcl-XL的表达，活化caspase-3蛋白，促进A549／DDP细胞凋亡，增强该肺腺瘤细胞对顺铂的敏感性。     

Bcl-XL siRNA对人胃腺癌MGC-803细胞药物敏感性的影响

目的:研究靶向Bcl-XL基因的小干扰RNA对胃腺癌MGC-803细胞Bcl-XL基因表达的作用及对药物敏感性的影响。方法:构建的Bcl-XLsiRNA载体或阴性siRNA并稳定转染到胃癌MGC-803细胞,G418抗生素筛选阳性克隆,克隆扩大培养,免疫荧光观察细胞蛋白表达。用不同浓度的5-FU或DADS处理稳定转染细胞,MTT观察细胞增殖的变化。用一种浓度的5-FU或DADS处理稳定转染细胞,流式细胞术观察亚G1细胞的比例。结果:免疫荧光结果表明,Bcl-XLsiRNA稳定转染组细胞中Bcl-XL蛋白的表达比阴性siRNA稳定转染组细胞Bcl-XL基因的表达均有明显的降低。当不同浓度的5-FU(13、130、1 300、13 000 mg.L-1)或DADS(20、35、50mg.L-1)处理细胞24 h后,MTT结果表明Bcl-XLsiR-NA细胞组A570吸光度值较阴性siRNA细胞组和未转染对照明显降低,细胞生长抑制率明显增高。5-FU或DADS药物的IC50值在Bcl-XLsiRNA细胞组有明显降低。使用5-FU(130 mg.L-1)或DADS(50mg.L-1)处理细胞24 h后,流式结果表明,Bcl-XL-siRNA细胞组较阴性siRNA和正常对照细胞组亚G1细胞比例有明显增高。结论:Bcl-XL siRNA下调了MGC-803细胞Bcl-XL基因的表达;Bcl-XLsiRNA能够促进MGC-803细胞凋亡,增强细胞对化疗药物的敏感性。     

Rho GTPase在信号转导和细胞骨架中的作用

Rho GTPases参与多种重要的细胞生命活动,如肌动蛋白细胞骨架的重构、细胞黏附、细胞运动、囊泡运输、转录激活、基因表达和细胞周期的调控等。当Rho GTPase蛋白水平改变,活性状态改变,效应蛋白丰度改变后,出现异常的Rho 信号,从而影响细胞骨架重组使细胞迁移。调节这些生物信号的转导通路非常复杂, 因此,Rho GTPases已成为近年来的研究热点。     

M-CSF胞质内稳定表达细胞系的构建和鉴定

目的构建真核细胞pCMV/cyto/myc-M-CSF载体,建立M-CSF胞质内稳定表达细胞系,为进一步研究M-CSF的胞内作用奠定基础。方法构建靶向定位载体pCMV/cyto/myc-M-CSF,PCR及双酶切鉴定后转染HeLa细胞,G418筛选阳性克隆,RT-PCR和免疫细胞化学鉴定M-CSF的表达及M-CSF的蛋白定位。结果重组质粒pCMV/cyto/myc-M-CSF用M-CSF特异性的引物进行PCR扩增,结果显示插入片段约为1 400 bp,双酶切后分别得到约5.0 kb和1 400 bp的两条带,M-CSF分子大小与预期一致。RT-PCR、免疫细胞化学结果表明转染M-CSF的HeLa细胞高表达M-CSF（P〈0.05）,并且转染M-CSF的HeLa细胞表达的M-CSF蛋白定位于细胞质。结论成功构建了稳定高表达胞质M-CSF的HeLa细胞系。