下调ALDH1A1基因表达对体外培养的鼻咽癌细胞系迁移能力的影响

目的探讨siRNA干扰ALDH1A1基因表达对鼻咽癌5-8F和CNE2细胞迁移侵袭能力的影响。方法将鼻咽癌5-8F和CNE2细胞分为5-8F干扰组、5-8F空载组、CNE2干扰组、CNE2空载组,利用已构建的慢病毒pMagic 4.1-ALDH1A1siRNA载体和pMagic 4.1-shRNA空载体分别感染5-8F和CNE2细胞,建立稳定干扰ALDH1A1表达的鼻咽癌5-8F、CNE2细胞株和空载的5-8F和CNE2细胞株。4组采用Western blot法检测细胞ALDH1A1、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9蛋白表达,采用Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,采用Boyden小室实验检测各组侵袭细胞数。结果 5-8F干扰组ALDH1A1蛋白表达(0.34±0.01)低于5-8F空载组(0.75±0.03),CNE2干扰组ALDH1A1蛋白表达(0.24±0.03)低于CNE2空载组(0.71±0.03);5-8F干扰组鼻咽癌细胞迁移细胞数(35.0±2.6)、侵袭细胞数(32.7±2.1)均低于5-8F空载组(117.6±3.2,105.6±4.0),CNE2干扰组鼻咽癌细胞迁移细胞数(34.0±3.0)、侵袭细胞数(32.3±1.5)均低于CNE2空载组(121.0±4.0,108.0±1.7)(P0.01);5-8F干扰组VEGF(0.49±0.03)、MMP-2(0.36±0.04)、MMP-9(0.31±0.04)蛋白表达低于5-8F空载组(0.73±0.02、0.50±0.02、0.89±0.01)(P0.01),CNE2干扰组VEGF(0.48±0.02)、MMP-2(0.37±0.02)、MMP-9(0.41±0.02)蛋白表达低于CNE2空载组(0.78±0.05、0.67±0.05、0.76±0.04)(P0.01)。结论下调ALDH1A1基因表达可抑制鼻咽癌细胞迁移侵袭。     

miR-28调控非小细胞肺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用机制

目的 探讨微小RNA-28 (miR-28)对非小细胞肺癌细胞株细胞A549和H1299的影响及其作用机制。方法 通过转染miR-28 mimics过表达miR-28,转染miR-28 inhibitor抑制miR-28的表达,其中miR-28 NC作为对照组。通过CCK-8实验、克隆形成试验和细胞周期实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;通过划痕实验、Transwell迁移及Boyden小室侵袭实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响;通过生物信息学软件分析发现Ras相关蛋白1b (RAP1B)可能是miR-28的潜在靶基因并利用荧光素酶报告基因实验进行验证;通过RT-qPCR和Western blot方法检测过表达和抑制miR-28表达后A549和H1299细胞RAP1B的表达。结果 与miR-28 NC比较,miR-28 mimics组A549和H1299细胞的增殖速度明显减慢,迁移及侵袭能力明显减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-28 inhibitor组A549和H1...     

应用256层螺旋CT灌注技术研究兔肝I/R后血流动力学变化

目的：应用256层螺旋CT灌注成像分析兔部分肝脏缺血再灌注损伤（I/R）后阶段血流动力学的变化规律及其价值。
方法：新西兰大白兔阻断肝左叶血供60min后,恢复血供,按缺血再灌注的时间分为6,12,24 h和假手术（S）组,每组6只。各组分别采用256层螺旋CT行全肝灌注成像和病理学分析。在灌注图上测量肝动脉灌注量（HAP）,门静脉灌注量（HPP）,总灌注量（TLP）以及肝动脉灌注指数（HPI）。
结果：(1)在I/R 6,12,24 h组肝脏血流出现差异性分布（低灌注的肝组织,即梗死区）。(2)在梗死的肝组织中,与S组相比,I/R 6 h 组中HPP,TLP外,I/R12 h和24 h组HAP,HPP,TLP均低于对照组,而HPI则高于对照组.在灌注相对正常的肝组织中各灌注参数均呈下降趋势。(3)I/R组梗死与未梗死肝组织CT灌注参数之间差异有显著性。
结论：CT灌注参数能够客观准确地反映肝I/R病理过程中血流动力学的变化。     

硫化氢对肠缺血-再灌注损伤大鼠炎症因子及内毒素血症的影响

目的 研究硫化氢对肠缺血-再灌注损伤大鼠血C反应蛋白、降钙素原、内毒素、肿瘤坏死因子-α、白介素-6、白介素-8的影响。 方法 将64只雄性Wistar大鼠随机分为A(假手术)组、B(缺血-再灌注)组,C(缺血-再灌注+NaHS)组,D[缺血-再灌注+炔丙基甘氨酸(PPG)]组。经腹正中切口剖腹及游离肠系膜上动脉(SMA),钳夹B、C、D组大鼠SMA 60 min和再灌注120 min,建立大鼠肠缺血-再灌注损伤模型。C组在灌注前10 min向大鼠尾静脉注入100 μmol/kg NaHS后按1 mg/(kg·h)输注直到再灌注2 h,D组在缺血前10 min向腹腔注入PPG 50 mg/kg。检测血CRP、降钙素原、内毒素、H₂S、TNF-α、IL-6、IL-8并进行血培养,测定回肠组织匀浆中H₂S。 结果 与A组比较,B组的CRP、降钙素原、内毒素、TNF-α、IL-6、IL-8升高,H₂S降低。与B组比较,C组的CRP、降钙素原、内毒素、TNF-α、IL-6、IL-8降低,H₂S升高。与C组比较,D组CRP、降钙素原、内毒素、TNF-α、IL-6、IL-8升高,H₂S降低(P<0.01)。B、C、D组分别有14、6、15例血标本培养出大肠杆菌。H₂S与CRP、降钙素原、内毒素、TNF-α、IL-6、IL-8呈负相关。 结论 H₂S降低肠缺血-再灌注损伤大鼠血炎症因子,改善内毒素血症。      

下调CK2α基因表达抑制肺腺癌A549细胞的增殖和凋亡

目的:探讨下调CK2α基因表达后对肺腺癌A549细胞的影响.方法:构建pSilencerTM4.1-shCK2α-eGFP慢病毒表达载体,建立稳定干扰CK2α表达的A549细胞株.利用MTT、克隆形成、凋亡实验检测干扰CK2α基因表达后,A549细胞的增殖和凋亡的能力.利用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Bcl-xl、Bcl-2的表达.结果:下调CK2α基因表达后肺腺癌A549细胞增殖能力减低,促进细胞凋亡.细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8上调,但Bcl-xl、Bcl-2蛋白明显下调.结论:下调CK2α基因表达后抑制肺腺癌A549细胞增殖、促进凋亡.     

miR-494慢病毒表达载体的构建

目的:构建miR-494基因的慢病毒表达载体。方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增hsa-miR-494基因,用XhoⅠ、BamHⅠ双酶切携带EGFP的慢病毒载体pGIPZ,酶切产物电泳后回收约11kb的载体片段。使用DNA连接试剂盒中的Solution I将其与miR-494连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,PCR筛选正向阳性克隆,随后将选定的含有阳性克隆的单菌落摇菌,提取质粒并行酶切鉴定及对插入的miR-494测序,所构建载体命名为pGIPZ-miR-494-eGFP,获pGIPZ-miR-494-eGFP后按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产。将慢病毒颗粒以最适滴度感染人体肺腺癌细胞株A549,通过Aldefluor流式分选出带有目的基因和空载病毒的细胞,用Real-Time PCR检测感染效率。结果:目的基因与慢病毒载体连接成功。共转染293T细胞包装病毒与浓缩后滴度达1.02×108TU/ml,并转染到肺腺癌细胞株A549上,Aldefluor流式分选出的细胞后通过Real-Time PCR检测结果显示miR-494慢病毒表达载体感染的A549细胞miR-494表达高于对照组达10倍以上。结论:成功构建携带人miR-494基因的慢病毒表达载体pGIPZ-miR-494-eGFP,为相关后续研究打下了良好基础。     

微小RNA-494在肿瘤发生发展中的作用

微小RNA-494 (miR-494)参与正常细胞的细胞周期调控、分化和凋亡等过程.近年来研究表明,miR-494的异常表达与肿瘤的发生密切相关,其参与肿瘤细胞的侵袭和转移等过程.miR-494是一种肿瘤抑制基因,也可作为癌基因,其通过多种靶基因、信号通路对肿瘤发生发展进行调控.     

血清KL-6在肺癌放射性肺炎中的研究进展

血清KL-6是由上皮性黏蛋白1(MUCl)基因编码的一类糖蛋白,是较早被公认的间质性肺疾病的特异性标志物,而且KL-6亦高表达于部分恶性肿瘤患者.近年的研究发现,血清KL-6与放射性肺炎的发生相关,监测血清KL-6可预测放射性肺炎的发生并评估疾病的严重程度及预后.     

阿司匹林预防肺癌作用Meta分析

目的:评价阿司匹林预防肺癌发生的疗效,为临床实践和研究提供参考和依据。方法:通过检索中国生物医学文献数据库、中国学术期刊网络出版总库、PudMed和EMbase等国内外权威的数据库,全面收集相关的临床研究,按纳入排除标准筛选文献并收集相关数据和信息,采用Rev Man 5.0统计软件进行Meta分析,并对性别、阿司匹林剂量和疗程等进行亚组分析。结果:共纳入17个临床研究,Meta分析显示,使用阿司匹林者较未使用者肺癌的发生率较低,OR=0.82,95%CI:0.72~0.94。亚组分析显示,低剂量阿司匹林(≤100mg)可能较高剂量阿司匹林(>100mg)效果好,OR及其95%CI分别为0.94(0.81~1.09)和1.01(0.87~1.16);长期服用阿司匹林能降低肺癌发病,服用≤1年、>1~<5年、≥5年与肺癌发生关系的OR值及其95%CI,分别为1.06(0.94~1.20)、0.73(0.57~0.94)和0.73(0.57~0.93)。结论:低剂量(≤100mg)长期(>1年)使用阿司匹林在降低肺癌发病方面收益更大。由于本Meta分析纳入的为观察性临床研究,所以将来有必要开展多中心大样本的随机对照试验来进一步证实。