增殖细胞核抗原 siRNA 序列的设计、合成与筛选

目的：设计并筛选能有效抑制人肝癌SMMC-7721细胞、人结肠癌Caco2细胞、人胃癌SCG-7901细胞增殖的增殖细胞核抗原(PCNA) siRNA。方法:总结以往提出的siRNA 设计原则的基础上，设计4 条PCNA siRNA，体外转录合成PCNA siRNA；并作用于3 种肿瘤细胞，WST-8法检测细胞增殖活性，筛选能有效抑制肿瘤细胞增殖的siRNA序列；RT-PCR检测细胞PCNA mRNA水平；免疫细胞化学方法检测 PCNA 蛋白表达水平。结果:4 条PCNA siRNA中，有3 条序列（No.2、No.4、No.3）的siRNA能有效抑制3 种肿瘤细胞的增殖；其中No.2、No.4作用效果最优，以50 nmol/L浓度作用48 h，对3种肿瘤细胞的增殖抑制率均可达到62％以上，No.2、No.4 PCNA siRNA均能在mRNA和蛋白水平显著下调PCNA的表达。结论:PCNA siRNA能在体外有效抑制SMMC-7721细胞、Caco2细胞、SCG-7901细胞的增殖，其适宜作用浓度为50 nmol/L，适宜作用时间为48 h。     

增殖细胞核抗原小干扰RNA对人结肠癌CaCO2细胞抑制作用

目的 观察增殖细胞核抗原（PCNA）小干扰RNA（siRNA）对人结肠癌CaCO2细胞抑制作用。方法 WST-8法和克隆形成抑制研究No．2和No．4PCNAsiRNA对CaC02细胞的作用；碘化丙锭（PI）单染检测细胞周期，Hochest33258染色观察凋亡形态，膜联蛋白（Annexin）V和PI双染测定捅亡百分率。结果 No.2和No．4PCNA siRNA与CaCO2细胞作用，增殖抑制率分别为（72．24±1.01）％和（74.67±3．35）％；克隆形成抑制率均达90％；两种药物转染细胞均出现明显亚二倍体峰，Sub-G1＋Go／G1期减少，S＋G2／M期增多；siRNA处理组细胞有较多凋亡形态变化；凋亡率随浓度增加而增加，且早期凋亡率持续高于晚期捅亡／坏死率。结论 PCNAsiRNA显著抑制人结肠癌CaCO2细胞增殖及克隆形成；细胞停留于G2／M期，明显诱导细胞凋亡。     

Bcr/abl同靶点小干扰RNA与反义寡核苷酸对K562细胞的作用比较

目的比较靶向Bcr／abl基因b3a2融合位点的小干扰RNA（small interferon RNA,SiRNA）及作用靶点完全相同的反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,ASODN）对人白血病K562细胞的增殖抑制作用,并联用三氧化二砷（As2O3）,比较二者对K562细胞化疗增敏作用。方法体外转录方法合Bcr／abl b3a2融合住点SiRNA,lipofectamine^TM2000转染,改良MTT法检测药物对K562细胞增殖的抑制作用。结果SiRNA和相同作用靶点的ASODN均显示出明显的细胞增殖抑制效应,SiRNA抑制K562细胞的IC50为97．47nmol／L,ASODN抑制K562细胞的IC50为10．71μmol／L;50nmol／L SiRNA与As2O3联用后,明显提高K562细胞对As2O3的敏感性,相同浓度的ASODN对细胞无明显化疗增敏作用。结论本实验结果提示针对Bcr／abl基因融合位点设计的极低浓度的SiRNA即能显著抑制K562细胞增殖,提高细胞对化疗药物的敏感性,其效果明显强于同靶位点的ASODN,显示了RNAi技术应用于慢性髓系白血病的良好前景。     

小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响

目的观察小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法体外培养人肝癌Bel-7402细胞,台盼兰活细胞计数及集落形成抑制实验观察不同浓度小檗碱对Bel-7402细胞的增殖抑制作用,Hochest33258染色观察凋亡形态学变化,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率.结果小檗碱可显著抑制Bel-7402细胞生长,使集落形成能力明显下降,均呈时间、剂量依赖性.小檗碱处理后72 h,Hochest33258染色可观察到细胞核边集、固缩,有明显凋亡小体形成,流式细胞仪检测出现明显Sub-G1峰.结论小檗碱可以抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,小檗碱可能具有治疗人肝细胞癌的潜在应用价值.     

以bcr/abl mRNA及P210为靶点治疗慢性髓系白血病的新进展

慢性髓系白血病（CML）起源于多能干细胞的肿瘤性转化, 其特点是白细胞总数增加,骨髓及血液中髓系各期细胞显著增多,以中、晚幼粒细胞尤甚.一般经过3～5年的慢性期,恶化为加速期、急变期最终死亡.常规治疗用细胞毒药物及干扰素,可改善临床症状,达到血液学缓解,延长生存期,但不能阻止疾病向急变发展.自体造血干细胞移植（ASCT）复发率高.异基因造血干细胞移植是当前惟一可能治愈CML的方法,但受供体来源及患者年龄的限制,仅少部分患者有机会得以实施,限制了在临床上的广泛应用.     

c-Myc反义寡核苷酸对人肝癌Bel-7402细胞增殖的双向调节作用

目的观察c-Myc反义寡核苷酸(c-Myc ASODN)对人肝癌Bel-7402细胞增殖的双重调节作用,探讨c-Myc基因的生物学功能.方法台盼兰拒染细胞计数,CCK-8细胞检测试剂盒检测各组细胞增殖抑制率,计算单纯黄连素组及合用c-Myc ASODN后IC50.结果单纯黄连素及c-Myc ASODN均能明显抑制细胞的增殖(P＜0.05),将黄连素合用c-Myc ASODN后,细胞增殖抑制率低于单用黄连素组,但仍高于c-Myc ASODN组.黄连素作用Bel-7402细胞的IC50值在合用c-Myc ASODN后增加1.42倍.结论c-Myc基因在Bel-7402细胞细胞生长环境良好时可促进细胞的生长,在细胞生长环境不利的情况下则诱导细胞的的凋亡,抑制细胞的生长.依据环境不同,对Bel-7402细胞增殖具有不同的调节作用,c-Myc ASODN通过下调c-Myc基因的表达,在不同的环境下亦表现出不同的生物学效应.c-Myc ASODN与黄连素合用能明显降低Bel-7402细胞对黄连素的敏感性.