fas基因与bcl-2反义RNA转导胃癌耐药细胞的药敏上调效应

目的比较fas基因和bcl-2基因在胃癌耐药细胞与非耐药细胞表达的差异,将fas基因和bcl-2反义核酸导入胃癌耐药细胞,并分析转导前后的细胞在mRNA与蛋白的表达水平,研究转导株与非转导株对化疗药物敏感性的区别.方法采用分子克隆技术将fas 基因和反义bcl-2片段分别插入真核表达载体pBK-CMV和pDOR-SV40的多克隆克隆位点之间,以脂质体介导法将两个重组表达载体分别转染受体细胞SGC7901/ VCR,G418筛选克隆细胞,Northern blot, Western blot检测耐药细胞与非耐药细胞以及转导细胞中fas基因和bcl-2基因mRNA及其蛋白的表达,MTT法药敏实验检测转导细胞与非转导细胞对VCR、顺铂、5-FU 的敏感性.结果真核表达载体pBK-fas cDNA和pDOR-bcl-2 cDNA转导胃癌耐药细胞后,分别从2×105细胞中筛选出大约80和120个抗性克隆,转导率各为0.4‰和0.6‰,随机各挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,均获得了稳定的抗性细胞,我们将此命名为SGC7901 fas/ VCR cell和SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell. 杂交结果表明,胃癌耐药细胞SGC7901/ VCR与非耐药细胞相比,bcl-2基因的表达明显较高,而fas基因表达极其微弱. 转导株SGC7901 fas/ VCR cell的fas mRNA及其蛋白水平的表达显著高于非转导株,SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell中bcl-2蛋白的表达明显低于非转导株. 2株转导细胞对VCR、顺铂、5-FU的敏感性明显高于非转导株.结论胃癌耐药细胞与非耐药细胞相比,bcl-2基因处于高表达状态,而fas基因处于极其低弱的表达状态. 通过脂质体介导的基因转染,有效地阻断了bcl-2蛋白在SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell的表达,明显增强了fas mRNA及其蛋白在SGC7901 fas/ VCR cell的表达. bcl-2反义核酸和fas基因转导胃癌耐药细胞后,对化疗药物的敏感性明显增加.     

热休克蛋白HSP90β在人胃癌组织及耐药细胞系中的表达

了解热休克蛋白ＨＳＰ９０β在人胃癌组织及多药耐药细胞系中的表达。方法ＳＡＢＣ免疫组化法：７０例胃癌组织，其中高分化腺癌１３例，中分化腺癌３２例，低分化腺癌１８例，粘液癌７例（包括粘膜癌和印戒细胞癌）。正常胃粘膜１７例，胃炎２３例及癌旁组织３５例作为对照。组织切片用正常羊血清封闭后，加入一抗（山羊抗人ＨＳＰ９０β多克隆抗体１：２００），４℃冰箱过夜；加二抗（生物素化兔抗山羊ＩｇＧ１：２００）３７℃３     

硝苯啶长期应用对肝硬变肝血流及肝功的影响

目的研究钙通道阻滞剂硝苯啶（ＮＦＰ）长期口服对３２例肝硬变门脉高压患者肝血流及肝功的影响．方法采用无创伤性核多功能仪首次通过法观察肝血流，同时记录服药前后体循环及肝功等变化．结果ＮＦＰ口服４周以上，总体患者及Ｃｈｉｌｄ＿Ｐｕｇｈ分级的各级患者均显示可明显减少门脉血流（ｋｖ），使肝动脉血流（ｋａ）增加，而不影响肝脏的总血流（ｋａ＋ｋｖ）；对平均动脉压（ＭＡＰ）及心率（ＨＲ）等体循环的影响甚小，并可改善血清白蛋白、胆红素及ＡＬＴ水平．结论ＮＦＰ可长期用于临床降低肝硬变门脉高压，预防食管曲张静脉破裂出血     

抗独特型抗体的制备与鉴定

内影像抗独特型抗体可模拟外部抗原，刺激机体的免疫反应。其制备的关键步骤包括动物的选择，免疫原的制备、免疫的剂量及方法以及独特型抗体的鉴定。     

HSP90β在细胞中的表达水平及化疗敏感性的相关研究

目的：了解胃癌细胞ＳＧＣ７９０１及其耐药细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ中ＨＳＰ９０β蛋白的表达,与化疗药物敏感性的关系及降低细胞ＨＳＰ９０β蛋白的表达是否影响化疗药物的敏感性。方法：用免疫组化法检测胃癌细胞ＳＧＣ７９０１及其耐药细胞ＳＧＣ７９１０／ＶＣＲ中ＨＳＰ９０β蛋白的表达,ＭＴＴ法测定ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞及其相的ＨＳＰ９０β蛋白低表达细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１和ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ对     

胃癌多药耐药研究新进展

胃癌为一常见肿瘤,在我国及日本发病率极高,危害着人民的生命。早期胃癌以手术为主,辅以化疗药物。晚期肿瘤则以化疗为主要手段。但由于耐药的产生,疗效往往不佳。因而促使人们对胃癌多药耐药性(ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ,ＭＤＲ)问题进行深入研究。目前研究发现的与耐药有关的机制可归纳为以下几个方面:1.发生在细胞膜水平的药物摄取减少和外排增多,引起细胞内药物的绝对浓度降低,如由Ｐｇｐ引起的耐药;2.发生在细胞质和细胞器水平的药物亚细胞分布的改变,使药物无法接近其作用靶点,引起药物有效浓度降低,如由多药耐药相关蛋…     

前列腺E1的肝保护作用

动物实验表明ＰＧＥ１对实验动物肝损害有保护作用。临床研究表明，ＰＧＥ１对急性爆发性及亚急性爆发性肝炎等重症肝炎，可使ＡＬＴ降低、胆红素降低、ＰＴ缩短从而改善肝功能。ＰＧＥ１通过增加肝血流，加速线粒体呼吸功能的恢复，稳定细胞膜微粘度的稳定性，降低细胞介导的肝细胞毒性，刺激肝组织ｃＡＭＰ的产生，增加ＡＴＰ的水平，促进ＤＮＡ的合成而实现其肝保护作用。ＰＧＥ可引起多系统的不良反应，这些反应可在减量或停药后     

Fas基因转导胃癌细胞的表达

目的将Ｆａｓ基因导入胃癌细胞，建立Ｆａｓ基因表达株，并比较转导前后ｍＲＮＡ与蛋白的表达水平．方法采用分子克隆技术将Ｆａｓ基因插入真核表达载体ｐＢＫＣＭＶ的多克隆克隆位点之间，以脂质体介导法将目的基因导入受体细胞ＳＧＣ７９０１，用Ｇ４１８筛选克隆细胞；以Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测Ｆａｓ基因的表达．结果成功地构建了真核表达载体ｐＢＫＦａｓｃＤＮＡ．转导细胞后，从１×１０５细胞中筛选出１００个抗性克隆以上，转导率大于０１％，随机挑选２个克隆扩增培养，获得了１株稳定的抗性细胞，从而有效地建立了Ｆａｓ基因表达株（ＳＧＣ７９０１Ｆａｓｃｅｌｓ）．杂交结果表明，转导株与非转导株均有ｃＤＮＡ的表达，但转导株在ｍＲＮＡ及蛋白水平的表达均明显高于非转导株．结论Ｆａｓ基因在胃癌细胞中处于低表达状态；通过真核表达载体的介导，Ｆａｓ基因导入胃癌细胞后，能有效地表达ＦａｓｍＲＮＡ及其蛋白．