构建预设CDR3基因噬菌体抗体库筛选抗人整合素ανβ3 mAb的人源化Fab

目的:构建预设CDR3基因的噬菌体抗体库,通过抗原表位导向选择方法筛选抗人整合素ανβ3单克隆抗体(mAb)人源化Fab。方法:将鼠mAbLCDR3重组到人轻链可变区文库中并与人/鼠嵌合重链Fd基因配对构建杂合噬菌体抗体库,用固相人整合素ανβ3抗原筛选人源化轻链基因。再用所获人轻链基因与移植有鼠mAbHCDR3的人重链Fd基因配对构建人源噬菌体抗体库,筛选人源化Fab。结果:分别构建了库容为2.1×106和2×107的杂合噬菌体抗体库和人源噬菌体抗体库,筛选到3株人源Fab克隆。经间接ELISA及竞争抑制ELISA证实,能特异结合整合素ανβ3抗原,其中人源D5株Fab克隆的基因序列表明,人轻链可变区基因属VKIII亚群,人重链可变区基因属VH1亚群。结论:利用噬菌体抗体库技术,成功地进行了鼠抗人整合素ανβ3mAbE10人源化的改造,为进一步临床应用奠定了基础。     

基孔肯雅病毒中和表位的筛选及表达

目的:寻找基孔肯雅病毒中和表位,并将其表达为重组融合蛋白.方法:对噬菌体展示12肽库进行了生物淘洗,随机挑取噬菌体克隆,使用 ELISA方法筛选并鉴定阳性克隆,分析阳性克隆的DNA序列,将其翻译成氨基酸序列进行同源性比较.将其中一个表位连同M13噬菌体PⅢ蛋白结构域Ⅰ～Ⅱ的编码序列用PCR技术扩增后插入原核表达载体pQE30,用IPTG诱导融合蛋白表达.结果与结论:从经过3轮淘洗的噬菌体中随机挑选123个克隆,从中筛选到20个阳性克隆,其中包含7种不同的氨基酸序列,这些序列缺乏同源性,表明该单抗表位应为构象型表位.在室温培养条件下成功地在大肠杆菌周质腔表达了一种可溶性的表位融合蛋白,经亲和层析得到了纯化的表位融合蛋白.     

丙型肝炎病毒NS3蛋白酶结构域在昆虫细胞中的表达及鉴定

目的　利用杆状病毒 昆虫细胞表达系统制备丙型肝炎病毒 (HCV)丝氨酸蛋白酶结构域 (proteasedomain)的重组蛋白。方法　构建含有HCV丝氨酸蛋白酶结构域基因的杆状病毒转移载体 pFBCNS3N ,转化大肠杆菌DH10Bac进行转座 ,提取重组Bacmid用Lipofectamine法转染昆虫细胞Sf9包装成重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染昆虫细胞进行蛋白表达 ,用SDS PAGE电泳和免疫印迹实验分析表达情况 ;利用去垢剂十二烷基肌酸钠溶解重组蛋白后以Ni NTAagrose柱亲和纯化重组蛋白 ;以重组蛋白NS5ab(包含NS5A羟基端部分和NS5B氨基端部分的重组蛋白 )为底物检测丝氨酸蛋白酶的酶切活性 ;以间接ELISA法分析重组蛋白的抗原性。结果　HCV丝氨酸蛋白酶结构域基因在昆虫细胞中获得高水平表达 ;重组蛋白能够部分溶解于含有去垢剂十二烷基肌酸钠的缓冲液 ;从 5× 10 7细胞中总共获得 0 .2mg重组蛋白 ,纯度大于 90 %;重组丝氨酸蛋白酶能够将NS5ab切割成两个片段 ;血清学实验证实该蛋白抗原性很好。结论　昆虫细胞表达的HCV丝氨酸蛋白酶结构域为膜结合型蛋白 ,具有良好的酶学活性以及抗原性。     

调整白血病患者唾液pH值的观察

白血病患者常并发口腔溃疡且难以愈合,由于溃疡所产生的疼痛影响患者进食,导致全身抵抗力进一步下降,有时甚至影响化疗进行。考虑到口腔溃疡的发生是因为继发感染或口腔局部环境改变所致,而唾液则是影响口腔局部环境的重要因素,因此作者于     

有机磷农药中毒反跳的早期护理及预防措施

目的探讨在有机磷农药中毒早期如何采取措施预防反跳的发生。方法收治37例中毒患者,针对发生反跳的原因,抓住治疗、护理的每一个环节进行比较。结果 40例中毒患者除2例病情较重死亡外,其余无1例发生反跳。结论有机磷中毒早期如果及时采取一系列治疗护理措施,可以有效地减少反跳的发生,提高抢救成功率。     

丙型肝炎病毒NS5ab区的B细胞模拟表位的确认

目的：用噬菌体展示随机肽库研究丙型肝炎病毒(HCV)NS5ab区的B细胞表位。方法：在原核系统中表达了HCV NS5ab重组蛋白，亲和层析纯化血清中抗HCV NS5ab的特异多抗，用此多抗来筛选噬菌体递呈随机12肽库，获得HCV NS5ab区的B细胞表位。结果：成功地表达了HCV NS5ab重组蛋白，用此蛋白检验了130份HCV阳性血清，阳性率为36％。在筛选的噬菌体展示随机肽库后，挑取13个阳性克隆测序，有9个序列不同，最终通过噬菌体表位表达的方法确认了3个表位。结论：筛选噬菌体展示随机肽库研究HCV的B细胞模拟表位是可行的。     

hIL－16cDNA的克隆、测序及在E.coli中的表达与纯化研究

在国内首次从人的外周血单个核细胞（PBMC）中克隆了人白细胞介素－16(hIL－16)cDNA,并应用一种新型的大肠杆菌表达系统─硫氧还蛋白表达系统,成功地表达了重组hIL－16。hIL－16cDNA的扩增从人PBMC中提取总RNA,poly(T)8－12反转录cDNA,以半巢式PCR扩增出特异的DNA片段。hIL－16cDNA的克隆、测序与表达利用     

原发性小肠肿瘤的外科治疗及其预后

 目的 探讨原发性小肠肿瘤的临床特点、诊断及外科治疗经验。方法 回顾性分析2010-05至2015-05于我院经手术治疗的87例原发性小肠肿瘤的临床资料,分析其临床表现、病理结果、手术情况、术后并发症及预后。结果 87例原发性小肠肿瘤均经病理确诊。常见临床表现有腹痛(51例)、消化道出血(29例)、腹部包块(12例)、肠梗阻(17例)、黄疸(3例),6例为查体发现。良性26例,恶性61例;26例良性肿瘤均行肿瘤及肠管局部切除,恶性肿瘤行根治性切除49例,姑息性切除4例,短路手术6例。59例获得随访,随访时间为6个月至5年,其中良性肿瘤23例,复发3例,恶性肿瘤36例,原位复发11例。结论 小肠肿瘤临床表现不典型,早期诊断困难,手术切除是主要的治疗手段。     

丙型肝炎病毒E1蛋白的模拟表位研究

目的 研究HCV E1蛋白的B－细胞表位。方法 将携带HCV E1基因的重组质粒pQE-30-HCVe118在E.coli M15中进行大量诱导、表达;对表达的E1蛋白进行分离、纯化;再以纯化的蛋白捕获HCV感染者血清中能与HCV E1蛋白特异反应的IgG,以此IgG作为筛选分子,对随机十二肽库进行淘洗,经ELISA筛选噬菌体阳性克隆并测序。结果 HCV E1蛋白获得了高纯度的纯化,这种蛋白可特异地与部分丙型肝炎患者血清发生反应。在获得的10个模拟表位中,6、2和2个递呈肽分别与HCV E1蛋白的320－336aa、251－263aa和225－248位aa具有最大同源性。结论 在E1蛋白中存在多个B－细胞表位,320－336位极可能为HCV E1蛋白的优势表位。     

丙型肝炎病毒包膜区E2基因的克隆、表达及其感染者中E2抗体检测的意义

目的　对丙型肝炎病毒 (HCV)包膜区E2基因进行克隆与表达 ,并将纯化的E2蛋白用于对HCV感染者血清中E2抗体的检测。方法　首先从HCV感染者血清中经随机引物反转录和聚合酶链反应 (PCR)获得E2区基因片段 ,然后克隆入原核表达系统pQE 30中进行蛋白表达、纯化 ,并检测表达蛋白的抗原性。结果　获得一段具有正确读码框架的E2区基因 ,全长 984bp ,表达蛋白分子量为 38kD。经与HCV感染者血清进行ELISA检测 ,证明其具有一定的抗原性。结论　本实验为研究HCV外膜蛋白的基本特点、血清学诊断意义和HCV疫苗设计提供了基础资料