膀胱肿瘤分子标志物和基因治疗研究新进展

膀胱癌在中国居泌尿系统肿瘤之首,多见于男性,大多来源于上皮细胞,占95%以上,其中90%以上为移行细胞癌（transitional cell carcinoma,TCC）,鳞状细胞癌和腺癌较少见.依据组织病理学检查和临床表现将TCC分为表浅型和侵袭型两类,80%的早期TCC病人表现为无痛、低分化且局限于粘膜层.大部分病人可通过手术和化疗或放疗进行治疗,但其复发率高达70%,2年内复发和转移率高达50%.目前,组织病理学检测和肿瘤分期分级为膀胱癌主要的预后指标,尽管可提供某种程度的预后信息,对复发和生存率有一定意义,但仍有许多不足.     

RNA干扰对乳腺癌细胞株MCF-7/Adr多药耐药性的逆转

目的研究小分子干扰RNA对乳腺癌耐药细胞株MCF7/Adr多药耐药性的逆转作用。方法设计针对mdrl基因的SiRNA,转染进MCF-7/Adr细胞;用荧光定量PCR检测mdrlmRNA的表达,流式细胞仪分析Pgp表达,MTT法检测阿霉素对MCF-7/Adr细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果该SiRNA能使耐药细胞株MCF-7/Adr的mdrlmRNA和Pgp表达水平分别显著下调(P<0.01),并使阿霉素对MCF7/Adr的IC50显著降低(P<0.01)。结论RNA干扰可逆转乳腺癌MCF7/Adr细胞株的多药耐药性。     

TaqMan-MGB探针实时荧光PCR在β地中海贫血植入前诊断中的应用研究

目的建立单细胞MGB探针荧光PCR检测β地贫的方法以及在β地贫PGD中的应用研究。方法获取β地贫基因携带者单个淋巴细胞,建立稳定的单细胞MGB探针荧光PCR检测技术,并对2例双方均为β地贫基因携带者的夫妇应用MGB探针荧光PCR进行了β地贫的PGD。结果利用单细胞MGB探针荧光PCR检测了β地贫基因携带者的200个单个淋巴细胞的基因型,平均扩增效率为94%,平均等位基因脱扣(ADO)率为2.5%。对两对夫妇进行4个周期PGD,共活检16个胚胎,获得16个卵裂球,其中15个卵裂球扩增成功,扩增效率为93.8%,ADO率为6.2%。14个胚胎经PCR分析后获得明确诊断,移植了4个胚胎,获得1例临床妊娠。孕11周时经腹吸取绒毛,证实为完全正常胚胎,最终分娩了一正常女婴。结论应用单细胞MGB探针荧光PCR技术可对β地贫以及其它单基因遗传病进行植入前遗传学诊断,达到优生目的。     

8精氨酸加压素_(4-9)肽对衰老脑突触体氨基酸掺入的影响

本文采用分离实触体体外摄取的方法研究8精氨酸加压素_(4-9)(AVP_(4-9))肽片段对青年(3月龄)和衰老(27月龄)大鼠脑的突触体氨基酸掺入和蛋白质合成的影响。结果显示,衰老时海马、额叶和颞叶皮质突触体的~3H—亮氨酸摄取明显减少(P<0.01),AVP_(4-9)肽能够促进上述脑区的突触体的亮氨酸摄取能力,以海马的突触体对AVP_(4-9)肽的反应最强,AVP_(4-9)肽对老年鼠各脑区的促进作用较青年鼠减弱,提示AVP_(4-9)肽对老年性神经精神疾病记忆损害的潜在治疗作用可能与其提高突触体的活性及增加蛋白质合成能力有关。     

线粒体基因突变与2型糖尿病研究进展

线粒体是细胞能量储存和供给的场所,可以将能量转化为驱动细胞反应的各种形式。线粒体基因突变通过影响细胞内能量转化而导致2型糖尿病发生。近年来线粒体基因(mtDNA)突变被认为是糖尿病的一种新的病因。1997年美国糖尿病学会(ADA)把线粒体糖尿病列为特殊类型糖尿病,属于β细胞遗传缺陷疾病。线粒体糖尿病也是一大类异质性疾病,为加深对此病的认识,本文主要就所报道的线粒体糖尿病的突变位点、发病机制、主要的临床特点及其诊断和治疗方面的进展做一综述。     

siRNA逆转乳腺癌多药耐药的研究

目的研究siRNA(small interfering RNA)对乳腺癌多药耐药性的逆转作用。方法设计针对MRP基因的siRNA,转染乳腺癌MCF-7/adr细胞,用实时荧光定量PCR分析MRP mRNA的表达;流式细胞仪检测MRP蛋白表达和细胞内柔红霉素积累量。结果该siRNA能使耐药细胞株MCF-7/adr中MRP基因的mRNA及蛋白表达水平分别下调(58.16±1.36)%、(51.87±1.90)%(P<0.05),细胞内柔红霉素积累量显著增加(P<0.01)。结论siRNA可逆转乳腺癌的多药耐药。     

一种新的鸟氨酸氨基甲酰转移酶基因突变E122G的鉴定

目的：测定1个迟发型鸟氨酸氨基甲酰转移酶（ornithine transcarbamylase,OTC)缺乏症的中国汉族家系的基因突变及患者OTC基因外显子序列。方法：用聚合酶链反应－单链构象多态性结合PCR产物直接测，鉴定其突变类型。结果：在该家系患者OTC基因中确认了1个新的错义突变E122G，位于第4外显子的保守残基（GAA→GGA）。结论：OTC基因中E122G突变引起迟发型OTC缺乏症，是1个尚未报道的突变。     

丙型肝炎病毒(HCV)荧光PCR(F-PCR)试剂盒的研制及与免疫学方法的比较

目的：用荧光PCR（Fluorescence PCR,F-PCR）方法研制丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,HCV)RNA检测试剂盒，通过临床验,春性能，并与免疫学方法比较。方法：F－PCR是PCR和荧光探针杂交技术结合所产生的PCR方法。由于采用完全闭管荧光检测，避免了PCR后处理导致的假阳性污染；又采用了荧光检测技术，可以提高检测的灵敏度。结果：设计合成了HCV F－PCR诊断试剂盒。检测了512份临床血清标本，以美国Abbott公司的HCV ELISA诊断试剂盒和美国Biotronics公司的HCV荧光RT－PCR诊断诊断试剂盒（B－PCR）为对照。阳性率30.5%，灵敏度97.3%，特异性98.1%。结论：F－PC的灵敏度显著优于ELISA，也高于B－PCR；三者的特异性无统计学差异。F－PCR试剂盒可以检测HCV的真实感染情况，对于临床诊断和疗效考察有一定的指导意义。     

神经生长因子对老年鼠穹窿海马伞损伤后齿状回胆碱能突触重构的作用

损伤老年鼠左侧穹窿海马伞，造成隔-海马胆碱能系统损害模型。用免疫电镜和形态计量学分析NGF对齿状回分子层受体（NGFr）阳性突触和胆碱乙酰转移酶（ChAT）阳性轴突终未的影响。结果显示：损伤一个月后，损伤侧齿状回分子层NGFr阳性突触前终末、实触后致密物和ChAT阳性轴突终末面积和周长都有不同程度的缩小；脑室注射NGF，损伤侧齿状回分子层NGFr阳性突触和ChAT阳性实触终末都有一定的恢复．提示NGF对齿状回分子层受损的NGFr阳性突触和ChAT阳性轴突终未的重构具有促进作用。     

神经生长因子在老年痴呆动物模型中的作用

将老年大白鼠(24个月)左侧海马繖部分切断,建立基底前脑胆碱能损害的老年痴呆动物模型。予侧脑室注射神经生长因子(NGF),分别在用药后15天和30天测隔区和海马胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性。以正常鼠组和细胞色素C注射组作为对照。损害后隔区和同侧海马ChAT活性显著减少;NGF15天治疗组,隔区和损害对侧海马酶活性显著增加,是正常组的130％;30天治疗组,同侧海马酶活性比细胞色素C组增加48％。结果表时,NGF对老年鼠基底前脑胆碱能系统损害的治疗是有效的。本文还讨论了NGF在损害后急、慢性期的作用机制。