异丙酚对离体新生大鼠脊髓运动神经元的抑制作用

目的　研究脊髓运动神经元是否是新型静脉全麻药异丙酚 (propofol)作用的靶位 ,并观察异丙酚对离体新生大鼠运动神经元 (MN)的作用 ,分析其可能机制。方法　应用新生大鼠脊髓切片MN细胞内记录技术。结果　实验中记录到的 2 9个神经元 ,其基本电生理参数为静息电位 (-67.8± 6.8)mV ,斜率电阻 (66.3±3 1 .8)MΩ ,时间常数 (4 .9± 1 .7)ms,动作电位 (AP)幅度 (70± 9.3 )mV、超射 (2 .1± 8.9)mV、阈电位(-49.3± 7.5 )mV及半幅时程 (1 .4± 0 .6)ms。对 1 2个细胞进行 0 .1～ 1mmol/L异丙酚灌流 ,结果 0 .1mmol/L的异丙酚对其电生理性质的影响无显著意义 (n =1 2 ,P >0 .0 5 ) ;而在 9个测试细胞中 ,0 .3mml/L异丙酚提高了细胞内去极化诱发AP的阈值 (P <0 .0 5 ) ;1 .0mmol/L的异丙酚还在 7/ 8的测试细胞中 ,完全可逆地抑制AP的产生。同时进行电流强度 放电频率关系曲线分析 ,显示异丙酚(0 .3和 1 .0mmol/L)呈浓度依赖性、可逆地抑制MN的AP发放。另外 ,异丙酚 (0 .1～ 1mmol/L)对由背根电刺激引发的兴奋性突触后电位 (EPSP) ,也有浓度依赖性、可逆的抑制作用 (n =4)。但对照试验显示 ,脂肪乳剂对脊髓MN的基本电生理性质均没有影响。结论　异丙酚对离体新生大鼠脊髓运动神经元的活动 ,可能存在直接的抑?     

活性调节细胞骨架蛋白与岛叶点燃大鼠学习记忆的关系

目的 检测活性调节细胞骨架蛋白(Arc)在模型大鼠海马组织中的表达,探讨Arc与岛叶点燃大鼠学习记忆的关系.方法 成年SD大鼠随机分为模型组、假手术组和空白对照组.应用避暗试验检测各组大鼠学习记忆功能.采用免疫组化、Western blot检测不同时间点Arc蛋白在海马组织中表达水平,运用RT-PGR检测其基因表达水平.结果 慢性电点燃成功后第1天(即点燃0周),点燃组、假手术组及空白对照组学习记忆能力差异无统计学意义(P＞0.05).点燃2周:潜伏期(LT)(48.87±3.42)s,穿梭次数(EN)(2.75±0.99)次.点燃3周:LT为(48.71±2.77)s,EN为(2.75±1.15)次.点燃2周、3周与0周相比学习记忆功能增强(P＜0.05).点燃4周与0周组比学习记忆功能明显下降(P＜0.05).Arc在各组内蛋白及基因的表达均在1 h开始增加,6 h达到高峰,12 h恢复到基线水平.组间对比,2-3周内峰值最高,上升幅度明显(P＜0.01),4周峰值及幅度明显下降(P＜0.05),假手术组、空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 岛叶电点燃大鼠学习记忆功能及Arc在海马中表达变化趋势一致.Arc与岛叶点燃大鼠学习记忆功能密切相关.

Abstract：

Objective To research the expression of activity- regulated cytoskeletal protein in Insula Chronic Electricity igniting epilepsy rat's hippocampus,and to study the relation between Arc and electricity igniting epilepsy rat's learning and memory.Methods Adult SD rats were divided into model groups,sham operation groups,blank control groups.The model of rat insula chronic electricity igniting was built,and rats learning and memory ability were examined by way of passive avoidance test.The expression level of Arc in hippocampus was test by both immunohistochemistry and western blot,and the expression of Arc gene was test by RT- PCR.ResultThere was no significant difference of learning- remembering ability of rats between igniting group,control group and sham groups (P ＞ 0.05) in the first week after insular chronic ignition when passive avoidance test was examined.The increased learning- remembering ability appeared in the 2nd week (LT:48.87 ± 3.42 s; EN:2.75 ± 0.99) ,3rd week(LT:48.71 ± 2.77 s;EN:2.75 ± 1.15) after the ignition(P ＜0.05).After 4 weeks,there was obvious decline of learn and memory (P<0.05 ).When testing the molecular biology of Arc,there was an enhancement in expression of protein and gene for Arc in subgroup time point from 1 h,to the submit when 6 h,and to primary level when 12 h.The general tendency was to rise when one week(w),to rise fast when 2w-3w,to rise obviously slowly when 4w(P ＜0.05).There was no sense for false operation sets and blank comparison sets.Conclusion The general tendency of the expression of Arc in rat hippocampus after the chronic insular electricity ignition is consistent with the learning- remembering ability of epilepsy rats.Arc is closely associated with the learning- remember ability for epilepsy rats.     

线粒体ATP敏感性钾通道:脑缺氧/缺血预适应保护的新焦点

脑缺氧／缺血及药物等多种因素预适应对脑缺氧／缺血损伤有明显的保护作用。自Noma1983年发现心肌细胞膜上存在ATP敏感性钾通道（KATP）以来，KATP被认为是介导脑缺氧／缺血预适应重要的效应器。随着研究的深入，Inoue等于1991年在线粒体内膜发现了KATP，线粒体内膜ATP敏感性钾通道（mito-KATP）则成了人们新的关注焦点。虽然mito-KATP还没有被克隆出来，但现有相关领域的研究结果暗示mito-KATP将在脑缺血/缺氧预适应的脑保护中占有越来越重要的地位。     

DBS对海人酸癫痫大鼠突触外GABAA受体亚基的影响

目的研究DBS治疗对海人酸癫痫大鼠大脑中突触外GABAA受体δ亚基分布与表达的影响,为癫痫的发病机制与DBS的治疗机制的研究提供参考。方法雄性SD大鼠24只,随机分为正常对照组、癫痫组、DBS治疗组。通过免疫组织化学方法检测突触外GABAA受体δ亚基在大鼠大脑中的分布与表达量的变化。结合大鼠脑电信号的采集分析以及病理形态学观察,分析DBS在癫痫治疗中的作用以及对突触外GABAA受体δ亚基的影响。结果 DBS治疗组大鼠癫痫发作次数(6.01±4.87,n=8)明显低于癫痫对照(17.31±4.59,n=8),P<0.05;DBS治疗可有效抑制癫痫大鼠海马异常放电;DBS治疗组(463.62±38.41,n=8)大鼠海马神经元坏死及胶质细胞增生程度较癫痫组轻(357.12±20.50,n=8)(P<0.05);正常对照组大鼠脑组织突触外GABA受体δ亚基主要分布在海马(IOD=30.96±2.73,n=8)与丘脑腹外侧核(IOD=32.85±2.35,n=8)。癫痫组大鼠脑组织海马(IOD=12.31±1.72,n=8)及丘脑腹外侧核(IOD=22.39±1.94,n=8)突触外GABA受体δ亚基表达下降。DBS治疗组的丘脑腹外侧核(IOD=35.91±3.97,n=8),海马区(IOD=22.74±2.08,n=8)突触外GABA受体δ亚基表达比癫痫组表达增高(P<0.05)。结论丘脑底核DBS治疗可以通过改变大脑突触外GABA受体δ亚基的表达,抑制癫痫大鼠海马的异常放电,减轻癫痫大鼠海马神经元病理变化,起到对癫痫的治疗作用。     

全麻药对脊髓运动神经元作用的受体机制

全麻药的主要作用包括意识和记忆的丧失、无痛、对伤害性刺激的反射消失等,对于吸入性全麻药来说,对伤害性刺激的反射消失作用可用来表示全麻药的强度,即最低肺泡有效浓度(MAC),也就是在大气压下疼痛刺激时,50%病人或动物不出现体动或逃避反应,肺泡中某吸人全麻药的浓度.近年的研究表明,MAC可能主要由全麻药的脊髓作用决定,因为横断脊髓并不影响大鼠的MAC,而且异氟醚(isoflurane)同时施加于脑和脊髓的MAC远低于单独施加于脑的MAC,提示脊髓是全麻药作用的重要靶点,而且MAC可能部分是由全麻药对运动神经元(MN)的直接抑制所决定.     

DBS对海人酸癫痫大鼠突触外GABAA受体亚基的影响

目的研究DBS治疗对海人酸癫痫大鼠大脑中突触外GABAA受体8亚基分布与表达的影响,为癫痫的发病机制与DBS的治疗机制的研究提供参考。方法雄性SD大鼠24只,随机分为正常对照组、癫痫组、DBS治疗组。通过免疫组织化学方法检测突触外GABAA受体8亚基在大鼠大脑中的分布与表达量的变化。结合大鼠脑电信号的采集分析以及病理形态学观察,分析DBS在癫痫治疗中的作用以及对突触外GABAA受体8亚基的影响。结果DBS治疗组大鼠癫痫发作次数（6．01．4-4．87,n=8）明显低于癫痫对照（17．314-4．59,／7,=8）,P〈0．05;DBS治疗可有效抑制癫痫大鼠海马异常放电;DBS治疗组（463．62-I-38．41,n=8）大鼠海马神经元坏死及胶质细胞增生程度较癫痫组轻（357．12±20．50,n=8）（P〈0．05）;正常对照组大鼠脑组织突触外GABA受体8亚基主要分布在海马（IOD=30．96±2．73,／7,=8）与丘脑腹外侧核（IOD=32．85±2．35,／n=8）。癫痫组大鼠脑组织海马（IOD=12．31±1．72,n=8）及丘脑腹外侧核（IOD=22．39±1．94,n=8）突触外GABA受体8亚基表达下降。DBS治疗组的丘脑腹外侧核（IOD=35．91±3．97,n=8）,海马区（IOD=22．74±2．08,n=8）突触外GABA受体8亚基表达比癫痫组表达增高（P〈0．05）。结论丘脑底核DBS治疗可以通过改变大脑突触外GABA受体8亚基的表达,抑制癫痫大鼠海马的异常放电,减轻癫痫大鼠海马神经元病理变化,起到对癫痫的治疗作用。     

BDNF、TrkB在岛叶慢性电点燃大鼠海马中的表达及与学习记忆的关系

目的研究岛叶慢性电点燃癫痫模型大鼠的学习记忆功能,检测脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophic factor,BDNF)、酪氨酸蛋白激酶受体B(Tyrosine receptor kinase B,TrkB)在海马组织中表达,探讨BDNF、TRKB与岛叶点燃大鼠学习记忆的关系。方法成年SD大鼠随机分为模型组、假手术组、空白对照组,建立大鼠岛叶慢性电点燃模型。用避暗试验方法检测岛叶慢性电点燃模型大鼠学习记忆功能,采用免疫组化和western blot方法分别检测BDNF、TrkB蛋白在海马组织中表达水平,用RT-PCR检测两因子基因表达水平。结果岛叶慢性电刺激点燃成功后第1天(即0周),学习记忆能力点燃组与空白对照组、假手术组差异无统计学意义(P>0.05)。点燃2周点燃组避暗试验结果的LT为(48.87±3.42 s)、EN为(2.75±0.99次);点燃3周点燃组避暗试验结果的LT为(48.71±2.77 s)、EN为(2.75±1.15次),与点燃当天(即点燃0周)相比学习记忆功能增强(P<0.05),点燃4周后与对照组比学习记忆功能明显下降(P<0.05)。BDNF、TrkB表达均在24h达到高峰(P<0.05),空白对照组、假手术组无明显变化。组间比较、峰值及增幅均出现在2～3周内(P<0.01),4周后较前几周组明显下降(P<0.05)。结论岛叶电点燃大鼠学习记忆功能与BD-NF、TrkB在海马中表达总变化趋势一致。BDNF、TrkB与岛叶点燃大鼠学习记忆功能密切相关。     

BDNF、TrkB在岛叶慢性电点燃大鼠海马中的表达及与学习记忆的关系

目的研究岛叶慢性电点燃癫痫模型大鼠的学习记忆功能,检测脑源性神经营养因子（brain-derivedneurotrophic factor,BDNF）、酪氨酸蛋白激酶受体B（Tyrosine receptor kinase B,TrkB）在海马组织中表达,探讨BDNF、TRKB与岛叶点燃大鼠学习记忆的关系。方法成年SD大鼠随机分为模型组、假手术组、空白对照组,建立大鼠岛叶慢性电点燃模型。用避暗试验方法检测岛叶慢性电点燃模型大鼠学习记忆功能,采用免疫组化和western blot方法分别检测BDNF、TrkB蛋白在海马组织中表达水平,用RT-PCR检测两因子基因表达水平。结果岛叶慢性电刺激点燃成功后第1天（即0周）,学习记忆能力点燃组与空白对照组、假手术组差异无统计学意义（P〉0.05）。点燃2周点燃组避暗试验结果的LT为（48.87±3.42 s）、EN为（2.75±0.99次）;点燃3周点燃组避暗试验结果的LT为（48.71±2.77 s）、EN为（2.75±1.15次）,与点燃当天（即点燃0周）相比学习记忆功能增强（P〈0.05）,点燃4周后与对照组比学习记忆功能明显下降（P〈0.05）。BDNF、TrkB表达均在24h达到高峰（P〈0.05）,空白对照组、假手术组无明显变化。组间比较、峰值及增幅均出现在2～3周内（P〈0.01）,4周后较前几周组明显下降（P〈0.05）。结论岛叶电点燃大鼠学习记忆功能与BD-NF、TrkB在海马中表达总变化趋势一致。BDNF、TrkB与岛叶点燃大鼠学习记忆功能密切相关。     

大鼠中脑导水管周围灰质向下丘脑orexin神经元的纤维投射

目的:明确中脑导水管周围灰质(PAG)神经元调节下丘脑orexin神经元的解剖学基础。方法:首先采用逆行示踪技术,将霍乱毒素B亚单位(CTb)作为逆行示踪剂注射到下丘脑orexin神经元胞体分布的区域,免疫组织化学方法染色观察PAG内CTb逆行标记细胞的分布特点;接着采用顺行示踪技术和免疫组化相结合的方法,将生物素化葡聚糖胺(BDA)作为顺行示踪剂注射到PAG,观察下丘脑内BDA标记的神经纤维与orexin神经元的重叠分布特点;最后运用免疫电镜技术观察BDA标记轴突终末与orexin神经元之间的突触联系。结果:CTb注射到单侧下丘脑orexin神经元区域后,在PAG观察到大量CTb标记神经元,注射点同侧标记细胞数明显占优,其中PAG外侧区(lPAG)和腹外侧区(vlPAG)可见大量CTb逆标神经元,背外侧区(dlPAG)和背内侧区(dm PAG)可见少量标记神经元;注射点对侧lPAG及vlPAG区域也观察到少量CTb标记神经元。BDA注射到单侧lPAG后,下丘脑内双侧均可观察到BDA标记的神经纤维,但注射点同侧标记神经纤维数量明显占优。BDA标记纤维与orexin神经元胞体在穹窿背侧接近不定带(ZI)的区域(本文中将此区域称作"穹窿上区")形成显著的重叠分布。透射电镜下观察到BDA标记的轴突终末与orexin神经元之间形成突触联系,且多为非对称性类型。结论:lPAG投射到下丘脑的神经纤维在穹窿上区与orexin神经元形成优势重叠分布、并与orexin神经元的胞体或树突形成以非对称性为主的突触联系,提示orexin神经元可能在lPAG的直接支配下发挥其调节觉醒状态、摄食行为等功能。