炭疽保护性抗原受体结合区的关键氨基酸位点分析

目的 分析炭疽毒素保护性抗原（PA）受体结合区与其功能相关的关键氨基酸位点。方法通过定点突变的方法将PA的Asp^683分别突变成为一系列带有不同电荷以及不同长度侧链的氨基酸，通过细胞毒性实验分别探询电荷及立体结构对其活性的影响。同时对Asp^683的一些邻近氨基酸进行了定点突变的研究。结果细胞毒性实验显示，不同的突变导致了PA活性不同程度的下降，其中Asp^683电荷的改变对其活性的影响尤为明显，但当它突变为不带电荷的氨基酸时，PA仍然保留了一定的活性；而当Asp^683突变为带正电的Lys后，PA却保留了相对较高的活性。结论Asp^683所带的负电荷在PA与其受体的相互作用中起着关键的作用，但PA与其受体之间的相互作用可能还通过一些其他方式进行。     

LFn-PSCA融合蛋白的表达和生物活性研究

目的 研究大肠杆菌中表达的炭疽毒素致死因子氨基端与前列腺干细胞抗原（PSCA）融合蛋白的生物活性.方法 分别扩增炭疽毒素致死因子LF（lethal factor）N端254个氨基酸（LFn）的基因片段和PSCA氨基酸29～100的基因片段,将两片段先后克隆进分泌型载体pAS22中,构建成表达质粒pAS-LFn-PSCA,在大肠杆菌中表达,并对融合蛋白进行纯化和活性检测.结果 实现了融合蛋白LFn-PSCA的分泌型表达.纯化后纯度可达90%以上.体外试验显示LFn-PSCA对小鼠巨噬细胞无毒性,并保留了LFn与保护性抗原结合的活性.结论 在大肠杆菌中实现了LFn-PSCA的分泌型表达,为继续进行以炭疽毒素为载体增强机体免疫应答的研究打下基础.     

炭疽毒素保护性抗原和LFn介导的增强型绿色荧光蛋白进入HeLa细胞的研究

目的 研究炭疽毒素保护性抗原(protective antigen,PA)和致死因子(lethal factor,LF)N端254个氨基酸(LFn)在辅助增强型绿包荧光蛋白(EGFP)进入细胞中的作用.方法 分别扩增炭疽毒素的基因片段和EGFP的基因全长,将两片段先后克隆至pET-21a(+),构建成重组表达质粒pET-LFn-EGFP,在大肠杆菌中诱导表达,并对融合蛋白LFn-EGFP进行纯化.利用荧光共聚焦显微镜和流式细胞术研究LFn-EGFP融合蛋白进入细胞的情况.结果 获得较高纯度的融合蛋白LFn-EGFP,纯度可达90%以上,体外实验显示该融合蛋白保留了LFn与PA结合的活性,并且能够进入到HeLa细胞中.结论 LFn-EGFP蛋白本身也会以未知的机制进入细胞,在PA辅助时,LFn-EGFP进入细胞的效率会有所增加.