体外免疫法抗MG7人源性单抗的研制及其意义

本文建立了人淋巴细胞体外致敏技术,用本文作者既往制备的鼠抗人胃癌单抗MG7作为免疫原,在体外致敏人淋巴细胞获得成功。经与本文作者在建立的人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1进行人鼠人双杂交,获得一株能与鼠源性抗体反应,但不与人、羊、马、兔等其他种属动物产生的抗体相反应的人源性单抗HMG7。本文讨论了HMG7可能的应用价值,以及在人淋巴细胞体外致敏过程中应注意的几个环节。     

fas基因与bcl-2反义RNA转导胃癌耐药细胞的药敏上调效应

目的比较fas基因和bcl-2基因在胃癌耐药细胞与非耐药细胞表达的差异,将fas基因和bcl-2反义核酸导入胃癌耐药细胞,并分析转导前后的细胞在mRNA与蛋白的表达水平,研究转导株与非转导株对化疗药物敏感性的区别.方法采用分子克隆技术将fas 基因和反义bcl-2片段分别插入真核表达载体pBK-CMV和pDOR-SV40的多克隆克隆位点之间,以脂质体介导法将两个重组表达载体分别转染受体细胞SGC7901/ VCR,G418筛选克隆细胞,Northern blot, Western blot检测耐药细胞与非耐药细胞以及转导细胞中fas基因和bcl-2基因mRNA及其蛋白的表达,MTT法药敏实验检测转导细胞与非转导细胞对VCR、顺铂、5-FU 的敏感性.结果真核表达载体pBK-fas cDNA和pDOR-bcl-2 cDNA转导胃癌耐药细胞后,分别从2×105细胞中筛选出大约80和120个抗性克隆,转导率各为0.4‰和0.6‰,随机各挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,均获得了稳定的抗性细胞,我们将此命名为SGC7901 fas/ VCR cell和SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell. 杂交结果表明,胃癌耐药细胞SGC7901/ VCR与非耐药细胞相比,bcl-2基因的表达明显较高,而fas基因表达极其微弱. 转导株SGC7901 fas/ VCR cell的fas mRNA及其蛋白水平的表达显著高于非转导株,SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell中bcl-2蛋白的表达明显低于非转导株. 2株转导细胞对VCR、顺铂、5-FU的敏感性明显高于非转导株.结论胃癌耐药细胞与非耐药细胞相比,bcl-2基因处于高表达状态,而fas基因处于极其低弱的表达状态. 通过脂质体介导的基因转染,有效地阻断了bcl-2蛋白在SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell的表达,明显增强了fas mRNA及其蛋白在SGC7901 fas/ VCR cell的表达. bcl-2反义核酸和fas基因转导胃癌耐药细胞后,对化疗药物的敏感性明显增加.     

丹参逆转胃癌耐药细胞的作用及其机制分析

目的探讨丹参对人胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR耐药性的逆转作用及其机制。方法以不同浓度的丹参(SAL)处理耐药系SGC7901/ADR及敏感系SGC7901细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测丹参对两种细胞系的毒性及半数抑制率(IC50),流式细胞仪(FCM)检测丹参对两种细胞内ADM浓度和细胞周期的影响,SP法免疫组化染色检测两种细胞P-糖蛋白(P-gp)和DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)的表达。结果丹参的非细胞毒性药物剂量为500 mg/L以下;丹参可逆转SGC7901/ADR细胞对ADM的耐药性,逆转倍数为1.89(P<0.01);提高细胞内ADM浓度,ADM增加1.55倍(P<0.05);丹参使细胞周期阻滞于G1、G2期;对细胞膜P-gp的表达轻度下降、TopoⅡ的表达略有增加,但无显著性差异(P均>0.05)。结论丹参对SGC7901和SGC7901/ADR细胞无杀伤作用。其机制是丹参能增加耐药细胞内化疗药物浓度,使DNA合成期(S期)细胞含量下降。     

抗结肠癌细胞单克隆抗体的制备及相应抗原免疫组化鉴定

离子显微镜是一种类似断层扫描的原理进行原子水平研究的先进设备。用微细离子束轰击组织表面,使特定的原子溅射出来成次级离子。每个离子都带有分析象素,经影象处理在荧光屏或底片上显示出来。     

胃癌单抗MG5相应抗原的纯化及分析

作者报告鼠抗人胃癌单克隆抗体MG5相应抗原的纯化和初步鉴定，首先收集胃癌患者转移性腹水癌细胞。制备可溶性抗原提取液。用concanavalin A(Con A)Sepharose 4B亲和层析法分离提取胃癌细胞糖蛋白成份后，再甩MG5-Sepharose 4B免疫亲和层析法纯化单抗MG5相应抗原。经高碘酸氧化，电泳脂蛋白染色SDS-PAGE和免癌印渍等实验分析，证实MG5相应抗原是一种含3个亚单位的糖蛋白，分子量分别为68kD、52kD和44kD，抗原决定簇存在于糖链上．免疫分析提示MG5相应抗原是一种新的胃癌相关抗原。     

结肠癌单克隆抗体MC3、5、7、10的制备及其相应抗原免疫组化定位的研究

本文报导用结肠癌转移淋巴结分离之癌细胞免疫小鼠制得4株单克隆抗体即MC 3、5、7、10。杂交瘤细胞已经过150余天的连续培养,至今分泌抗体稳定,抗体效价高。能直接用于福尔马林固定石蜡包埋的切     

抗胃癌人、鼠单克隆抗体系列的研制及其临床应用的综合研究

制备胃癌的单克隆抗体不仅对胃癌的诊断、特别是早期诊断具有重要意义,而且可用来制备胃癌的导向冶疗药物,以实现抗癌药物对胃癌细胞的选择性杀灭作用。 一,本综合研究先后用胃癌细胞株、不同患者胃癌转移淋巴结以及原发性胃癌组织分离之癌细胞等免疫小鼠,经45次细胞融合,共获得10株分别抗不同组织学类型胃癌的单克隆抗体(MG系列)。并用胃癌旁淋巴结分离之淋巴细胞与人骨髓瘤细胞融合,研制出2株抗胃癌的人源性单克隆抗体(HG系列)。     

胃部疾病者胃泌素细胞和生长抑素细胞的形态与分布的观察

本文用对比免疫荧光染色技术研究人胃窦粘膜中胃泌素细胞(G细胞)和生长抑素细胞(D细胞)的形态与分布特点。 一、材料和方法 选择胃部疾病64例。其中大致正常胃窦粘膜7例,表浅性胃炎7例,萎缩性胃炎18例,十二指肠球部溃疡20例,胃溃疡9例,复合性溃疡3例。以上病例均由纤维胃镜诊断,并经病理证实。手术获得引产胎     

胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型ScFv的制备

目的 制备胃癌单抗MGd1的单链可变区片段（single chain variable fragment,ScFv),为胃癌体内诊疗研究提供候选靶向载体分子。方法 从MGd1杂交瘤分离mRNA,RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因（VH和VLDNA）,二者经linkerDNA连接形成ScFvDNA,将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7感染后,获得重组噬菌体抗体ScFv,以高表达MGd1结合抗原的细胞株KATOⅢ对重组噬菌体抗体ScFv进行峡谷轮筛选后;随机挑取克隆经ELISA筛选MGd1ScFv单克隆,并对其结合抗原的能力进行鉴定。结果 VH、VL和ScFvDNA分别约为340、320和750bp,经两轮亲和筛选后,在随机筛检的30个克隆中得到12个噬菌体呈现型MGd1ScFv单克隆,其中结合抗原能力强的克隆有5个。结论 用噬菌体呈现技术成功地获得了单抗MGd1的ScFv,为拓展该抗体的应用范围奠定了基础。     

胃癌单克隆抗体的制备及其免疫组化研究

以低分化胃癌细胞株MKN-46-9免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,获得分泌抗胃癌单克隆抗体的杂交瘤株MG-5,-7,-9及-11。该杂交瘤株可稳定地分泌高效价抗体,能直接用于常规福马林固定,石腊包埋的切片的染色。ABC免疫酶染色表明,对应抗原在各种人体组织的分布有一定的限定性。MG-7及MG-9两种单抗对