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目的:设计并筛选能有效抑制人肝癌SMMC-7721细胞、人结肠癌Caco2细胞、人胃癌SCG-7901细胞增殖的增殖细胞核抗原(PCNA) siRNA。方法:总结以往提出的siRNA 设计原则的基础上,设计4 条PCNA siRNA,体外转录合成PCNA siRNA;并作用于3 种肿瘤细胞,WST-8法检测细胞增殖活性,筛选能有效抑制肿瘤细胞增殖的siRNA序列;RT-PCR检测细胞PCNA mRNA水平;免疫细胞化学方法检测 PCNA 蛋白表达水平。结果:4 条PCNA siRNA中,有3 条序列(No.2、No.4、No.3)的siRNA能有效抑制3 种肿瘤细胞的增殖;其中No.2、No.4作用效果最优,以50 nmol/L浓度作用48 h,对3种肿瘤细胞的增殖抑制率均可达到62%以上,No.2、No.4 PCNA siRNA均能在mRNA和蛋白水平显著下调PCNA的表达。结论:PCNA siRNA能在体外有效抑制SMMC-7721细胞、Caco2细胞、SCG-7901细胞的增殖,其适宜作用浓度为50 nmol/L,适宜作用时间为48 h。 相似文献
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目的: 观察小檗碱对脂多糖性肝损伤的防治效果及其作用机制。 方法: 将雄性昆明小鼠随机分成4组:① 对照组:用蒸馏水灌胃(0.01 mL/g),每天1次,共5 d,第5 d灌胃后1 h,腹腔注射生理盐水(0.02 mL/g);②小檗碱组:用5 g/L中性硫酸小檗碱灌胃(0.01 mL/g),每天1次,共5 d,第5 d灌胃后1 h,腹腔注射生理盐水(0.02 mL/g); ③ 脂多糖(LPS)组:除腹腔注射LPS(0.02 mL/g,28 mg/kg)外,其余处理同①;④小檗碱防治组:除腹腔注射LPS(0.02 mL/g,28 mg/kg)外,其余处理同②。腹腔注射后2 h和10 h去眼球取血,分别检测各组小鼠血清中TNF-α的含量以及丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;另于腹腔注射后24 h取肝组织标本,观察各组小鼠肝脏的组织学和超微结构的变化,同时测定肝组织MDA的含量及SOD的活性。 结果: LPS组小鼠血清ALT、AST活性明显高于对照组(P<0.01),而小檗碱防治组小鼠血清ALT和AST活性明显低于LPS组(P<0.05)。腹腔注射LPS后2 h,LPS组小鼠血清中TNF-α含量明显高于小檗碱防治组。组织学检查发现,LPS组小鼠肝细胞水肿、变性、坏死,肝窦充血;电镜下可见,肝细胞核溶解、部分核膜不完整,线粒体肿胀、嵴消失。小檗碱防治组小鼠肝脏的病理变化明显轻于LPS组。此外,LPS组肝脏组织中MDA的含量明显高于对照组(P<0.01),而小檗碱防治组肝脏组织中MDA的含量低于LPS组(P<0.05),但小檗碱防治组肝组织中SOD活性与LPS组比较无显著差异。 结论: 小檗碱可以减轻LPS引起的肝脏损伤,其作用机制可能与其抑制LPS诱导的TNF-α释放,减少肝组织脂质过氧化和保护肝细胞线粒体有关。 相似文献
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目的:观察α2-肾上腺素能受体激动剂B-HT933对脂多糖(LPS)刺激的心肌细胞产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响,并初步分析其作用机制。方法:分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞。利用免疫荧光染色观察心肌α2A-肾上腺素能受体的分布;B-HT933和/或LPS处理心肌细胞一定时间后,用ELISA方法检测细胞培养液中TNF-α的含量、实时荧光定量PCR测定心肌细胞TLR4和TNF-αmRNA的表达、Western blot分析心肌细胞中相关信号分子的磷酸化水平。结果:免疫荧光染色证实乳鼠心肌细胞中存在α2A-肾上腺素能受体。LPS以剂量和时间依赖的方式刺激心肌细胞产生TNF-α,0.1μmol/L的B-HT933处理能显著抑制LPS诱导的TNF-αmRNA的表达和TNF-α蛋白的产生。而且,BHT能抑制LPS诱导的心肌细胞IκBα的磷酸化。结论:乳鼠心肌细胞上存在α2A-肾上腺素能受体,其激动剂B-HT933可能通过抑制心肌细胞IκBα的磷酸化来减少LPS诱导的TNF-α产生。 相似文献
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半乳糖受体介导的PCNA反义核酸提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 研究半乳糖(galactose ,Gal) -聚乙烯亚胺(polyethyleneimine ,PEI)介导的增殖细胞核抗原(pro liferatingcellnuclearantigen ,PCNA)反义核酸(antisenseoligdeoxynucleotides ,ASODN)分别与3种常用化疗药物5 -氟尿嘧啶(5 -fluorouracil,5 -FU) ,顺铂(cis-Diamminedichloroplatinum ,DDP) ,羟喜树碱(hydroxyicamptothecine ,HCPT)联合作用于人肝癌Bel- 74 0 2细胞,观察它们对细胞增殖的抑制作用。方法 将Gal-PEI与反义核酸形成交联复合物Gal-PEI-ASODN ,用CCK - 8细胞计数试剂盒检测单纯使用化疗药物以及联合0 0 3μmol/LASODN或0 0 3μmol/LGal-PEI-ASODN对Bel- 74 0 2细胞增殖的抑制作用,并分别计算抑制率和IC50 。结果 单纯使用5 -FU ,DDP ,HCPT作用于Bel- 74 0 2细胞4 8h ,其IC50 分别为16 15 ,1 88,0 31μg/ml;ASODN与上述药物联合使用其IC50 分别为12 5 9,1 71,0 2 7μg/ml,将Bel- 74 0 2细胞对化疗药物的敏感性分别提高到单用化疗药物的1 2 8,1 10 ,1 15倍;Gal-PEI-ASODN与上述药物联合使用其IC50 分别为0 5 1,0 90 ,0 10 μg/ml,将Bel- 74 0 2细胞对化疗药物的敏感性分别提高到单用化疗药物的31 6 7,2 0 9,3 10倍。金正均Q值法分析表明:5 -FU与Gal-PEI-ASODN联合使用,表现为协 相似文献
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甲酸钠抗氧自由基损伤的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的和方法 :采用溶血试验 ,小鼠组织谷胱甘肽 (GSH)、脂质过氧化产物 (MDA)测定 ,采用质粒构象改变等方法检测甲酸钠的抗氧自由基损伤活性。结果 :甲酸钠明显抑制H2 O2 致人红细胞 (RBC)溶血作用 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;明显提高小鼠肝GSH水平 (P <0 .0 5 ) ;抑制小鼠肝、肾脂质过氧化的产生 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;抑制受辐射质粒PUC18超螺旋构象百分率的下降 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 :甲酸钠具有明显抗氧自由基损伤的活性 ,是一个良好的自由基清除剂。 相似文献
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整合素受体介导bcl-2反义核酸联合化疗药物对大肠癌细胞的增殖抑制作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:评价以整合素配体-聚乙烯亚胺复合物(RGD-PEI)为载体携带bcl-2反义核酸(ASODN)分别联合化疗药物三氧化二砷(As2O3)和羟喜树碱(HCPT)对大肠癌细胞caco-2增殖抑制的作用。方法:改良MTT法检测bcl-2ASODN联合化疗药物对细胞的半数抑制率(IC50),金正均Q值法判断化疗药物与反义核酸联合使用的效果,并计算化疗药物的增敏倍数。结果:单用As2O3和HCPT的IC50分别是3.478μmol/L及0.771μg/mL;0.75μmol/LASOND联合As2O3和HCPT的IC50分别为3.393μmol/L和0.726μg/mL,与单用As2O3和HCPT的IC50相似;而相同浓度的RGD-PEI-ASODN联合As2O3及HCPT的IC50分别为0.119μmol/L和0.071μg/mL,将caco-2细胞对化疗药物的敏感性分别提高29.2倍及10.8倍。结论:在整合素受体介导时可以有效提高反义核酸对caco-2细胞的增殖抑制率,与化疗药物联用能明显提高细胞对化疗药物的敏感性。 相似文献
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目的研究结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASODN)对人肾小管上皮细胞(HKC)转分化的影响。方法用巨噬细胞趋化因子-1(MCP-1)和马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)联合诱导HKC转分化模型。实验设空白对照组、模型对照组、PEI组、CTGFASODN10ng/mL组和CTGF ASODN100ng/mL组,分别采用WST-8法、流式细胞术、RT-PCR法、细胞免疫组织化学法检测不同浓度的CTGF ASODN对HKC转分化模型细胞增殖和细胞周期的影响,以及α-SMA mRNA表达和α-SMA、TGF-β1、Fibronectin(FN)蛋白表达的变化。结果 100ng/mL的CTGF ASODN对MCP-1和AAⅠ联合诱导HKC转分化细胞具有促进细胞增殖的作用,并可减少实验模型导致的细胞S期阻滞,降低α-SMA mRNA表达,减少α-SMA、TGF-β1和FN蛋白的表达。结论 CTGFASODN能够抑制MCP-1和AAⅠ导致的人HKC转分化。 相似文献
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目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASODN)对人肾小管上皮细胞(HKC)转分化的影响.方法 用巨噬细胞趋化因子-1(MCP-1)和马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)联合诱导HKC转分化模型.实验设空白对照组、模型对照组、PEI组、CTGF ASODN 10 ng/mL组和CTGF ASODN 100 ng/mL组,分别采用WST-8法、流式细胞术、RT-PCR法、细胞免疫组织化学法检测不同浓度的CTGF ASODN对HKC转分化模型细胞增殖和细胞周期的影响,以及α-SMA mRNA表达和α-SMA、TGF-β1、Fibronectin(FN)蛋白表达的变化.结果 100 ng/mL的CTGF ASODN对MCP-1和AAⅠ联合诱导HKC转分化细胞具有促进细胞增殖的作用,并可减少实验模型导致的细胞S期阻滞,降低α-SMA mRNA表达,减少α-SMA、TGF-β1和FN蛋白的表达.结论 CTGF ASODN能够抑制MCP-1和AAⅠ导致的人HKC转分化. 相似文献