乳腺癌易感基因BRCAl的BRCT结构域的融合表达及纯化

乳腺癌易感基因BRCAl在乳腺癌发生、发展中起着重要作用。在其C-末段有两个串联重复的BRCT(BRCTl和BRCT2)结构域。它们与BRCAl的重要功能密切相关，BRCT结构域还存在于其它50多种蛋白中。本文用PCR方法扩增了BRCTl和BRCT2结构域编码序列，并将其以正确相位与pGEX—2T载体中的GST编码序列融合，构建成重组质粒pGST—BRCTl和PGST—BRCT2。将这两种重组质粒分别转化E．coli DH5α后，分别表达了GST—BRCTl和GST—BRCT2两种融合蛋白。Western blot检测结果表明，两种融合蛋白均能与GST抗体反应。表达的GST—BRCTl和GST—BRCT1经GST—Sepharose 4B亲和层析获得了纯化的融合蛋白，为BRCT结构域及其相关蛋白功能研究提供了有用的材料。     

一种含多个CCP结构域的新型基因的克隆及生物学特性初探

目的克隆并分析新型基因CCP22，研究其结构及初探生物学特性。方法常规分子克隆、生物信息学分析、Western blot、RT—PCR。结果利用酵母双杂交技术从人乳腺文库中分离到一种含有22个补体调控蛋白（complement control protein，CCP）序列元件的新基因，命名为CCP22。生物信息学分析发现，该基因定位于人染色体9q31．2-32，共15个外显子，基因编码序列全长4494bp，编码1497个氨基酸。将CCP22基因全长编码序列克隆于真核载体中，该表达载体转染人胚肾细胞293T后获得的表达产物经Western blot证实CCP22属于分泌蛋白。将CCP22与绿色荧光蛋白（EGFP）标签融合后证实CCP22主要分布在细胞核外。Northern blot证实，内源性CCP22 mRNA转录本全长约6kb。RT-PCR检测表明，CCP22在正常乳腺细胞株中高表达，而在多种乳腺肿瘤细胞株中不表达或低表达。结论CCP22在乳腺肿瘤发生发展中可能发挥重要作用。     

目前接种的新冠疫苗有何区别?

请问,我国已有5款新冠病毒疫苗获批使用,这5款疫苗有何区别?打哪个品种更好呢? 安徽合肥马致远 按技术路线划分,5款疫苗分为三类:一是灭活疫苗,包括国药中生北京公司、国药中生武汉公司、北京科兴中维公司生产的3款灭活疫苗;二是腺病毒载体疫苗,为天津康希诺公司生产的5型腺病毒载体疫苗;三是重组亚单位疫苗,为重组新型冠状病毒...     

Smad4诱导大规模染色质伸展结构域定位

目的：了解Smad4能否调节大规模染色质结构改变并对其功能区域进行定位。方法：将Smad4及其缺失突变体与pRC-lac载体上lac的阻遏物融合并在AO3-1细胞中表达。该细胞株由CHO细胞衍变而来，整合有256个拷贝串联排列的lac操纵基因。在lac操纵子基因上游含有DHFR基因，可用甲氨蝶呤(MTX)进行基因共扩增。在细胞中lac阻遏物识别和结合lac操纵子基因。用抗lac阻遏物抗体进行免疫组化试验，荧光显微镜下观察染色质结构的改变。结果：野生型Smad4(1～552aa)有一定的诱导染色质伸展能力，且不依赖于TGF-β。N端区域(1～150aa)、中间连接区域(130～325aa)没有诱导大规模染色质伸展活性。C端区域(260～552aa)有一定的诱导染色质伸展能力，而C端缺失38个氨基酸残基的区域(260～514aa)能强烈地诱导大规模染色质伸展。结论：Smad4诱导大规模染色质伸展结构域位于260～514位氨基酸之间，C端38个氨基酸对Smad4诱导大规模染色质伸展有抑制作用。对Smad4诱导大规模染色质伸展活性特性的研究为揭示Smad4在肿瘤发生发展中的作用机制提供了新的途径。     

利用GST沉淀技术检测蛋白质间的相互作用

蛋白质间相互作用的研究作为了解蛋白质生物功能的重要手段之一,在功能基因组学研究中极为重要.蛋白质间相互作用存在于机体每个细胞的生命活动过程中.     

BRCA1对FHL2转录激活功能的影响

目的：进一步了解乳癌易感基因BRCA1与FHL2相互作用对FHL2转录激活功能的影响，为揭示BRCA1在肿瘤发生发展中的作用提供依据。方法：将BRCA1 C端缺失突变体BRCA1(△1443—1863aa)和BRCA1(△908，1863aa)按正确读框插入到pCR3载体中，并在293T细胞中表达。利用GAL4荧光素酶报告基因检测野生型BRCA1以及肿瘤易感突变体BRCA1(P1749R)，BRCA1(Y1853imA)，BRCA1(△1443—1863aa)和BRCA1(△908，1863aa)对FHL2转录激活活性的调节作用。结果：野生型BRCA1能增强FHL2转录激活活性，且具有剂量依赖性。而4种肿瘤易感突变体增强FHL2转录激活活性的能力明显减弱。结论：BRCA1与FHL2相互作用可能对基因转录调节以及肿瘤发生、发展中起着重要作用。     

乳腺癌易感基因BRCA1的BRCT结构域的融合表达及纯化

乳腺癌易感基因BRCA1在乳腺癌发生、发展中起着重要作用。在其C 末段有两个串联重复的BRCT(BRCT1和BRCT2 )结构域。它们与BRCA1的重要功能密切相关 ,BRCT结构域还存在于其它 5 0多种蛋白中。本文用PCR方法扩增了BRCT1和BRCT2结构域编码序列 ,并将其以正确相位与pGEX 2T载体中的GST编码序列融合 ,构建成重组质粒pGST BRCT1和pGST BRCT2。将这两种重组质粒分别转化E coliDH5α后 ,分别表达了GST BRCT1和GST BRCT2两种融合蛋白。Westernblot检测结果表明 ,两种融合蛋白均能与GST抗体反应。表达的GST BRCT1和GST BRCT2经GST Sepharose 4B亲和层析获得了纯化的融合蛋白 ,为BRCT结构域及其相关蛋白功能研究提供了有用的材料     

FHL1抗体的制备与特异性鉴定

目的:制备FHL1及其剪接体FHL1B、FHL1C的多克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。方法:融合表达GST-FHL1蛋白,常规免疫小鼠,制备多克隆抗体。分别构建带有FLAG标签的FHL1-5、FHL1B、FHL1C以及FHL1N端和C端缺失突变体的真核表达载体。Westernblot检测抗体的特异性。结果:获得了FHL1-5、FHL1B、FHL1C及FHL1(1-169aa)和FHL1(168-280aa)的真核表达载体;得到的多克隆抗体可特异识别FHL1、FHL1B和FHL1C,而不识别FHL2-5;抗体与FHL1N端反应,而不与其C端反应。结论:成功得到可特异识别FHL1、FHL1B和FHL1C的多克隆抗体,为进一步研究FHL1及其剪接突变体的功能奠定了坚实的基础。