粉防己碱对LPS诱导的大鼠发热模型的解热作用

目的:研究粉防己碱(tetrandrine,Tet)对脂多糖(lipopolysacchride,LPS)诱导的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠发热模型的解热作用及其机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、LPS模型组、对乙酰氨基酚对照组及粉防己碱5,15,45mg/kg组。用LPS100μg/kg腹腔注射建立大鼠发热模型,药物处理后每30min测体温一次,连续监测6h,观察大鼠的体温变化;运用Western-blot检测脑组织中环加氧酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)的表达,并用EIA法检测其前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)的含量;髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)试剂盒检测肝组织MPO水平。结果:粉防己碱能有效抑制LPS诱导的大鼠发热反应,显著降低脑组织中COX-2和PGE2的表达,抑制肝脏MPO水平。结论:粉防己碱具有显著的解热作用,其作用机制可能与抑制脑组织中COX-2和PGE2的表达,降低肝组织中MPO含量有关。     

重组人PPARα基因载体phPPARα-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系的建立

目的 建立体外phPPARα-IRES2-EGFP质粒高效转染并获得重组基因hPPARα高效表达的体系.方法 采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将phPPARα-IRES2-EGFP转染入293细胞,荧光显微镜观察质粒转染的293细胞绿色荧光蛋白(GFP)报告基因表达强度及转染效率,并对转染细胞hPPARα的表达进行荧光定量PCR和Western Blot检测.结果 荧光显微镜下可见转染phPPARα-IRES2-EGFP的293细胞GFP报告基因高表达,转染效率高达(83±9)%;并且,其hPPARα mRNA表达水平高于空载体转染对照组3个数量级,hPPARα蛋白表达也远高于对照组(P＜0.01),说明导入的重组质粒能够高效表达bPPARα.结论 成功建立重组质粒phPPARα-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系,为hPPARα受体功能的研究及基于hPPARα为靶标的药物筛选平台的建立奠定了基础.     

粉防己碱对脂多糖诱导下RAW264.7细胞炎症模型细胞因子的作用

目的 观察粉防己碱（tetrandrine,Tet）对脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞炎症模型促炎细胞因子和抗炎细胞因子的影响。方法 LPS（1 μg/mL）刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度Tet对RAW264.7细胞增殖的影响,激光共聚焦显微镜观察Tet对细胞核因子-κB（NF-κB）核转运的作用,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）的变化。结果 当Tet浓度＜1 μmol/L时,单独或与1 μg/mL LPS共培养,均对RAW264.7细胞生长无影响;而当Tet浓度＞10 μmol/L时,单独或与LPS共培养均表现出明显的细胞生长抑制效应;Tet可使IL-6、TNF-α的释放受到抑制,相反可促进IL-10的表达。激光共聚焦显微镜观察Tet大剂量组细胞核红染的阳性细胞显著减少,以阴性细胞（红染p65亚基主要集中在胞浆部位,使胞浆染色较深,胞核染色较浅,整个细胞成空泡状）为主。结论 Tet可以抑制LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与抑制NF-κB活化,进一步减少炎性细胞因子IL-6、TNF-α的产生,并促进抗炎细胞因子IL-10的表达等有关。     

Dual Effect of 3, 4-Dihydroxyacetophenone on LPS-induced Apoptosis in RAW264.7 Cells by Modulating the Production of TNF-α

To explore the pharmacological effect of 3,4-dihydroxyacetophenone (DHAP) on the apoptosis of RAW264. 7 macrophage cells and the mechanism, RAW264. 7 macrophage cells were treated with 100 or 500 mg/L lipopolysaccharide (LPS), with or without 10^-5 mol/L DHAP for 24 h. Trypan blue dye exclusion assay was used to assess cell viability. Cell apoptosis was morphological studied and flow cytometric assay was used. Tumor necrosis factor-α (TNF-α) level was measured by ELISA methods. IκB protein was determined by Western blotting. Our results showed that in 100 mg/L LPS stimulated macrophages, DHAP enhanced the cell apoptosis while in 500 mg/L LPS-stimulated macrophages, DHAP significantly inhibited the cell apoptosis. In both groups, DHAP increased the level of IκB but decreased the level of TNF-α. It is concluded that DHAP has dual effect on the apoptosis of RAW 264.7 cells treated with different concentrations of LPS. This effect may be due to the inhibition of activation of NF-κB and autocrine production of TNFα. Our study suggests that DHAP may have anti-inflammatory effect on LPS-activated macrophages.     

积雪草苷对脂多糖诱导急性肺损伤的白细胞介素-10和血红素氧合酶-1影响研究

目的观察积雪草苷对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）白细胞介素-10（IL-10）、血红素氧合酶（HO-1）影响。方法40只Balb／c小鼠随机分为空白组，模型组，积雪草苷5，15，45mg·kg。5组，每组8只。脂多糖（2．5mg·kg^-1）气管滴注造急性肺损伤模型，24h后处死小鼠，免疫印迹法检测肺组织HO—1蛋白表达，ELISA法检测血浆IL-10表达。结果积雪草苷各剂量组呈剂量依赖性增加脂多糖所致急性肺损伤模型肺组织HO-1蛋白和IL-10表达。结论积雪草苷对LPS诱导急性肺损伤保护效应可能与促进HO-1表达和IL-10含量有关。     

羟基积雪草苷与积雪草苷对LPS诱导大鼠发热模型的影响

目的观察积雪草苷和羟基积雪草苷的解热作用,并比较两者在解热作用上的差异。方法将80只SD大鼠随机分为空白组、模型组(LPS 100μg/kg)、溶酶对照组(羧甲基纤维素钠)、积雪草苷5,15,45 mg/kg、羟基积雪草苷10,20,40mg/kg、对乙酰氨基酚50 mg/kg组。腹腔注射LPS(100μg/kg)建立SD大鼠发热模型,绘制各组平均体温变化曲线,比较测量体温与基础体温差值ΔT。结果羟基积雪草苷(10,20,40 mg/kg)与积雪草苷(5,15,45 mg/kg)对LPS诱导的SD大鼠发热模型体温有显著的降温作用(P<0.05)。结论羟基积雪草苷和积雪草苷对LPS诱导的SD大鼠发热模型的体温均有降温作用,积雪草苷在某些时间点(如LPS注射5 h后)降温效应优于羟基积雪草苷。     

Dual Effect of 3, 4- Dihydroxyacetophenone on LPS-induced Apoptosis in RAW264.7 Cells by Modulating the Production of TNF-α

3, 4 dihydroxyacetophenone ( DHAP) is anactive component isolated from leaves of Tuma odongqing ( Ilex Pubescens Hook. Et Arn. Varglaber Chang), a Chinese traditional herb. It is in itially used to promote blood circulation and re move blood stasis[1, 2]. Previous experimental andclinical data proved that it could regulate the bal ance between TXA2 and PGI2, cause vesodilationand inhibit platelet aggregation[3]. It has showed agood curative effect in the…     

川芎嗪对脂多糖诱导巨噬细胞环氧化酶-2表达和心肌细胞凋亡的影响

目的观察川芎嗪对脂多糖(LPS)诱导RAW264．7小鼠巨噬细胞环氧化酶-2(COX-2)基因表达和活性的影响,进一步研究川芎嗪对脂多糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法采用RT—PCR和免疫印迹检测巨噬细胞COX-2基因表达,酶联免疫分析其活性,并应用荧光显微镜技术对乳鼠心肌细胞凋亡进行检测,荧光分光光度计测定细胞内钙离子浓度。结果10～mol／L,10^-5mol／L和10^-4mol／L川芎嗪可显著减少LPS刺激的巨噬细胞COX-2 mRNA和蛋白的表达(P<0．05,P<0．01),但不同浓度川芎嗪对COX-2活性无明显作用;10^-5mol／L川芎嗪可显著降低心肌细胞内钙浓度,拮抗LPS诱导的乳鼠心肌细胞凋亡(P<0．05)。结论川芎嗪具有抑制LPS诱导巨噬细胞COX-2表达和乳鼠心肌细胞凋亡的药理学效应。     

人宫颈癌组织环加氧酶2mRNA剪接异构体的表达

背景：宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发生、发展与环加氧酶2密切相关.目的：探讨人宫颈癌组织中是否存在环加氧酶2选择性剪接异构体的表达及其可能意义.设计：非随机对照实验.单位：重庆医科大学生物化学与分子药理学重点实验室,重庆医科大学附属第一医院妇产科.对象：选择13例重庆医科大学附属第一医院妇产科2002-03/2002-04宫颈癌住院患者的癌组织及正常组织.方法：设计一对全新引物,并采用反转录聚合酶链反应技术,从宫颈癌组织中分离环加氧酶2 mRNA,然后对电泳条带进行克隆、测序和分析.主要观察指标：①观察癌组织与正常组织反转录聚合酶链反应琼脂糖电泳结果.②分析癌组织与正常组织电泳条带测序结果.结果：①正常宫颈组织未发现环加氧酶2目的条带（252 bp）,而宫颈癌组织则出现两条条带,除环加氧酶2目的条带外,还有一新的电泳带（534 bp）,经克隆和测序证实,该新条带除目的条带的环加氧酶2 DNA的第7、8外显子序列外,还包含第7、8外显子间的内含子序列,即保留的内含子（282 bp）.②根据阅读框推测,在保留的内含子第48～50碱基出现终止密码.结论：发现宫颈癌组织中存在环加氧酶2基因的选择性剪接异构体（Genbank accession number：BU493602）,其所编码蛋白可能较已报道的环加氧酶2酶蛋白小.     

蛋白激酶Cα介导人神经胶质瘤细胞株多药耐药机制的研究

目的 探讨蛋白激酶Ca(protein kinase Cα,PKCα)在人神经胶质瘤细胞株SHG-44发生多药耐药过程中的作用和机制.方法 应用阿霉素浓度递增和间歇诱导法建立SHG-44/ADM耐药株,采用PKCα激活剂PMA和抑制剂Staurosporine分别干预SHG-44/WT和SHG-44/ADM细胞株,免疫印迹法检测PKCα和MDR-1的表达量,激酶分析PKCα活性,荧光分光光度计检测细胞内阿霉素浓度.结果 PKCα激活剂PMA增强细胞PKCα活性,同时增加MDR-1表达和活性;PKCα抑制剂Staurosporine抑制细胞PKCα活性,减少MDR-1表达和活性.结论 PKCα通过MDR-1参与神经胶质瘤细胞的多药耐药.