细粒棘球蚴中国大陆株Eg10基因片段的分子克隆和序列分析

目的 获得细粒棘球蚴（E．granulosus）Eg10基因片段，并进行序列分析。方法 从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴，提取总RNA，根据GeneBank公布的细粒棘球蚴Eg10基因片段已知序列，设计一对引物，采用RT-PCR技术扩增出细粒棘球蚴中国大陆株Eg10基因片段，将纯化后的PCR产物克隆到pGEM-T载体，进行序列测定和分析。结果 成功扩增出细粒棘球蚴中国大陆株k10基因片段，测序为938bp，该基因序列与检索基因核苷酸序列同源性为100％，推导编码氨基酸序列同源性亦为100％。结论 测序的k10基因序列有完整的编码框（765bp），对于进一步研究其结构和功能及对包虫病的免疫预防具有重要意义。     

细粒棘球蚴2HSP70重组质粒的构建、原核表达、纯化和初步鉴定

目的构建细粒棘球蚴（Echinococcus granulosus，EG）2热休克蛋白70（heat shock protein，2HSPT0）表达重组质粒，原核表达及纯化重组蛋白，并对重组蛋白进行免疫学特性的初步鉴定。方法从EG2HSP70／pGEM-T／JM109质粒中分离EG2HSP70目的基因，将此片段重组入表达载体pGEX-6P-1后转化入大肠杆菌BL21，鉴定后以IPTG诱导表达，通过SDS-PAGE检测其表达水平，用亲和层析纯化并分离重组蛋白，利用Western blot来鉴定重组蛋白的免疫学特性。结果酶切鉴定及测序分析表明，成功构建细粒棘球蚴pGEX-6P-1／EG2HSP70重组质粒；IPTG诱导表达后，融合蛋白占菌体总蛋白的39％，占裂解物上清总蛋白的70．4%，表明重组的EG2HSP70基因能在BL21中高效表达，表达的蛋白大部分以可溶性状态存在。亲和层析法纯化重组蛋白EG2HSP70，通过Western blot证实该重组蛋白能被细粒棘球蚴囊壁免疫兔血清识别。结论成功构建细粒棘球蚴中国大陆株pGEX-6P-1／EG2HSP70重组质粒，重组的EG2HSP70能够高效表达，表达的EG2HSP70具有免疫学活性。     

occludin蛋白与人乳腺癌细胞恶性增殖的相关性研究

目的: 探讨occludin蛋白的表达与人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3恶性增殖之间的关系。方法: 四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,FN蛋白黏附实验检测细胞黏附力,Transwell检测细胞迁移,RT-PCR检测occludin mRNA的表达,Western blot、细胞免疫化学技术检测occludin蛋白表达。结果: MCF-7细胞的增殖速度、S期所占比例、细胞黏附以及细胞迁移均小于MDA-MB-231和SKBR-3细胞(P < 0.05~P < 0.01),而MCF-7细胞中occludin mRNA及蛋白表达水平均高于MDA-MB-231和SKBR-3细胞(P < 0.01)。结论: occludin表达与人乳腺癌细胞恶性增殖、黏附及迁移呈一定的相关性。     

甜菜碱体外抑菌活性的研究

目的 研究甜菜碱对临床病原菌的体外抑菌活性.方法 采用试管二倍稀释法进行体外抑菌试验,测定甜菜碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌和白色念珠菌的最小抑菌浓度.结果 甜菜碱对4种病原菌标准菌株的最小抑菌浓度（MIC）为大肠杆菌的MIC 6.25 mg/ml、铜绿假单胞菌的MIC 3.125 mg/ml、金黄色葡萄球菌的MIC 6.25 mg/ml、白色念珠菌的MIC 25 mg/ml.结论 甜菜碱对4种病原菌的标准菌株都有明显的抑菌作用,尤其对铜绿假单胞菌的MIC值最低.     

乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒-DNA与常用血清标志物的相关性分析

目的: 评估乙型肝炎(乙肝)患者血清乙肝病毒DNA(HBV-DNA)载量与血清免疫和生化标志物之间的关系。方法: 收集214例乙肝患者血清, 分别用荧光定量PCR法、化学发光法和速率法检测血清中的HBV-DNA、乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)和丙氨酸氨基转移酶(ALT), 分析各标志物之间的关系。结果: 214例中, HBV-DNA阳性率为57.48%;HBeAg阳性率为28.04%。HBV-DNA载量与HBsAg和ALT水平均无相关关系(P>0.05), 但与HBeAg水平密切相关(P<0.01), HBV-DNA阳性组的HBeAg和ALT水平均明显高于HBV-DNA阴性组(P<0.01)。结论: HBV-DNA载量与HBeAg水平呈正相关关系, 与HBsAg和ALT水平无相关性, HBsAg水平作为HBV-DNA的替代方法仍需进一步验证。     

细粒棘球蚴中国大陆株线粒体苹果酸脱氢酶基因的克隆和序列分析

目的 获得细粒棘球蚴线粒体苹果酸脱氢酶（mMDH）基因片段，进行序列分析，为研究包虫病疫苗候选基因奠定基础。方法 从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA，根据国外细粒棘球蚴mMDH（线粒体苹果酸脱氢酶）基因的已知序列设计一对引物，采用RT—PCR技术扩增出细粒棘球蚴中国大陆侏mMDH基因。将PCR产物纯化后，亚克隆到pGEM—T载体并构建成基因工程菌株后进行序列测定和分析。结果 用RT—PCR成功扩增出细粒棘球蚴中囤大陆株mMDH基因，测序表明该基因开放阅读框为1017bp，与已发表基因核苷酸序列相比，同源性为99％，理论蛋白编码的氩基酸序列同源性为99％。结论 在国内首次获得细粒棘球蚴线粒体苹果酸脱氢酶（mMDH）基囚序列，为进一步构建重组表达基因工程菌株打下良好的基础。     

质量管理工作之体会

“质量是医院的生命”，这是有识之士的共识。新余市人民医院是一所地市级三级综合性医院，医院领导班子高度重视质量及质量管理，专门成立质控科，采取一系列政策和措施，旨在以质量为保证，以质量求发展并取得可喜成绩。现就近几年来质量管理初见成效谈谈个人体会。     

结核分枝杆菌CFP10诊断抗原基因的克隆及序列特性分析

目的扩增结核分枝杆菌培养滤液蛋白10基因（CFP10）,并将其克隆至质粒pGEMT中进行核苷酸序列特性分析,为研究结核病候选诊断抗原基因奠定基础。方法以结核菌标准菌株H37Rv为模板,通过PCR技术扩增出结核分枝杆菌CFP10抗原基因,将其重组到pGEM-T载体后进行酶切鉴定及序列测定和生物信息学分析。结果成功扩增出结核分枝杆菌CFP10抗原基因,测序表明该片段开放阅读框由303bp组成,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为100%,推导编码氨基酸序列同源性为100%。结论成功克隆CFP10基因,经DNA测序证实,该片段阅读框完整,为其原核表达及相关研究奠定了基础。     

胆总管T型管引流的临床护理

T型管引流是胆道外科的一项基本功。如何正确处理T管引流，在放射学和胆道镜广泛应用的今天，显的格外重要。[第一段]