细粒棘球蚴95抗原基因的克隆及原核表达质粒的构建

目的：克隆细粒棘球蚴95（Eg95)抗原基因，构建携带目的基因的原核表达载体，为细粒棘球蚴抗原的免疫保护机制研究提供材料。方法：应用PCR方法从细粒棘球蚴cDNA文库中克隆获得Eg95抗原基因，将其克隆至pUCm-T载体，测序确定其正确性。利用定向克隆技术将Eg95抗原基因片段克隆至原核表达质粒pET28上，根据选择标记的卡那霉素抗性基因筛选到阳性克隆，通过酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆，测序确定序列。结果：测序表明所有pET28-Eg95阳性克隆均为正确连接95抗原基因的重组质粒。结论：pET28-Eg95可以进一步用于重组蛋白的表达及抗细粒棘球蚴感染的实验研究。     

细粒棘球蚴重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2诱导表达条件探索

目的 探索细粒棘球蚴重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2的最佳诱导表达条件,并对其蛋白结构进行预测。方法 构建p ET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2重组质粒,将其转化至Ecoli.BL21(DE3)细菌中,选择不同的时间段和温度,用不同浓度的IPTG进行诱导蛋白表达。将得到的菌液通过超声破碎,经离心后用SDS-PAGE分别分析上清和沉淀中重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2的表达情况。Western Blot鉴定重组蛋白表达。鉴定成功后进行大量诱导表达。采用生物信息学的方法,使用在线软件SWISS MODEL对HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白三维结构进行预测。结果 HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2重组蛋白在28℃条件下,诱导4 h,IPTG的浓度为0.2 mmol/L时可溶性蛋白表达量达到最大。蛋白的相对分子量约为29 kD,结果与预期相符。其蛋白三维结构的预测与2×44.1.A结构的相似程度为78.13%。结论 探索出HIS-4IgV-EgG1Y162-2重组蛋白最佳诱导表达条件,并成功预测...     

棘球蚴TGF-β/Smad和MAPK信号通路的研究进展

由于棘球蚴和宿主的密切接触,在棘球蚴感染过程中,棘球蚴及宿主细胞都可能分泌多种细胞因子,使刺激信号通过细胞表面的受体传递到细胞内,干预宿主的免疫系统,产生免疫耐受从而使棘球蚴能够在宿主体内长期共存。本文就近年来棘球蚴感染过程中转化生长因子-β(TGF-β)/Smad和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路所起的免疫调节作用作一综述。     

结合临床实际的临床微生物学检验教学改革探讨

我国检验医学教育迅猛发展,检验医学正从医学舞台的边缘走向中央,临床微生物检验科室是与临床各科室联系最密切的科室之一,"精准医疗"的新领域促使临床微生物检验的教学要与临床实际密切结合。通过建立病例资源库,在教学中引入患者真实病例,并采用了案例教学法,培养学生临床思维能力,为将来更好地适应社会对新型人才的要求以及为将来全面实现临床微生物检验报告向诊断报告发展奠定一定的基础。     

抗原优势表位的筛选方法

疫苗的出现有效降低了人类感染性疾病的发病率和死亡率。随着科学的进步和发展,发现原始的疫苗已经不能满足当今社会的需要。现代保护性免疫理论认为,有效的保护性免疫来源于一组表位的合理组合与搭配。近年来兴起的表位研制技术,是用抗原表位制备疫苗,它在感染性疾病和恶性肿瘤中有着自身独特的优势。因此如何在众多的表位中确定优势表位,已经成为研究的新方向。本文详细阐述了优势表位的筛选办法,对其最新的研究进展进行了综述。     

泡球蚴感染BALB/c小鼠肝脏中ICOS表达的动态变化

目的观察泡球蚴感染BALB/c小鼠肝脏中诱导性协同刺激分子(ICOS)的动态变化。方法将60只BALB/c小鼠随机分成实验组和对照组,实验组经腹腔注射感染泡球蚴,对照组以相同的方法注射生理盐水。分别于感染后2、8、30、90、180和300d各处死5只小鼠,取肝脏组织,通过HE染色观察病理变化,通过免疫组化观察泡球蚴感染后ICOS的动态改变。结果与对照组比较,泡球蚴感染小鼠肝脏ICOS表达升高,表达部位主要在肝细胞浆和肝细胞膜。结论泡球蚴感染鼠肝组织ICOS表达增高。ICOS可能参与泡球蚴感染致肝纤维化及肝损伤过程。     

小鼠感染泡球蚴后细胞因子水平的变化

目的　观察人工接种泡球蚴(EM)昆明小鼠体内6种细胞因子水平的动态变化,研究泡球蚴病的免疫学机制。　方法　实验组和对照组小鼠分别腹腔接种泡球蚴及生理盐水,持续观察260d,收集各组血清用ELISA法检测血清中白细胞介素2(IL2)、γ干扰素 (IFNγ)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、IL4、IL5、IL10水平。　结果　实验组6种细胞因子水平始终高于正常对照组,其中辅助性T细胞1(Th1)类细胞因子IL2水平在感染后 80d达到峰值,感染140d后迅速降低;TNFα水平在感染后40d较对照组明显上升,感染100d左右达到峰值,140d后迅速下降;IFNγ在感染80d后达到峰值,140d后缓慢下降;而在80d以前,辅助性T细胞2(Th2)类细胞因子IL4、IL5、IL10维持在较低水平;100d后,这3类细胞因子明显上升,其中IL4、IL10水平在100d达到峰值,IL5水平在140d达到峰值,以后维持在较高水平。　结论　Th2细胞介导的体液免疫与Th1细胞介导的细胞免疫共同参与了宿主抗棘球蚴免疫。感染早期以Th1细胞介导的细胞免疫应答为主,感染中晚期转化为以Th2细胞介导的体液免疫为主。     

包虫病基因重组疫苗的研究

分子生物学技术的快速发展,使基因工程疫苗的研究更加深入。与此种新型疫苗相比传统疫苗已体现出预防效果不够理想,不容易保存,技术难度大,成本高等诸多缺陷。因此,对基因工程疫苗的开拓研究已成为当前疫苗领域的一个热点。本文简要概述了近年来包虫病基因工程疫苗研究现状及其发展前景。     

Th17细胞与Smads蛋白家族间的相互作用研究进展

Th17细胞作为一种新发现的Th细胞亚型主要分泌IL-17、IL-17F和IL-21,被认为在清除特定的病原体和诱导自身免疫组织炎症反应中发挥重要作用。Smads蛋白是重要的TGF-β受体胞内激酶的底物,磷酸化后可穿越胞膜,因此既是胞内信号分子,又起到转录子的作用。本文对当前国内外有关Th17细胞分化及功能的研究进展以及Th17细胞与Smad蛋白之间的相互作用做简要综述。