高体积分数氧致A549细胞肺表面活性物质蛋白-A表达的变化

目的探索高体积分数氧(高氧)致A549细胞肺表面活性物质蛋白(SP)-A表达的变化规律。方法将A549细胞分为高氧组和常氧组。高氧组细胞置于含950 mL·L-1氧气和50 mL·L-1二氧化碳的条件下培养,常氧组以空气替代氧气,于0 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h在倒置相差显微镜下观察细胞生长状况,提取细胞内总蛋白,采用硫代巴比妥酸比色法检测其丙二醛(MDA)水平,Western blot检测其SP-A表达水平。结果高氧48 h可导致A549细胞生长明显减慢,72 h后细胞生长停滞,可见较多漂浮死亡细胞,96 h后漂浮死亡细胞明显增多。高氧组各时间点A549细胞SP-A表达水平均高于常氧组,高氧24 h SP-A表达增多最显著,此后增多的幅度逐渐减小,高氧48 h后细胞内MDA水平显著高于常氧组,随时间延长,MDA水平进一步升高。结论高氧可导致A549细胞损伤,SP-A表达在细胞高氧损伤早期代偿性增加,晚期降低,推测SP-A表达降低可能与细胞损伤加重有关,增加SP-A的表达可能有助于减轻高氧引起的细胞损伤。     

大剂量细胞色素C在抢救儿童急性磷化氢中毒的临床作用

目的 探讨儿童急性磷化氢中毒的临床特点,及大剂量细胞色素C的临床作用。方法 收集2013年11月—2018年6月本中心救治的急性磷化氢中毒儿童22例临床资料,并回顾性分析。结果 男13例,女9例;年龄29 d~13岁;轻中度磷化氢中毒10例,重度磷化氢中毒12例;轻中度中毒患儿出现症状至就诊时间明显短于重度中毒患儿(P=0.029)。轻中度磷化氢中毒主要表现为头晕、恶心、呕吐、腹痛;重度中毒主要表现为昏迷、口唇紫绀、低血压,甚至心源性休克。实验室检查:脑钠肽异常升高12例;心肌酶异常12例;血乳酸升高10例;心电图异常16例,均表现为快速心律失常,其中1例为尖端扭转型心律失常。除常规治疗外,均给予大剂量细胞色素C治疗,轻中度中毒患儿均治愈,重度中毒患儿治愈6例,死亡6例,22例儿童磷化氢中毒总死亡率为27.3%,重度磷化氢中毒死亡率50%。结论 儿童急性磷化氢中毒死亡率高,在常规治疗的基础上,给予静脉应用大剂量细胞色素C可明显降低儿童急性磷化氢中毒的死亡率。     

n-3多不饱和脂肪酸的肿瘤治疗作用及其机制

0引言 n-3(ω-3)脂肪酸是一类第一个不饱和键出现在碳链甲基端第三位的多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA),它具有多种生物学功能,近年来其在肿瘤治疗中的作用尤其受到关注[1],它可能通过几种途径起作用,但确切机制尚不明确.其中核转录因子-кappaB(nuclear factor-кB,NF-кB)是它的靶因子之一,研究表明n-3 PUFA可通过抑制NF-кB活性起到抗肿瘤的作用.     

hGfap基因启动子介导的Cre重组酶在小鼠小脑中表达模式的研究

目的:探讨以人胶质纤维酸性蛋白(hGfap)基因启动子介导的Cre重组酶在小鼠小脑中的表达。方法:将hGfapcre转基因小鼠与Rosa26R转基因鼠杂交得到hGfapcre/Rosa26R基因型小鼠,分别在胚胎12.5、13.5、14.5、16.5 d和出生后3周,取小脑组织切片行X-gal染色观察Cre重组酶分布;另外,出生后3周的小脑组织切片同时使用细胞种类特异性抗体Blbp(星形胶质细胞标记物)、NeuN(颗粒细胞标记物)、Calbindin(浦肯野细胞标记物)进行免疫组织化学染色鉴定X-gal染色阳性细胞类型。结果:胚胎13.5 d,小脑菱唇开始出现X-gal染色阳性细胞;此后Cre重组酶表达范围进一步扩大,至胚胎16.5 d,X-gal染色阳性细胞可覆盖整个小脑;在出生后3周,X-gal染色阳性细胞可以和Blbp及NeuN共标记,和Cal-bindin不能共标记。结论:以hGfap基因启动子介导的Cre重组酶最早在胚胎13.5 d的菱唇开始表达,并且Cre重组酶主要表达于星形胶质细胞(包括Bergmann胶质细胞)和颗粒细胞,不表达于浦肯野细胞,表明在小脑发育过程中以GFAP为标记物的胶质细胞主要向星形胶质细胞(包括Bergmann胶质细胞)和颗粒细胞分化,不向浦肯野细胞分化。     

Lipofectamine 2000和jetPRIME~（TM）对A549细胞转染效率及毒性的比较研究

目的评价及比较两种转染试剂Lipofectamine 2000和jetPRIMETM对A549细胞的转染效率及毒性。方法分别利用Lipofectamine 2000和jetPRIMETM将pEGFP-N1质粒转染A549细胞,转染24h后荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）的表达,计算转染效率,四甲基偶氮唑盐比色法[3-（4.5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]检测两种转染试剂对A549细胞的毒性。结果质粒与Lipofectamine 2000比例（μg/μl）在1∶2至1∶3.5之间变化时,Lipofectamine 2000转染效率变化不明显,细胞毒性随着Li-pofectamine 2000用量增多而增大,质粒与Lipofectamine 2000比例（μg/μl）为1∶2.5时转染率最高,达（50.6±4.9）%,细胞存活率为（89.2±9.1）%;质粒与jetPRIMETM比例（μg/μl）在1∶1至1∶4之间变化时,jetPRIMETM转染效率变化明显,而细胞毒性变化不明显,质粒与jetPRIMETM比例（μg/μl）为1∶2时转染率最高,为（30.6±2.8）%,细胞存活率为（100.6±4.8）%;两者最大转染率及相应的细胞存活率均有统计学差异（P〈0.01,P〈0.05）。结论 Lipofectamine 2000转染A549细胞的效率高于jetPRIMETM,细胞毒性亦强于jetPRIMETM。     

支气管肺发育不良患儿肺表面活性蛋白-B基因9306(A/G)多态性

目的 了解支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)患儿肺表面活性蛋白-B(surfactant protein-B,SP-B)基因9306 (A/G)位点多态性的分布情况. 方法 研究对象为2008年1月1日至2012年6月30日华中科技大学同济医学院附属同济医院新生儿重症监护病房收治的86例BPD患儿与156例无相关疾病的患儿(对照组),采用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应技术检测SP-B基因9306 (A/G)位点基因型,样本的群体代表性进行Hardy-Weinberg平衡检验;2组病例基因型频率比较采用Armitage's趋势检验. 结果 BPD组AA基因型频率为67.4％(58/86),AG基因型频率为23.3％(20/86),GG基因型频率为9.3％(8/86),对照组各基因型频率分别为63.5％(99/156)、30.8％(48/156)和5.8％(9/156),2组差异没有统计学意义(x2=0.003,p=0.957).BPD组A等位基因频率为79.1％(136/172),G等位基因频率为20.9％(36/172),对照组A、G等位基因频率分别为78.8％(246/312)和21.2％(66/312),2组差异没有统计学意义(x2=0.003,P=0.954). 结论 汉族婴儿SP-B基因9306 (A/G)位点的基因多态性与BPD发病无直接相关性.     

腺苷受体及其介导的cAMP/PKA/CREB信号通路在高氧致早产大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤中的作用

目的 探讨高氧对早产大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells, AECⅡ)腺苷受体及其介导的环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)/蛋白激酶A(protein kinase A, PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein, CREB)信号通路的影响。方法 取早产SD大鼠肺组织分离培养原代AECⅡ,分为常氧组和高氧组,分别在氧气浓度21%和95%条件下培养。采用CCK-8法检测细胞培养6、12、24、48、72 h时AECⅡ增殖的光密度值。分别取培养12、24、48 h时2组原代AECⅡ,采用实时荧光定量PCR法检测细胞腺苷受体A1、A2A、A2B、A3 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞腺苷受体A1、A2A、A2B、A3蛋白及p-PKA、p-CREB蛋白相对表达量,采用ELISA法检测细胞cAMP水平。结果 培养6 h时,高氧组原代AECⅡ细胞增殖的光密度值(0.69±0.01)与常氧组(0.68±0...     

影响早产儿 NEC 生存结局围生期高危因素分析

〔摘 要〕 目的：探讨影响极低出生体质量（VLBW）早产儿坏死性小肠结肠炎（NEC）生存结局的围生期相关高 危因素。方法：回顾性分析 2017 年 1 月至 2021 年 9 月河南省人民医院收治的确诊 NEC（Bell Ⅱ 期以上）VLBW 早 产儿 58 例的临床资料，按照患儿结局分为死亡组和存活组。对两组患儿临床一般资料、围生期因素各项指标进行单 因素分析与多因素 logistic 回归分析，筛选影响 VLBW 早产儿 NEC 存活的围生期高危因素。结果：58 例 NEC VLBW 早产儿中存活 37 例（63.8 %），死亡 21 例（36.2 %）；死亡组 VLBW 早产儿的胎龄小于存活组，出生体质量低于 存活组，阴道分娩占比高于存活组，Apgar 评分（1 min）＜ 7 分占比高于存活组，差异均具有统计学意义（P ＜ 0.05）； 多因素 logistic 回归分析结果显示，出生体质量大（OR = 0.996，P = 0.000）是影响 VLBW 早产儿 NEC 存活率的保护 因素，阴道分娩（OR = 12.435，P = 0.031）是其危险因素。结论：VLBW 早产儿 NEC 生存结局与围生期多种因素相关， 小胎龄、低出生体质量、出生时窒息及母亲阴道分娩可能影响其存活，阴道分娩是影响 VLBW 早产儿 NEC 存活的高 危因素，关注孕产妇围生期健康，降低早产风险，减少新生儿出生时窒息，选择合适的分娩方式有助于提高 NEC 早 产儿生存率。     

SP-B中间产物特异性抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定表面活性物质蛋白B(surfactant protein B,SP-B)加工处理过程中部分中间产物的特异性抗体。方法利用Lasergene 7.0和Macvector 11.0.4软件进行抗原表位分析,确定作为抗原的3条多肽序列,将人工合成的多肽与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,免疫兔制备抗血清,间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫前血清背景和免疫后血清效价,抗原亲和纯化抗血清,超滤浓缩抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测抗体纯度,间接ELISA法检测抗体效价,蛋白质印迹(Western blot)鉴定抗体特异性。结果免疫前兔血清背景均低,免疫后抗血清效价均达到要求,抗原亲和纯化后所得抗体纯度及效价高,特异性好。结论成功制备了3种SP-B中间产物特异性多克隆抗体,为深入研究SP-B的加工处理奠定了基础。