肝细胞癌中EGFR-P38 MAPK途径通过miR-675-5p上调PD-L1并通过己糖激酶2下调HL A-ABC

背景 与目的免疫治疗已成为极具前景的癌症治疗策略.全面了解肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)免疫调控将有助于HCC免疫治疗的发展.表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号在HCC中常被激活,并在肿瘤发生中发挥重要作用.然而,EG...     

肝豆状核变性患儿316例临床表型和ATP7B基因变异特征

目的:总结儿童肝豆状核变性（WD）的临床表型及ATP7B基因变异类型特征,探讨其对WD早期诊断的临床意义。方法:回顾性分析2010年1月至2021年6月就诊于广州市妇女儿童医疗中心的316例WD患儿的临床资料。收集患儿一般情况、临床表现、实验室检查、影像学检查、ATP7B基因变异特征等资料。根据诊断时有无临床症状分为无...     

胰岛素受体底物1基因沉默对3T3-L1细胞CCAAT增强子结合蛋白α、过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响

目的研究胰岛素受体底物1(IRS-1)沉默对3T3-L1前脂肪细胞分化关键分子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA及蛋白表达的影响,并观察IRS-1沉默后前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞能力的改变,探讨胰岛素受体底物(IRSs)是否作为C/EBPα、PPARγ的上游调节信号在前脂肪细胞分化中起到重要的调节作用。方法合成4条IRS-1 shRNA,Western blotting筛选出沉默效率最高的1条。3T3-L1前脂肪细胞分为IRS-1沉默组和对照组。IRS-1沉默组细胞用沉默效率最高的IRS-1 shRNA质粒转染3T3-L1前脂肪细胞,沉默细胞中的IRS-1分子;对照组采用无意义IRS-1 shRNA质粒转染3T3-L1前脂肪细胞。转染24 h后诱导其分化成熟,分化72 h后检测促进前脂肪细胞分化的关键分子C/EBPα、PPARγ的表达。继续诱导分化至第7天,油红O染色观察IRS-1沉默后前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞的比例,检测其分化能力的改变。结果与对照组相比,IRS-1沉默组在诱导分化72 h后,Real-time PCR结果显示3T3-L1前脂肪细胞中C/EBPαmRNA、PPARγmRNA表达明显下降(Pa<0.05),Western blotting结果显示C/EBPα、PPARγ蛋白水平也同样显著下降(Pa<0.05);细胞继续分化至第7天,油红O染色显示,IRS-1沉默组前脂肪细胞分化成熟的比例与对照组比较显著降低。结论胰岛素可能通过IRS-1刺激C/EBPα、PPARγ的表达促进前脂肪组织的分化。     

胰岛素受体底物在生长追赶宫内发育迟缓新生大鼠脂肪细胞中的表达

目的研究胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2在生长追赶宫内发育迟缓新生大鼠脂肪细胞中的时序性表达及其与胰岛素抵抗的关联。方法通过母鼠孕期全程饲料限制建立宫内发育迟缓模型,相对增加哺乳期子鼠营养摄入实现生长追赶。于4周龄时心脏采血测定空腹血糖、胰岛素和三酰甘油,计算胰岛素抵抗指数。测定1、3、5、7周龄SD大鼠的成熟脂肪细胞及前脂肪细胞分化的成熟脂肪细胞的IRS-1和IRS-2 m RNA以及蛋白水平的变化。结果生长追赶的宫内发育迟缓新生大鼠原代培养的成熟脂肪细胞IRS-1和IRS-2 m RNA表达分别于生后第5周和第7周显著下调,差异有统计学意义(P0.05);前脂肪细胞分化的成熟脂肪细胞IRS-1和IRS-2 m RNA表达均于生后第5周显著下调,差异有统计学意义(P0.05);两种成熟脂肪细胞IRS-1和IRS-2蛋白水平均于生后第1周开始显著下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论生长追赶的宫内发育迟缓新生大鼠脂肪细胞IRS-1和IRS-2的基因表达发生相对下调,可能与其生后远期的胰岛素抵抗密切相关。     

儿童 Gitelman 综合征 3 例临床特点及基因分析

目的探讨儿童Gitelman综合征的临床及基因突变特点。方法回顾分析3例Gitelman综合征患儿的临床资料。结果 3例患儿均为男性,年龄分别为3、8、10岁。临床表现为低钾血症、低镁血症、碱中毒、高肾素血症、高醛固酮血症。基因检测显示存在SLC12A3基因的复合杂合突变,共发现SLC12A3基因的5个突变位点:c.179CT(Thr60Met)、c.248 GA(Arg 83 Gln)、c.2129 CA(Ser 710 X)、c.2660+1 GA、c.1456 GA(Asp 486 Asn)。患儿确诊后,经补钾、补镁、螺内酯治疗后病情好转。结论儿童出现低钾血症需注意Gitelman综合征,基因检测有助于明确诊断。     

血清生长激素和胰岛素样生长因子-Ⅰ在危重症中的变化及临床意义

目的 探讨血清生长激素（growth hormone,GH）和胰岛素样生长因子-Ⅰ （insulin like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ）在危重症患儿中的变化及其临床意义.方法 选择2009年1月至2012年1月同期入住PICU的脓毒症患儿42例为脓毒症组,先天性心脏病择期在体外循环下行开胸手术治疗后的患儿20例为术后组,检测入院次日及手术后次日晨血清GH和IGF-Ⅰ水平,选择健康体检儿童60例为对照组,比较组间GH、IGF-Ⅰ水平的变化.结果 脓毒症组GH水平为（6.71±6.62） ng/ml,术后组GH水平为（8.86±8.06） ng/ml,,两者均显著高于对照组（3.87±3.31） ng/ml,差异有统计学意义（P＜0.05）,而脓毒症组与术后组之间差异无统计学意义;脓毒症组IGF-Ⅰ水平为（63.72±54.17） ng/ml,与术后组（119.06±102.12） ng/ml和健康对照组（154.22±107.10） ng/ml比较,显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,术后组与对照组比较差异无统计学意义;脓毒症组内存活者与死亡者比较GH无统计学意义差异,IGF-Ⅰ水平显著降低（P＜0.05）.结论 危重症时GH水平升高对机体应激具有积极作用;脓毒症时IGF-Ⅰ水平显著降低,可作为反映重症感染存在的较灵敏指标,并有助于判断预后.     

原代大鼠肝细胞分离及培养鉴定

目的探讨原代大鼠肝细胞分离及培养的简易方法,并对其纯度及生物活性进行鉴定。方法采用改良原位两步非循环灌流法及多次过滤低速离心法分离原代大鼠肝细胞,常规DMEM高糖培养基培养原代大鼠肝细胞,锥虫蓝拒染法检测接种时肝细胞的存活率,倒置显微镜动态观察肝细胞形态变化。过碘酸-Schiff反应检测肝细胞糖原合成能力,并利用免疫细胞化学方法检测肝细胞角蛋白18(CK-18)的表达联合判断肝细胞纯度。结果每只大鼠可获取(1.38～1.74)×108个肝细胞,接种瞬时肝细胞活性>90%。倒置显微镜下观察肝细胞在接种后4 h基本完成贴壁,贴壁的细胞胞体变大变平,随后细胞相互靠拢呈岛状或条索状连接。糖原染色发现肝细胞内糖原被染成红色颗粒或片状。抗CK-18免疫细胞化学染色发现CK-18在肝细胞内均匀分布,被染成棕黄色。糖原染色及细胞CK-18联合鉴定肝细胞纯度达95%以上。结论用改良原位两步非循环灌注法及多次过滤低速离心法成功分离并培养原代大鼠肝细胞,可操作性强,所培养肝细胞数量、活力和纯度高,可在具备基本细胞培养条件的实验室推广。     

自回归求和移动平均模型在广州市新生儿先天性甲状腺功能减低症发病率趋势预测的应用

目的 分析构建并应用自回归移动平均模型(ARIMA)对广州地区先天性甲状腺功能减低症(CH)发病率进行预测的可行性,为合理制定CH的防治、保健的策略及措施提供科学依据.方法 汇总广州市1991-2018新生儿CH筛查发病率数据,基于1991-2016年CH发病率数据建立最优ARIMA模型,通过比较2017-2018年预...     

标准化病人结合形成性评价教学法在儿科教学中的应用

儿科由于患者群体的特殊性,教学中存在病例获取难度大、医患矛盾多等问题。形成性评价是以反馈为核心内容,以学生学习为中心的教学模式,近年来应用于医学生人才培养和住院医师规范化培训。标准化病人作为模拟教学工具,与形成性评价相结合,应用于病史采集、人文沟通等环节的教学中,既能解决病例稀缺问题,避免医患矛盾,同时为形成性评价也提供了更广阔的应用背景,为儿科教学提供了新的思路。     

细胞信号转导抑制因子3特异性shRNA的构建及鉴定

目的构建针对大鼠细胞信号转导抑制因子3(SOCS-3)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,选取最有效shRNA模板序列。方法设计并合成编码的shRNA的2条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆至pGPU6/GFP/Neo中构建重组表达载体,转化DH5α菌株,进行序列测定;转染至骨骼肌细胞中。Real-time PCR和Western blot检测各组SOCS-3的表达情况。结果测序证实重组质粒构建成功。4对shRNA模板序列对SOCS-3的表达抑制与空白及阴性对照相比差异均有统计学意义(均P<0.05),且以SOCS-3-shRNA a干预效果较好。结论 SOCS-3特异性shRNA重组表达载体构建成功,能有效抑制大鼠骨骼肌细胞SOCS-3的表达,为后续研究及代谢综合征的基因治疗奠定了基础。