转TNF—a基因肿瘤浸润淋巴细胞的构建及其生物学特性的研究

目的用肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因转染人肝癌肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor infiltrating lymphocyte,TIL),构建转基因TIL,对其生物学特性进行研究,为肝癌基因治疗奠定基础.方法用逆转录病毒载体将TNF-α基因导入人肝癌肿瘤浸润淋巴细胞,构建一种新型的抗肿瘤效应细胞-转基因TIL.对转基因TIL的增殖能力和细胞表型进行检测,用RT-PCR检测目的基因的表达,TNF-α试剂盒检测TNF-α分泌量,用MTT法检测转基因TIL体外抗肿瘤活性.结果转基因TIL的增殖活性及细胞表型与IL-2活化的TIL相似,转基因TIL 可持续表达TNF-α,其分泌量每24 h达370 pg/5×105 cells.转基因TIL对肝癌细胞株BEL7404 具有较高的杀伤活性.结论转基因TIL维持较高的稳定性,可持续表达TNF-α,具有良好的体外抗肿瘤作用,对肝癌治疗具有良好的应用前景.     

改良Rehbein手术治疗先天性巨结肠症66例

改良Ｒｅｈｂｅｉｎ手术治疗先天性巨结肠症６６例罗意革（广西医科大学第一附属医院小儿外科南宁５３００２１）治疗先天性巨结肠术式主要有四类：Ｓｗｅｎｓｏｎ，Ｄｕｈａｍｅｌ，Ｓｏａｖｅ及Ｒｅｈｂｅｉｎ。目前文献普遍认为其效果相近，治愈率约为８０％，因术式特...     

新生儿先天性肠闭锁41例诊治分析

先天性肠闭锁是新生儿外科比较常见的消化道畸形.由于病理类型复杂、手术难度大、麻醉风险高、术后护理困难,因此如何提高该病的治愈率一直是小儿外科具有挑战性的问题.近年来随着对该病诊治的研究进展该病的治愈率已有显著提高.本文对我院1970～2004年收治的41例先天性肠闭锁做回顾性分析,同时结合文献报道,以阐明近年来该病诊断、治疗的进展特点.     

转基因细胞毒性T淋巴细胞的生物学特性及其对荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用

背景肿瘤患者体内的抗肿瘤免疫受到抑制.增强细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)的活性是提高过继免疫治疗效果,促进肿瘤康复的有效途径之一.目的对转导肿瘤坏死因子(TNF-α)基因的CTL的生物学特性及抗肿瘤活性进行研究,探讨细胞因子基因疗法和过继免疫治疗肿瘤的新途径.设计随机区组实验研究.地点和对象实验在广西医科大学医学实验中心完成.从人肝细胞癌组织中分离淋巴细胞,用BEL7407和IFN-r诱导得到CTL.BALB/c裸小鼠28只,雄性,4～6周龄,体质量18～20 g,购自北京医科大学实验动物科学部(SPF级,合格证书医动字第01-3048号)干预用重组反转录病毒载体介导对CTL进行TNF-α基因转导.于每只裸鼠右前肢腋窝皮下注射注射BEL7404,建立荷瘤裸鼠模型,28只裸鼠按体质量分为4组,每组7只.观察转基因CTL对肿瘤原位(右前肢腋窝)及异位(左前肢腋窝皮下)注射治疗效果,分别用生理盐水注射治疗作对照. 主要观察指标①检测TNF-α基因转导前后CTL的生长形态,增殖能力,TNF-α分泌量、细胞表型.②体外不同作用时间和效靶比浓度对BEL7404的杀伤效应.③各实验组的肿瘤生成时间,生长速度及肿瘤生成率.结果转基因CTL的生长形态、增殖活性及细胞表型与CTL相似,但具有持续、高效表达TNF-α的能力,72 h表达量达410 ng/L.转基因CTL对BEL7404具有较高的体外杀伤作用,其杀伤活性与作用时间及效靶细胞比正向相关.当效靶比达201时,杀伤活性接近100%.效靶比浓度为51和201时转基因CTL的杀伤活性高于CIL(q=7.965 8,4.189 7,P＜0.05).转基因CTL对荷瘤裸鼠肿瘤生长部位进行过继免疫后,移植瘤的生成延迟、生长减慢,成瘤率降低,与异位注射及生理盐水对照组相比差异有显著意义(P＜0.05).结论转基因CTL可持续表达的TNF-α,具有良好的抗肿瘤活性.转基因CTL构建为肿瘤过继免疫治疗提供新型的效应细胞,对防治肿瘤转移和复发,促进肿瘤康复具有积极的意义.     

小儿颈部淋巴管瘤治疗28年回顾

目的探讨小儿颈部淋巴管瘤的治疗方法。方法对我院1974年至2002年收治的颈部淋巴管瘤198例进行回顾性分析,所有病例均采用手术切除,其中129例基本将瘤体完整切除;69例有明确瘤体组织残留,其中11例术后60Co放疗,另58例术后经引流口用平阳霉素溶液灌注治疗。结果并发症发生率为10.6%,死亡率2.0%。随访113例,痊愈106例(93.8%),复发7例(6.2%)。手术加术后平阳霉素灌注的方法疗效好,该组复发率为4.9%,远期效果与完全切除组相近,并发症为3.4%,低于后者的13%(P<0.05)。结论淋巴管瘤的治疗采用手术切除为主的综合治疗,对术中有瘤体残留的病例,推荐术后使用平阳霉素灌注治疗。     

全结肠无神经节细胞症6例

目的 探讨全结肠无神经节细胞症（TCA）的临床表现、特殊检查和治疗。方法 回顾性分析TCA6例患儿的临床特征、手术方式及预后情况。6例均为男童，日龄4～5d，均表现为生后未排胎粪，进行性腹胀、呕吐。均采取手术治疗。结果 4例存活，随访2个月～5年，患儿恢复良好。放弃治疗及术后因并发症死亡各1例。结论 TCA起病较典型先天型巨结肠（HD）早，结合钡灌肠及术中冰冻活检为早期确诊方法。分期手术是TCA的合理方式，在小肠造口期间和根治手术后必须有长期科学而精细的治疗和护理，才能提高患儿生存率。     

儿童肝细胞肝癌与肝母细胞瘤的临床特点及预后

目的比较小儿肝细胞肝癌（HPC）与肝母细胞瘤（HB）临床特点,分析二者预后差异,以提高临床认识。方法对1985～2006年收治小儿HPC15例和HB23例,从发病年龄、甲胎蛋白（AFP）阳性率、乙肝病毒感染率、肝硬化发生率、手术完整切除率、1年累积生存率等进行比较。结果HB平均发病年龄、乙肝病毒感染率、肝硬化发生率低于肝细胞肝癌,1年累积生存率高于HPC,P=0,0.0005,0.0003,0.037,有统计学差异。二组AFP阳性率、手术完整切除率比较差异无统计学意义P=0.6645,1.0。结论HPC小儿多数有乙肝病毒感染和肝硬化背景,预后较差,应加强围生期乙肝病毒病毒阻断,减少肿瘤发病率,同时加强综合治疗,努力提高术后生存率。HB预后相对较好,应努力提高肿瘤完整切除率,规范术后化疗,提高肿瘤治愈率。     

转基因细胞毒性T淋巴细胞的生物学特性及其对荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用

背景：肿瘤患者体内的抗肿瘤免疫受到抑制。增强细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphOCyte，CTL)的活性是提高过继免疫治疗效果，促进肿瘤康复的有效途径之一。目的：对转导肿瘤坏死因子(TNF-α)基因的CTL的生物学特性及抗肿瘤活性进行研究，探讨细胞因子基因疗法和过继免疫治疗肿瘤的新途径。设计：随机区组实验研究。地点和对象：实验在广西医科大学医学实验中心完成。从人肝细胞癌组织中分离淋巴细胞，用BEL7404和IFN-r诱导得到CTL。BALB／c裸小鼠28只。雄性，4∽6周龄，体质量18～20g，购自北京医科大学实验动物科学部(SPF级，合格证书：医动字第01-3048号) 干预：用重组反转录病毒载体介导对CTL进行TNF-a基因转导。于每只裸鼠右前肢腋窝皮下注射注射BEL7404建立荷瘤裸鼠模型，28只裸鼠按体质量分为4组，每组7只。观察转基因CTL对肿瘤原位(右前肢腋窝)及异位(左前肢腋窝皮下)注射治疗效果，分别用生理盐水注射治疗作对照。主要观察指标：①检测TNF-a基因转导前后CTL的生长形态，增殖能力。TNF-a分泌量、细胞表型。②体外不同作用时间和效靶比浓度对BEk7404的杀伤效应。③各实验组的肿瘤生成时间，生长速度及肿瘤生成率。结果：转基因CTL的生长形态、增殖活性及细胞表型与CTL相似，但具有持续、高效表达TNF-a的能力，72h表达量达410ng／L。转基因CTL对BEL7404具有较高的体外杀伤作用，其杀伤活性与作用时间及效靶细胞比正向相关。当效靶比达20：1时，杀伤活性接近100％。效靶比浓度为5：1和20：1时转基因CTL的杀伤活性高于CIL(q=7．9658，4．1897．P<0．05)。转基因CTL对荷瘤裸鼠肿瘤生长部位进行过继免疫后，移植瘤的生成延迟、生长减慢，成瘤率降低，与异位注射及生理盐水对照组相比差异有显著意义(P<0．05)。结论：转基因CTL可持续表达的TNF-a，具有良好的抗肿瘤活性。转基因CTL构建为肿瘤过继免疫治疗提供新型的效应细胞，对防治肿瘤转移和复发，促进肿瘤康复具有积极的意义。     

先天性巨结肠再手术60例临床分析

目的分析先天性巨结肠根治术后再次手术的原因、总结处理策略,以提高临床疗效。方法回顾性分析2005年1月至2015年12月先天性巨结肠根治术后因各种原因于广西医科大学第一附属医院小儿外科再次手术治疗的60例患儿临床资料,对其再手术原因进行分析、对手术方式及疗效进行总结。结果 60例患儿再次手术原因分别为:便秘复发28例(46.7%),吻合口漏20例(33.3%),粘连性肠梗阻7例(11.7%),其他原因5例。首次手术年龄1岁患儿与≥1岁患儿术后便秘复发发生率的差异无统计学意义(χ~2=2.188,P0.05),先天性巨结肠不同的首次根治手术方式间再次手术发生率差异无统计学意义(χ~2=4.390,P=0.222)。再次手术后死亡1例。48例获1~11年随访,其中44例排便功能良好,1~3次/d;4例大便次数多,5~11次/d,有少量肛周污粪。13例术后出现小肠结肠炎,经保守治疗后好转,无大便失禁患儿。结论术后便秘复发、吻合口漏是先天性巨结肠根治术后再次手术的主要原因,再次手术效果良好,Soave术式安全有效,为便秘复发后再次手术常用术式。患儿手术年龄与便秘复发无明显相关性,先天性巨结肠首次手术方式与是否需再次手术无明显相关性。     

转TNF-α基因肿瘤浸润淋巴细胞的构建及其生物学特性的研究

目的:用肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因转染人肝癌肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor infiltrating lymphocyte,TIL),构建转基因TIL,对其生物学特性进行研究,为肝癌基因治疗奠定基础.方法:用逆转录病毒载体将TNF-α基因导入人肝癌肿瘤浸润淋巴细胞,构建一种新型的抗肿瘤效应细胞-转基因TIL.对转基因TIL的增殖能力和细胞表型进行检测,用RT-PCR检测目的基因的表达,TNF-α试剂盒检测TNF-α分泌量,用MTT法检测转基因TIL体外抗肿瘤活性.结果:转基因TIL的增殖活性及细胞表型与IL-2活化的TIL相似,转基因TIL 可持续表达TNF-α,其分泌量每24 h达370 pg/5×105 cells.转基因TIL对肝癌细胞株BEL7404 具有较高的杀伤活性.结论:转基因TIL维持较高的稳定性,可持续表达TNF-α,具有良好的体外抗肿瘤作用,对肝癌治疗具有良好的应用前景.