凋亡相关蛋白在激素性幼兔股骨头缺血坏死动物模型中的表达及意义

目的 观察各凋亡相关蛋白在激素性幼兔股骨头缺血坏死动物模型股骨头组织中的表达情况,探讨该模型中调控凋亡的主要通路.方法 选用2月龄的新西兰大白兔,制作糖皮质激素性幼兔股骨头缺血坏死模型及对照组模型,根据是否发病将激素注射组分为未发病组和发病组.取股骨头软骨及软骨下骨组织用免疫组织化学法检测凋亡通路中凋亡相关蛋白天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-8、人结合凋亡蛋白酶活化因子-1(apaf-1)、钙蛋白酶-1(calpain-1)的表达情况.分别测定在单位视野中Caspase-3、Caspase-8、apaf-1、calpain-1的积分光密度(IOD)值.结果 1.Caspase-3的IOD值分别为发病组25 142.72 ±21 528.48,未发病组2 069.63±1 096.96,对照组301.80±99.66.Caspase-8的IOD值分别为发病组24 942.63±18 942.99,未发病组2016.31±1 518.70,对照组236.85±97.94.Apaf-1的IOD值分别为发病组8 514.23±6 384.20,未发病组1 118.49±1 360.59,对照组95.13±38.05.Calpain-1的IOD值分别为发病组9 636.71 ±9 123.81,未发病组1 881.10±3 277.86,对照组126.71±47.35.Caspase-3在发病组和未发病组、对照组间差异有统计学意义(H=11.470、23.996,p＜0.01);Caspase-8在发病组和对照组间差异有统计学意义(H=22.178,P＜0.01);apaf-1在发病组和对照组间差异有统计学意义(H=22.808,P＜0.01);calpain-1在发病组和对照组间差异有统计学意义(H=13.553,P ＜0.01).2.线性回归分析:Caspase-8能够显著的预测Caspase-3,且回归方程回归效应显著,回归方程能够解释40.3％的变异,而apaf-1和calpain-1对Caspase-3的回归效应不显著.结论 凋亡受体通路可能在股骨头缺血坏死的凋亡过程中发挥主要调控作用.     

Wnt/β-catenin信号通路在幼兔激素性股骨头缺血坏死模型中的表达及意义

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路与幼兔激素性股骨头缺血坏死的关系.方法 选用8周龄健康新西兰幼兔35只,体重在1.2～1.7 kg.按照随机数字表法将其分为激素注射组25只,对照组10只.前者臀肌注射糖皮质激素7.5 mg/kg,1周2次;后者注射等体积生理盐水,总共注射8周.分别于注射后4、8周时行双髋关节X线正位片、CT检查.注射8周后处死全部实验动物并立即取出双侧股骨头.根据X线正位片与CT检查结果判断发病与否,并将激素注射组分为发病组和未发病组.用RT-PCR方法检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)、脂联素(Adipoq)、β-链蛋白(β-catenin)、低密度脂蛋白相关蛋白5(LRP5)、骨形成蛋白-2(BMP-2) mRNA在各组股骨头中的表达情况,比较其在各组中的表达差异.结果 激素注射组动物存活22只,被认为发生股骨头坏死6只(发病组),未发病16只(未发病组),股骨头坏死发生率为27.3％ (6/22).RT-PCR示:β-catenin在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为0.22±0.01、0.35±0.09和1.07±0.41,发病组与未发病组、对照组比较,差异有统计学意义(t=4.94、10.60,P＜0.05);LRP5在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为0.22±0.05、0.35±0.12和1.12±0.36;发病组与另两组比较,差异均有统计学意义(t=4.39、9.93,P＜0.05);Adipoq在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为17.84±5.51、3.33±1.26和1.11±0.27,发病组与另两组比较,差异均有统计学意义(t=5.88、12.01,P＜0.05);Caspase-3在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为3.10±0.90、1.29±0.35和1.06±0.24,发病组与另两组比较,差异均有统计学意义(t=7.15、7.75,P＜0.05);BMP-2在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为0.08±0.05、0.31±0.21和1.12±0.32,发病组与另两组比较,差异均有统计学意义(t=2.93、8.08,P＜0.05).在对照组、未发病组及发病组中,β-catenin与LRP5的表达均呈正相关关系,Caspase-3与β-catenin呈负相关关系,Caspase-3与LRP5呈负相关关系,Adipoq与β-catenin呈负相关关系,Adipoq与LRP5呈负相关关系,BMP-2与β-catenin呈正相关关系,BMP-2与LRP5呈正相关关系.结论 糖皮质激素对Wnt/β-catenin信号通路的抑制可能促进股骨头骨和软骨细胞的凋亡以及脂肪细胞的形成,抑制其成骨能力.