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1.
2.
(His)6 -eIF3s4融合蛋白在人乳腺癌细胞Bcap37中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:构建真核细胞翻译起始因子3第4亚单位(eIF3s4)真核表达载体用于进一步功能研究。方法:设计引物,以K562细胞的总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增eIF3s4的全长编码区cDNA,克隆于pGEM-TEasy载体,经DNA测序并与GenBank数据库序列进行比对后,将该cDNA序列亚克隆于真核表达载体pcDNA4/HisMaxB载体,构建成(His)6-eIF3s4融合蛋白的表达载体,用LipofectamineTM2000瞬时转染人乳腺癌细胞株Bcap37,利用Westernblot方法检测(His)6-eIF3s4融合蛋白的表达。结果:DNA序列测定表明,利用RT-PCR方法克隆的eIF3s4全长编码区cDNA序列与GenBank数据库序列一致,Westernblot结果证实(His)6-eIF3s4融合蛋白在Bcap37细胞中获得预期表达。结论:成功地构建了eIF3s4的真核表达载体并在人乳腺癌细胞Bcap37中表达,为建立稳定的eIF3s4高表达细胞系,进而研究eIF3s4与肿瘤细胞多药耐药相关性打下了基础。 相似文献
3.
4.
人大肠癌中基质金属蛋白酶-7 mRNA的表达 总被引:11,自引:0,他引:11
目的:探讨基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase 7,MMP-7)与大肠癌浸润和转移的关系.方法:用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大肠癌和正常黏膜、炎性息肉、腺瘤及淋巴结中MMP-7 mRNA的表达.结果:97.4%(37/38)的大肠癌和1例肝转移中MMP-7 mRNA表达阳性,而相应正常黏膜几乎不表达;大肠癌中MMP-7 mRNA的表达水平随Dukes分期的进展而逐渐升高(P<0.01),A期(0.28±0.08),B期(0.54±0.17),C期(0.55±0.09),D期(0.73±0.06).5例腺瘤MMP-7均为阳性,但表达水平低于癌组织(P<0.01);3例炎性息肉均未见MMP-7表达.传统组织学检查有癌转移的13个淋巴结MMP-7表达均为阳性;组织学检查未见转移的12个淋巴结MMP-7表达6个阴性、6个阳性,再次行组织学检查于6个MMP-7阳性者中发现3个有微转移.结论:MMP-7的高表达可能在大肠癌的浸润和转移过程中具有重要作用;用RT-PCR方法检测淋巴结中MMP-7mRNA的表达是诊断大肠癌淋巴结微转移的敏感方法. 相似文献
5.
肝癌相关性甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测法 总被引:8,自引:2,他引:6
目的:进一步探讨血清肝癌相关性GPDA同工酶分离检测条件,提高其对原发性肝癌的诊断价值。方法:对分离血清肝癌相关性GPDA同工酶电泳体系的凝胶浓度及梯度、缓冲液的pH及离子强度、电泳的环境温度、标本 用量以及呈色条件等进行了逐项摸索,建立了稳定且分离效果好的GPDA同工酶检测方法。结果:采用三层阶段梯度聚丙烯酰胺凝胶体系将血清GPDA分为肝癌相关性的快带(GPDA-F)和相关性的慢带(GPDA-S),肝癌相关性GPDA的检出率明显提高。结论:肝癌相关性血清GPDA检测法稳定可靠、敏感,适合于临床推广应用。 相似文献
6.
目的:探讨老年冠心病患红细胞免疫功能与胰岛素抵抗(IR)之间的关系。方法:将老年冠心病人(59%)分为不稳定型心绞痛组(27例)和稳定型心绞痛组(22组),并与32例健康老人组对照。采用“郭峰改良法”及PEG双抗法分别检测各组的红细胞C3b受体花环(RBC-C3bRR),红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR)及空腹和餐后2h胰岛素(IS)。结果:老年冠心病组RBC-ICR,空腹及糖负荷后的IS均明显高于对照组,P<0.01,老年冠心病组RBC-C3bRR与对照组无显性差异。结论:RBC-ICR和IR参与老年冠心病的发病过程,并相互影响,加重血管内皮的损伤。 相似文献
7.
8.
目的 介绍后颅窝骨性扩大术治疗Chiari畸形合并脊髓空洞症。方法 该手术分为两种亚术式 ,一种是枕颈固定扩大术 :取自体髂骨 5cm× 10cm ,打磨成“凹”字形。上端为齐头端 ,固定在后颅窝减压窗缘。缺口端为下端 ,固定在枢椎棘突上 ,将扩大的硬脑 (脊 )膜修补筋膜片固定在植骨片内面 ,使筋膜片贴附在植骨片内面 ,形成帐篷状 ;另一种是单纯骨性扩大术 :取自体髂骨 6cm× 8cm的梯形骨片 ,并利用较厚的髂骨缘打磨成弧形。植骨片固定在后颅窝减压窗上 ,弧形端构成枕骨大孔后缘。将扩大的硬脑 (脊 )膜修补筋膜片也固定在植骨片内面 ,使筋膜片贴附在植骨片内面 ,也形成帐篷状。结果 本组病例随访 2~ 7年 ,术后症状体征缓解总有效率为91.6% ,肌力比以前提高 2~ 3级。结论 该术式比其他治疗Chiari畸形合并脊髓空洞症的术式 ,治疗效果显著 ,疗效切实可靠 相似文献
9.
目的:研究蛋白激酶C抑制剂十字饱碱(staurosporine,ST)逆转耐长春新碱KB细胞(简称KB/VCR)的机制。方法:用MTT法比较ST作用前后KB/VCR细胞耐药性的改变,用流式细胞术观察KB/VCR药物代谢的变化,用RTPCR法和免疫组织化学方法研究耐药膜糖蛋白(Pglycoprotein,Pgp)、耐药相关蛋白(multidrugresistanceassociatedprotein,MRP)和肺耐药蛋白(lungcancerresistancerelatedprotein,LRP)在细胞mRNA水平和蛋白水平上的表达。结果:1ng/mLST使KB/VCR细胞耐药性下降了158倍。亲本株KB/S细胞几乎不表达Pgp,而KB/VCR细胞却近100%强表达Pgp,P=0.004;ST使KB/VCR细胞的Pgp表达强度明显降低,但阳性率未见明显改变。MRP在两种细胞的基因转录水平和蛋白水平均呈现弱表达,ST也不影响其表达。1ng/mLST作用24h后,KB/S和KB/VCR细胞的LRP在mRNA水平及蛋白水平上表达指数均明显地高出用药前,P=0.006。结论:ST可通过降低Pgp表达强度和药物外排功能来逆转肿瘤细胞的多药抗药性,但这种作用可部分地被LRP蛋白表达增强所抵消。 相似文献
10.