神经干单细胞获得的一种方法

目的寻找一种有效获得神经干细胞单细胞的方法。方法运用胰蛋白酶，EDTA和不同浓度酵素对人胚神经干细胞球进行消化，免疫细胞化学染色鉴定及其分化。结果运用一定浓度的酵素可以获得大量成活的单个神经干细胞。而运用胰蛋白酶，EDTA消化后成活细胞少。结论运用一定浓度的diapase消化神经干细胞球是可获得大量成活的神经干细胞单个细胞的方法。     

新生大鼠海马的显微手术入路

目的研究最大程度暴露新生大鼠海马的手术入路。方法采用经颞外侧、大脑纵裂、小脑幕上缘大脑纵裂联合3种入路暴露新生大鼠海马。结果分析3种入路优缺点,经小脑幕上缘大脑纵裂联合入路的方法简便、容易掌握,且最大程度上暴露了海马的全部结构。结论新生大鼠海马最大程度显微暴露为神经干细胞研究提供必备平台。     

神经上皮肿瘤中脑肿瘤干细胞的分离培养和原发性多药耐药机制分析

目的 探讨ABC家族转运体耐药基因MDK1、MRP1和DNA修复酶耐药基因MGMT在脑肿瘤干细胞原发性多药耐药中的作用机制.方法 以CD133为脑肿瘤干细胞特异性标志物,利用免疫磁珠法分离30例人脑神经上皮肿瘤标本中的CD133+与CD133-细胞,并进行CD133+细胞的体外扩增培养,传代与鉴定.应用半定量RT-PCK法检测CD133+与CD133-细胞中耐药蛋白MDR1、MRP1、MGMT的活性表达情况.结果 免疫磁珠法能有效的分选出脑肿瘤干细胞,该类细胞具有异常的增殖能力.MDR1、MRP1与MGMT耐药基因在CD133+细胞中高度表达,并与肿瘤的病理级别正相关,其总体水平分别为CD133-细胞的16.1、19.6及34.0倍.并非所有的脑肿瘤干细胞均有耐药基因的表达,MDR1、MRP1与MGMT的总体阳性表达率分别为76.7%、86.7%t和73.3%.ABC家族转运体耐药基因和DNA修复酶耐药基因在CD133+细胞中的表达有明显的相关性.结论 神经上皮肿瘤中存在一定比例的CD133+脑肿瘤干细胞,免疫磁珠法能有效的分选出CD133+细胞.在异质性肿瘤中仅有小部分亚群细胞(CD133+脑肿瘤干细胞)具有原发耐药性.而ABC家族耐药蛋白和DNA修复酶在脑肿瘤干细胞中的共同过度表达是临床上脑肿瘤多药耐药的主要原因之一,脑肿瘤干细胞是神经上皮肿瘤原发性化疗耐药的根源和关键性治疗标靶.     

神经干细胞移植促进脑出血大鼠神经功能恢复的实验研究

目的探讨脑内定向移植神经干细胞(NSCs)治疗脑出血的可行性和机制。方法采用在成年大鼠中立体定向纹状体内注入新鲜自体血液制作实验性脑出血模型,术后1d采用立体定向将在体外扩增、纯化并经BrdU标记的神经干细胞移植入脑出血部位,通过神经功能缺损评分来观察移植后大鼠神经行为学改善情况,并通过双标GFAP、NeuN、BrdU免疫组化来检测移植入脑的NSCs。结果移植的NSCs迁移至血肿周围区,并分化为神经元(≈10%BrdU阳性细胞)和星形胶质细胞(≈75%);与对照组比较,NSCs移植组在移植后1周有更好的神经功能缺损评分,而且此疗效可维持长达8周。结论移植的NSCs可在脑出血的大鼠脑中存活、迁移,并促进功能恢复。立体定向移植神经干细胞可改善实验性脑出血大鼠的神经功能。     

长程皮下通道脑室外引流技术在重型颅脑损伤术后泛耐药鲍曼不动杆菌颅内感染治疗中的应用研究

目的探讨长程皮下通道脑室外引流(LTEVD)技术在治疗重型颅脑损伤(TBI)术后泛耐药鲍曼不动杆菌(XDR-AB)颅内感染的临床效果。方法回顾性分析2014年1月1日-2018年12月31日中南大学湘雅医院收治的65例TBI开颅术后并发颅内感染患者的临床资料。其中,50例以短程皮下通道脑室外引流(STEVD)技术治疗为STEVD组,15例术后并发XDR-AB性颅内感染行LTEVD技术治疗为LTEVD组。所有患者均进行围手术期规范化管理,依据脑脊液细菌培养药敏结果选择敏感抗生素治疗,XDR-AB者同期予以脑室内多黏菌素给药。结果两组患者一般特征、脑积水发生率、新增感染率及病死率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。STEVD组脑室内置管时间为(10.7±5.3)d,中位数10.0 d。而LTEVD组脑室内留置导管时间为(31.7±9.2)d,中位数32.0 d。两组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 LTEVD技术可以安全地延长脑室外引流时间超过1个月,疗效好,适用于难治性颅内感染或颅内外顽固性积液需长时程(>4周)脑脊液引流患者。     

脑血管畸形误诊为脑胶质瘤3例分析

我科自2006年6月至2008年7月共有3例病人术前诊断为脑胶质瘤，术中及术后的病理切片证实为脑血管畸形，现分析报道如下： 1病例例 1女性，47岁，因头痛、头晕、行走不稳1月，伴呕吐、复视半月，加剧3天入院，体查：视乳头边界模糊，有渗出，右侧跟膝胫实验阳性，昂伯氏征阳性，外院头部CT示：右侧小脑半球混杂密度影，     

新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞的体外培养及鉴定

目的从新生大鼠大脑皮质中分离、培养并鉴定星形胶质细胞。方法分离出生1-3d的大鼠大脑皮质细胞加入含有10％马血清、10％小牛血清以及10ng／mL EGF的MEM培养基培养，于第3-4周将细胞固定后采用免疫细胞化学技术检测特异性星形胶质细胞抗原GFAP的表达。结果从新生大鼠大脑皮质分离的细胞生长旺盛。星形胶质细胞形态典型，并表达星形胶质细胞特异性抗原GFAP，未见其他种类细胞生长。结论笔者建立了一种简单、可靠的大鼠星形胶质细胞的体外培养方法，为应用胶质细胞饲养层与其他细胞联合培养奠定了基础。     

神经干细胞移植对大鼠视神经部分损伤后视觉诱发电位的影响

目的观察研究神经干细胞(NSCs)移植入视神经部分损伤SD大鼠后闪光视觉诱发电位(F-VEP)的变化。方法24只健康成年SD大鼠随机分为NSCs移植组(N组)和对照组(C组),每组12只大鼠,两组均使用精确校准方法在大鼠右眼造成部分视神经损伤,左眼为正常对照。从胚胎SD大鼠海马分离NSCs,利用细胞培养和体内移植技术,将培养后的NSCs注入视神经损伤后N组大鼠玻璃体内,C组大鼠视神经损伤眼玻璃体内注入同等体积的PBS。以上两组分6个时间段,即损伤前、损伤时、损伤后1周、2周、3周、4周分别检测损伤视神经眼的F-VEP,记录P1波幅及峰潜时,并进行统计分析。结果N组及C组P1波幅随时间延长均不同程度降低,但前者趋势较后者缓和。自第2周开始N组波幅均高于C组,且差异有显著性；N组及C组P1峰潜时均随时间变化,在第3周时达到最长,第4周时P1峰潜时有缩短；自第1周开始N组峰潜时均较C组缩短,且差异均有显著性意义。结论NSCs移植入视神经部分损伤大鼠可部分改善视神经传导功能。     

应用Meditronic引流管治疗创伤性蛛网膜下腔出血的临床研究

目的探讨持续腰大池脑脊液引流在创伤性蛛网膜下腔出血治疗中的疗效。方法对54例tSAH患者实施持续腰大池脑脊液引流治疗,并与对照组43例tSAH患者每日行常规腰穿进行比较。两组均在入院24~48h内进行腰椎穿刺术。治疗组腰大池内置入美国Meditronic公司体外引流管行持续性脑脊液外引流;对照组每日行常规腰穿术,缓慢释放脑脊液,一般每日释液在10~70ml,平均35.6ml。两组间在GCS评分,Fisher评分,GOS评分及脑积水发生率和血性脑脊液清除速率等诸方面进行比较。结果治疗组GCS评分在第5d后明显提高,与对照组比较有显著性差异;治疗组Fisher评分分别在第5、10d后与对照组比较有显著性差异;治疗组伤后3月GOS评分良好率明显优于对照组;伤后3~8月随访结果治疗组脑积水发生率明显低于对照组;治疗组血性脑脊液清除速率也明显比对照组快。结论持续腰大池脑脊液引流是治疗tSAH的一种更安全、有效的方法,能显著降低tSAH患者的继发性脑损害,降低tSAH患者脑积水发生率,减轻脑血管痉挛,促进脑功能恢复。     

新生大鼠海马源性神经干细胞的分离培养及其向胆碱能神经元定向诱导分化研究(英文)

本研究目的是从新生SD大鼠海马分离、培养神经干细胞并诱导其向胆碱能神经元方向分化。利用含b FGF(20ng/ml)和B27的无血清DMEM/F12培养基培养新生SD大鼠海马分离的具有自我更新和多向分化能力的细胞群,用免疫细胞化学技术检测巢蛋白(nestin),并于分化后分别检查特异性成熟神经细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞的标记抗原β微管蛋白(Tuj1 )、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(Galc)的表达;用鸡胚骨骼肌提取液,诱导神经干细胞向胆碱能神经元方向分化。结果显示:从海马分离的细胞群具有自我更新能力,表达nestin,分化成熟后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原;与对照组3. 9%相比,鸡胚骨骼肌提取液可以诱导这些细胞中的9. 6%分化成为胆碱能神经元。提示分离的细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,是中枢神经系统的干细胞;在加有鸡胚骨骼肌提取液的培养基诱导下,能向胆碱能神经元方向分化。