p53基因对人胚肺成纤维细胞周期影响的研究

背景与目的:研究野生型和179位残基突变型p53基因在HELF细胞周期调控中的作用.探讨p53基因的179位残基突变对细胞生长的影响.材料与方法:用野生型p53(pcDNA3-wtp53)和179位残基突变的突变型p53(pcDNA3-mtp53)转染HELF细胞,观察细胞生长情况,绘制细胞生长曲线;用流式细胞仪分析细胞周期;用RT-PCR和Western blotting方法检测p53基因转染后HELF细胞周期相关基因mRNA和蛋白的表达.结果:野生型p53表达的上调使HELF细胞周期阻滞于G1期,细胞体积减小,并下调cyclin D3、cyclin E、Cdk2和Cdk4的表达,同时上调p21的表达.而179位残基突变的突变型p53表达的上调则促进细胞周期从G1期到S期的转换,同时细胞体积增大,上调cyclin A和Cdk4的表达.结论:p53的179位残基突变对于HELF细胞cyclin A和Cdk4的表达有诱导作用,并可能借此促进细胞周期进程.     

苯并芘对HELF细胞周期及相关基因表达的影响

背景与目的： 探讨苯并芘(benzo[a]pyrene, BaP)影响人胚肺成纤维细胞(HELF)周期的途径和作用机制。 材料与方法： 用5 μmol/L的BaP处理HELF细胞后,采用细胞计数,流式细胞仪检测BaP对细胞生长和周期的影响,用PCR和Western-blotting检测BaP对细胞周期相关基因mRNA和蛋白的影响。 结果： BaP处理HELF细胞后,显著促进细胞的生长,在处理后第8 d时细胞数目约增加50％(P<0.01),细胞体积增大,促进细胞由G1期向S期和G2/M期的转换。 mRNA和蛋白检测结果显示：BaP处理细胞后可以促进p53、cyclin D1、CDK2、CDK4和p21 mRNA及蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),抑制cyclin E mRNA及蛋白的表达(P均<0.01),而对cyclin A和p27 mRNA及蛋白表达没有明显影响(P均>0.05)。 结论： BaP对HELF细胞周期的调控逃脱了p53-p21的关卡作用,而通过诱导cyclin D1、CDK2和CDK4的表达来加快细胞周期的进程,该途径为cyclin A和p27非依赖型。