miR-25在人胃癌组织中的表达分析及其靶基因TOB1的鉴定

  目的   分析miR-25在胃癌组织中的表达水平并鉴定其新的靶基因。   方法   选取10例胃癌患者的胃癌及癌旁正常组织样本, 用qRT-PCR法检测miR-25的表达水平。利用miRNA靶基因预测数据库预测miR-25的靶基因。构建荧光素酶载体(pMIR-TOB1)及绿色荧光蛋白报告载体(pMIR-GFP-TOB1)(含有miR-25结合位点的TOB1的3'UTR片段), 利用荧光素酶活性实验和GFP荧光强度报告实验鉴定miR-25的预测靶基因(TOB1)。qRT-PCR法和Western blot法分别检测TOB1的mRNA和蛋白质的表达水平。   结果   miR-25在80%(8/10)的胃癌组织样本中表达上调。miR-25模拟物显著抑制了荧光素酶的活性(P < 0.01)和GFP荧光强度。miR-25模拟物显著下调了AGS细胞中TOB1的mRNA(P < 0.05)和蛋白质的表达。   结论   miR-25在人胃癌组织中表达上调, miR-25能结合TOB1的3'UTR并下调TOB1的mRNA和蛋白质的表达。      

microRNA在胃肠道肿瘤中的研究进展

microRNA（miRNA）是一段长度约22nt 的内源性非编码单链RNA分子,能在转录后水平调控基因的表达。研究证实,miRNA在细胞增殖、发育、分化、凋亡、代谢、信号转导以及肿瘤发生中发挥重要的调节作用。近年来,miRNA已经被证实能够抑制癌基因或抑癌基因的表达,参与了胃肠道肿瘤的发生和发展。本文就miRNA在人胃肠道肿瘤中的作用作一综述。      

miR-222在胃癌中的表达分析及其靶基因FOS的鉴定

目的分析miR-222在胃癌中的表达水平并鉴定miR-222的靶基因。方法选取第三军医大学新桥医院普外科10例患者的胃癌及远癌组织,匀浆法提取总RNA,用Real-time PCR法检测miR-222表达。利用miRNA靶基因预测数据库TargetScan,MICROCOSM及PicTar对miR-222的靶基因进行预测。化学合成包含有miR-222结合位点的靶基因3′非编码区(3′UTR)退火引物,插入荧光素酶报告载体pMIR-REPORT及绿色荧光蛋白(GFP)报告载体pMIR-GFP-RE-PORT,检测荧光素酶的活性变化及观察GFP表达量,并在蛋白水平用Western blot检测miR-222对靶基因的抑制。结果 miR-222在70%(7/10)的胃癌组织样本中表达上调。生物信息学(TargetScan,MICROCOSM及PicTar 3个miRNA靶基因预测数据库)分析可得在包括人类在内的不同物种中,FOS基因3′UTR区都有miR-222的保守结合种子序列。通过荧光素酶活性检测和GFP抑制试验可得miR-222在mRNA水平可以与FOS基因结合。Western blot结果显示miR-222...     

血清中lncRNA HOTAIR检测方法的建立及其在结肠癌诊断中的应用价值

目的 建立血清中长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA) HOTAIR的检测方法及评价其在结肠癌诊断中的作用.方法 收集结肠癌患者血清样本47例,正常志愿者血清样本40例,10对结肠癌及癌旁组织.采用TRIzol LS和TRIzol分离组织和血清中的RNA;采用qRT-PCR检测HOTAIR在组织及血清中的表达.结果 结肠癌组织或结肠癌患者血清中HOTAIR的表达显著高于癌旁组织或正常志愿者(P＜0.05,P＜0.01),且TNMⅢ/Ⅳ期的结肠癌患者血清中HOTAIR的表达高于正常志愿者(P＜0.05),Ⅲ/Ⅳ期显著高于Ⅰ/Ⅱ期(P＜0.01);淋巴结转移及非转移的结肠癌患者血清中HOTAIR的表达均显著高于正常志愿者(P＜0.01),且淋巴结转移患者显著高于非转移患者(P＜0.05);血清中HOTAIR的表达值诊断结肠癌的敏感性为65.96％,特异性为85.00％,曲线下面积为0.741 0;血清中HOTAIR的表达与CA199值呈显著正相关(P＜0.01,R2 =0.147 1).结论 成功建立血清中HOTAIR的检测方法,血清中HOTAIR的高表达可能作为诊断结肠癌的生物标志物.