细粒棘球蚴95抗原基因的克隆及原核表达质粒的构建

目的：克隆细粒棘球蚴95（Eg95)抗原基因，构建携带目的基因的原核表达载体，为细粒棘球蚴抗原的免疫保护机制研究提供材料。方法：应用PCR方法从细粒棘球蚴cDNA文库中克隆获得Eg95抗原基因，将其克隆至pUCm-T载体，测序确定其正确性。利用定向克隆技术将Eg95抗原基因片段克隆至原核表达质粒pET28上，根据选择标记的卡那霉素抗性基因筛选到阳性克隆，通过酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆，测序确定序列。结果：测序表明所有pET28-Eg95阳性克隆均为正确连接95抗原基因的重组质粒。结论：pET28-Eg95可以进一步用于重组蛋白的表达及抗细粒棘球蚴感染的实验研究。     

细胞DNA倍体定量分析在宫颈癌与癌前病变中的应用探讨

目的：将细胞DNA倍体定量分析方法与TBS常规细胞学方法应用于宫颈癌及癌前病变的筛查,比较两者的诊断效果,以提高诊断的准确性.方法：对门诊及体检的3165名妇女进行宫颈癌筛查.用宫颈刷取材,液基薄层制片后,分别进行DNA染色和巴氏染色,并分别进行全自动细胞扫描诊断和TBS常规细胞学诊断,对以上检查可疑的妇女在阴道镜下行宫颈组织学活检.结果：细胞DNA倍体分析系统发现异常303例（9.57％）,常规细胞学检查发现异常189例（5.98％）.135例妇女进行了活检,以病理诊断结果为标准,计算出DNA定量分析方法及常规细胞学方法在筛查CINⅡ以上宫颈病变的敏感性、特异性和阳性预测值,分别为84.21％、86.96％、84.21％和46.97％、91.30％和83.78％.结论：细胞DNA倍体定量分析方法在宫颈癌及癌前病变的筛查中具有较高的敏感性.     

EL4细胞STAT4沉默前后培养上清对小鼠肿瘤生长的影响

目的:探讨沉默小鼠T淋巴瘤细胞(EL4细胞)信号转导和转录激活因子4(STAT4)前后,其改变的培养上清液成分对H22肝癌荷瘤小鼠腹水生长及个体生存状况的影响.方法:应用ELISA方法检测肿瘤细胞STAT4沉默后培养上清液中白介素(IL)-10水平;将H22肝癌荷瘤小鼠随机分为STAT4(+)组、STAT4(-)组、IL-10组、培养基组,分别腹腔注射STAT4沉默前、后培养细胞上清液,IL-10,1640培养基,检测荷瘤小鼠体质量、腹围、腹水、生存率及腹水瘤细胞存活等指标;RT-PCR半定量检测荷瘤小鼠脾细胞的Foxp3 mRNA表达.结果:STAT4沉默后培养细胞上清液IL-10水平明显增高;用不同的培养上清液成分注射后STAT4(-)组体质量增长率较STAT4(+)组显著降低,与培养基组各指标比较差异无统计学意义;15 d内生存率比较,STAT4(-)组显著高于STAT4(+)组、IL-10组;STAT4(-)组脾细胞Foxp3表达水平高于其他3组.结论:STAT4沉默后培养细胞上清液局部注射荷瘤小鼠,能抑制癌性腹水增长,显著提高存活率,但脾细胞Foxp3 mRNA水平明显增高,可抑制荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫,这与近期观察到的结果相悖.     

Caspase-7蛋白在中耳胆脂瘤中的表达及意义

目的:探讨Caspase-7蛋白在中耳胆脂瘤的发生、发展中的作用,为中耳胆脂瘤的临床诊断、治疗及预后提供新途径。方法:收集2016年12月-2017年7月佳木斯大学附属第一医院耳鼻咽喉科经病理科证实的术中标本45例。其中中耳胆脂瘤标本30例为试验组,正常外耳道皮肤组织15例为对照组。采用免疫组化SP法分别检测两组中Caspase-7蛋白的表达情况。结果:Caspase-7蛋白在试验组的阳性表达要明显高于对照组,差异有统计学意义(x~2=4.727,P0.05)。结论:在中耳胆脂瘤上皮组织中Caspase-7蛋白呈高表达趋势,其阳性表达率显著高于正常外耳道皮肤组织,提示Caspase-7蛋白在中耳胆脂瘤的发生发展中起到重要作用。     

热休克蛋白90与肿瘤的研究进展

热休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)是主要作为分子伴侣参与蛋白质的合成、折叠,维持细胞的蛋白质空间构象和保护细胞免受损伤等重要生物学功能的一种蛋白质。HSP90在维持分子伴侣结构、调控细胞周期及凋亡、协调激素信号传递、促进创面愈合方面发挥重要作用。并且HSP90在肿瘤的发生和演进中也发挥重要的作用。近年来,HSP90抑制剂针对恶性肿瘤进行相关研究,在分子靶向治疗方面取得一定的成果,但在临床应用还需进一步的研究。本文以热休克蛋白90为靶标对肿瘤的相互关系研究现状进行综述。     

胃癌相关基因表达与其生物学行为关系研究

目的探讨P21、细胞周期素D1(CyclinD1)及P53基因表达与胃癌生物学行为的关系。方法应用原位杂交免疫组化技术检测74例胃癌组织及癌旁正常粘膜P21和CyclinD1mRNA及P53蛋白表达,分析三者与胃癌生物学行为的关系。结果74例胃癌组织和癌旁正常粘膜中,P21、CyclinD1及P53表达阳性率分别为43.2%和55.4%、40.5%和78.4%、25.7%和1.4%,三者比较均有显著性差异(P<0.01)。P21、CyclinD1及P53表达与患者性别、年龄、分期无明显相关性(P>0.05),与淋巴结转移显著相关(P<0.05);胃癌分化程度与P21阳性表达呈正相关,与CyclinD1阳性表达呈负相关。结论胃癌中P21低表达、CyclinD1和P53过表达可能促使胃癌细胞增殖,且具有更强的侵袭力;多基因表达异常可作为评价胃癌预后的重要参考指标。     

PBL教学法在我国医学教育中的应用实践与思考

PBL教学法是以学生为主导的教育模式。文章深入探究PBL教学理念,分析PBL教学法在国内医学教育中的应用现状和差异及PBL教学在我国医学教育中优势和存在问题,并结合我国医学教育的实践和要求,提出相关思考与建议。     

小鼠感染泡球蚴后细胞因子水平的变化

目的　观察人工接种泡球蚴(EM)昆明小鼠体内6种细胞因子水平的动态变化,研究泡球蚴病的免疫学机制。　方法　实验组和对照组小鼠分别腹腔接种泡球蚴及生理盐水,持续观察260d,收集各组血清用ELISA法检测血清中白细胞介素2(IL2)、γ干扰素 (IFNγ)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、IL4、IL5、IL10水平。　结果　实验组6种细胞因子水平始终高于正常对照组,其中辅助性T细胞1(Th1)类细胞因子IL2水平在感染后 80d达到峰值,感染140d后迅速降低;TNFα水平在感染后40d较对照组明显上升,感染100d左右达到峰值,140d后迅速下降;IFNγ在感染80d后达到峰值,140d后缓慢下降;而在80d以前,辅助性T细胞2(Th2)类细胞因子IL4、IL5、IL10维持在较低水平;100d后,这3类细胞因子明显上升,其中IL4、IL10水平在100d达到峰值,IL5水平在140d达到峰值,以后维持在较高水平。　结论　Th2细胞介导的体液免疫与Th1细胞介导的细胞免疫共同参与了宿主抗棘球蚴免疫。感染早期以Th1细胞介导的细胞免疫应答为主,感染中晚期转化为以Th2细胞介导的体液免疫为主。     

细粒棘球蚴囊液对体外培养小鼠脾细胞Foxp3及Smad4基因表达的影响

目的观察细粒棘球蚴囊液对体外培养BABL/c小鼠脾脏细胞中调节性T细胞(Treg细胞)相对特异分子Foxp3(叉头蛋白3)及TGF-β1(转化生长因子-β1)下游信号通路Smad4表达的影响。方法以BABL/c小鼠作为脾细胞供者,用研磨法分离脾脏细胞,随机分为实验组(与细粒棘球蚴囊液共同培养)和对照组,取1×105个细胞接种于96孔板上,分别在1、3、6和12 h提取RNA,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Foxp3以及Smad4的基因表达。结果 qRT-PCR显示,细粒棘球蚴囊液处理1、3和12 h,实验组Foxp3表达量分别为4.577±0.317、8.517±0.978和7.406±0.822,对照组分别为9.274±0.451、3.297±0.408和2.464±0.328,差异均有统计学意义(P<0.05);细粒棘球蚴囊液处理1 h和12 h,实验组Smad4表达量分别为3.862±1.417和1.690±0.248,对照组分别为1.689±0.221和3.600±1.081,差异有统计学意义(P<0.05),且Foxp3与Smad4二者之间存在负相关(r=-0.991,P<0.05)。结论...