尿沉淀细胞DNA的甲基化谱式分析和膀胱癌的诊断

目的：寻找并评估通过对尿沉淀细胞DNA甲基化分析检出膀胱癌的基因组合。方法：甲基化特异性PCR（methylation specific polymerase chain reaction,MSP）。结果：对3株膀胱癌细胞系进行的20个基因启动子区域CpG岛甲基化状态分析发现,除BRCA1以外其他基因至少在细胞株的1个等位基因呈高甲基化状态。对40例膀胱癌组和3组非膀胱癌对照组的尿沉淀细胞DNA进行了6个基因甲基化状态分析发现,SALL3在膀胱癌组甲基化率为67.5%（27/40）,MT1A为50.0%（20/40）,HPP1为50.0%（20/40）,MYOD1为37.5%（15/40）,BRCA1为32.5%（13/40）,TMS1为5.0%（2/40）。这6个基因在3个非膀胱癌对照组,即非肿瘤性泌尿生殖系统疾病患者23例、脑外科患者6例和正常人群7例均呈去甲基化状态,所以可以受试基因中任一个基因呈现高甲基化状态作为膀胱癌的指征,该法检出膀胱癌的敏感性为90.0%（36/40）。结论：对这5个基因在尿沉淀细胞DNA中甲基化状态的检测可望有效地检出膀胱癌。     

聚合酶链式反应检测血中柯萨奇病毒B在急性病毒性心肌炎诊断中的应用

总结１６１例成人急性病毒性心肌炎用聚合酶链式反应法检测血中柯萨奇病毒Ｂ核酸片段的结果，并与非心肌炎组９８例对比研究。结果：阳性检出率心肌炎组５７．８％，对照组４．１％（Ｐ＜０．０１），诊断特异性９５．９％。男、女性病人间阳性率差异无显著性。由于该法能快速、早期、准确检出病毒感染，比检测相应抗体阳性率高而早，特异性高，因此，可作为急性病毒性心肌炎患者近期病毒感染的辅助诊断方法。     

介绍一种测定混合功能氧化酶活性的简易方法——7-乙氧基香豆素O-去乙基酶活性荧光测定法

许多异己化合物是脂溶性的,必须转变为水溶性才能随胆汁、尿等排泄,否则会损害细胞功能。肝脏是主要的异己化合物代谢器官。有关的酶主要位于肝细胞的内质网,从肝脏匀浆分离的微粒体是内质网碎片,它包括许多酶系,其中一个酶系同氧化各种亲脂性化合物有关,称为肝微粒体P-450酶系。由于它有广泛的底物专一性,对动物体内各种     

抑制VEGF表达的锤头状核酶系统

目的:建立和评估抑制血管内皮生长因子(VEGF)表达的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)技术系统.方法:对VEGF121基因RNA序列进行二级结构分析,选择靶点;设计并构建针对VEGF的分泌肽RNA的可表达锤头状核酶(14)载体系统和VEGF-荧光色素酶融合基因报告质粒;通过试管内切割实验等方法评估核酶对于试管内转录得到的VEGF RNA切割特异性和效率;通过瞬时共转染实验和稳定转染实验评估核酶在细胞内对于VEGF RNA的切割效率.结果:设计和构建了对VEGF RNA二级结构水平上的暴露区( 8, 36和 71位点:核酶1,3和4)和非暴露区( 17位点:核酶2)4个锤头状核酶(14)的两套质粒;试管内切割检测表明,针对 8, 36和 71位点的核酶(1,3和4)可以有效地在试管内对VEGFRNA进行特异性切割,使其水平分别降至对照的61.7%,27.6%和44.8%(荧光色素酶活性)或66.3%,27.0%和30.0%(蛋白质水平);将核酶表达质粒与VEGF-LUC模板质粒瞬时共转染人SMMC-7721肝癌细胞,核酶1,3和4 VEGF-LUC水平分别降低到对照的81.4%,56.6%和69.1%;稳定表达针对VEGF的核酶1,3或4的SMMC-7721细胞株中,内源性VEGF RNA的水平降至对照水平的5%以下.对照未转染的、转染空载体的和转染了核酶2( 17)的SMMC-7721细胞.结论:分别针对VEGF 8, 36和 71位点锤头状核酶可有效地抑制VEGF的RNA水平.     

用尿沉淀细胞DNA甲基化状态的分析检测膀胱癌

目的：确定尿沉淀细胞DNA中的13个肿瘤相关基因启动子的甲基化谱式分析在膀胱癌诊断中的价值。方法：用定性甲基化特异性（methylation specific polymerase chain reaction，MSP）的方法，对92例临床确诊的膀胱癌患者、23例非肿瘤性尿路疾病患者、6例脑外科患者、7例健康志愿者检测了尿沉淀细胞DNA中肿瘤相关基因启动子的甲基化状态。结果：在临床确诊的92例膀胱癌患者中被检测的13个基因的高甲基化状态出现频率显著高于23例非肿瘤性尿路疾病患者，差异有统计学意义（P〈0．05）。而6例脑外科患者和7例正常健康人的尿沉淀细胞DNA中，上述基因均为去甲基化状态。若以任一个基因高甲基化为膀胱癌的指征，88．0％（81／92例）的膀胱癌可被检出。结论：MSP法分析尿沉淀细胞DNA中肿瘤相关基因启动子的甲基化状态可有效地检出膀胱癌。