粪中长链及中链脂类临床常规分析的改良法

现行的总脂肪酸测定法,是以乙醇代替水作为皂化介质。但产生脂肪酸乙酯,降低了从皂化液中提取脂肪酸的效能,特别是对中链脂肪酸更是如此。本改良法,是以苯:乙醇:水(12∶59∶29,V/V)热混合液提取粪中脂类,皂化30分钟也不产生脂肪酸乙酯,且增加脂类(因苯的存在)的溶解度,又因为增加了氢氧化钾浓度,使反应速度增加二倍。且由于提取仅用一种溶液,皂化不需转换容器,使操作简化,中链及长链脂类能定量回收。滴定操作简单准确、不须作标准曲线,是一种需时短、简易而准确的方法。试剂〈1〉纤维素胶溶液40 g/L。〈2〉95%乙醇。〈3〉6.8mol/L氢氧化钾。〈4〉1.02mol/L硫酸。〈5〉苯。〈6〉己烷。〈7〉50 mmol/L氢氧化钠溶液:溶2克NaOH     

人类重组PIF1解螺旋酶C-末端多肽的纯化及其抗体制备

目的：表达纯化人类PIF1解螺旋酶C-末端的338—641氨基酸的多肽PIF^338-641，同时用纯化蛋白制备特异抗体。方法：从HeLa细胞的eDNA文库中PCR扩增得到PIF1解螺旋酶C-末端1012—1926的cDNA片段（对应氨基酸338—641），插入N-末端融合有六聚组氨酸的表达载体pET15b产生pET15b—PIF^338-641重组质粒，转化Rosetta^TM2（DE3）感受态细胞，使PIF^338-641蛋白在大肠杆菌中表达，用自制的镍亲和柱纯化PIF^338-641蛋白，并以纯化蛋白免疫家兔制备抗血清。结果：PIF^338-641蛋白在大肠杆菌中成功表达，纯化了PIF^338-641蛋白并制备了PIF^338-641蛋白抗血清。结论：制备的PIF^338-641蛋白抗体能与蛋白发生特异的免疫反应。     

2-巯基乙磺酸钠

2-巯基乙磺酸钠(Sodium 2-mercapto-ethanesulfonate;MESNA,HSCH_2CH_2SO_3Na)系活性巯基化合物。选择地存在于细菌、真菌、植物及某些动物组织中,为甲基转移酶的辅因子,也称为辅酶M,为甲烷杆菌属细菌产生甲烷所必需。早期曾用合成品作为粘液溶解剂及重金属解毒剂,用于祛痰、治疗慢性支气管炎(商品名Mistabron)及砷、汞等的解毒。近年发现该品对环磷酰胺类烷化剂的泌尿系毒性有优良的解毒作用,从而扩大了这类抗癌剂的临床应用。     

参与DNA修复的PIF1解链酶的纯化和ATP酶活性分析

目的 克隆并表达纯化人类PIF1蛋白,分析其生物化学活性.方法 从HeLa细胞的cDNA文库中克隆得到PIF1解链酶基因,插入融合有组氨酸的表达载体pET24b,构建pET24b-PIF1重组质粒,转化RosettaTM2(DE3)感受态细胞,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察PIF1蛋白表达;通过快速液相蛋白色谱纯化(FPLC)系统,采用亲和层析和凝胶过滤,纯化人类重组PIF1蛋白.薄层层析(TLC)法检测纯化PIF1蛋白的ATP酶活性.结果 克隆了人类PIF1基因,PIF1蛋白在大肠埃希菌(E.coli)中成功表达.结论 建立了PIF1蛋白纯化的方法,PIF1蛋白具有依赖镁离子和DNA的ATP酶活性.     

启迪思维设计--启发式课堂教学的核心

启迪思维是课堂启发式教学的核心 ,其过程就是要求正确处理好教师为主导、学生为主体的关系 ,合理设计主导作用的切入点 ,充分调动学生主体的学习积极性、主动性。同时 ,围绕学习活动的核心 ,进行有效的思维 ,提高学习效率 ,从而实现预定教学目的。具体而言 ,课堂启迪思维如何设计 ?设计时要注意一些什么问题呢 ?以下谈几点我的认识。1　设问题情境教师在课堂教学要为学生创设问题的情境 ,然后在这种情境中引导学生探索前进。然而 ,这些情境的创设 ,不是课本就有的 ,而是要凭借教师的教学手段 ,结合教材内容 ,学生知识水平、实际教学条件以…     

生物化学实验教学改革总结

为适应21世纪对人才的需要，教学理念的改革和转变是非常重要的。教学的重要目标不仅是传授知识，而且是对学生进行科学思维能力的训练和创造力的培养。为此，在生物化学的实验教学中，培养学生的主观能动、发散思维、求异思维等训练；减少灌输式，多实施启发性的教学方法。     

参与DNA修复的PIF1解链酶的纯化和ATP酶活性分析

目的 克隆并表达纯化人类PIF1蛋白,分析其生物化学活性.方法 从HeLa细胞的cDNA文库中克隆得到PIF1解链酶基因,插入融合有组氨酸的表达载体pET24b,构建pET24b-PIF1重组质粒,转化RosettaTM2(DE3)感受态细胞,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察PIF1蛋白表达;通过快速液相蛋白色谱纯化(FPLC)系统,采用亲和层析和凝胶过滤,纯化人类重组PIF1蛋白.薄层层析(TLC)法检测纯化PIF1蛋白的ATP酶活性.结果 克隆了人类PIF1基因,PIF1蛋白在大肠埃希菌(E.coli)中成功表达.结论 建立了PIF1蛋白纯化的方法,PIF1蛋白具有依赖镁离子和DNA的ATP酶活性.     

人类抗砷相关基因hARRG cDNA抗砷功能的研究

目的探讨人类抗砷相关基因hARRGcDNA对砷化物的抵抗作用。方法将人类抗砷相关基因hARRGcDNA基因开放阅读框克隆于真核表达载体pcDNA4/HisC中。通过磷酸钙共沉淀方法将带hARRGcDNA基因开放阅读框的表达质粒与空pcDNA4/HisC质粒分别转染到人正常肝L鄄02细胞中,细胞分别用2、4、6、8、10μmol/LNaAsO2染毒,根据染砷细胞存活数确定hARRGcDNA的抗砷性。结果生物信息学分析hARRG蛋白为膜外蛋白,转染含hARRGcDNA基因开放阅读框的pcDNA4/HisC质粒在砷环境中细胞存活数目多于未带hARRG基因开放阅读框的空质粒。结论hARRGcDNA基因具有一定的抗砷作用。     

正常人二尖瓣中酸性粘多糖的分析

酸性粘多糖在不同器官和组织中的分布不同。多种疾病的首发部位示有其存在。心脏不同部位的酸性粘多糖的分布亦有不同。作者利用Dowe1×2柱层析,从正常人二尖瓣中分离出了5种酸性粘多糖。实验材料取死后不超过12小时,经肉眼及镜检无病变者的心脏(男女各12个,年龄25～64岁)切出二尖瓣,放入丙酮中保存。切碎,用丙酮脱脂数次,干燥,磨碎,过60目筛。将研细粉末放入干燥器,在冰箱中保存。酸性粘多糖的提取按Schiller法提取,以丙酮脱脂,分别用木瓜蛋白酶及胃蛋白酶消化二日。以5%三氯醋酸除去蛋白质。进行透析,于透析液内加4倍量的乙醇,低温下静置二日,使之沉淀出粗酸性粘多糖。用乙醇将沉淀洗净,风干,并溶于少