HBeAg真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的 克隆HBeAg基因,构建重组HBeAg真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中进行表达.方法 采用PCR法从HBeAg阳性乙型肝炎患者血清HBV DNA中扩增HBeAg基因,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建重组pcDNA-HBeAg真核表达载体,经PCR、双酶切、测序鉴定后,将其转染入CHO细胞,G418筛选,用PCR、免疫斑点、Western Blot、免疫细胞化学方法检测HBeAg在CHO细胞中的表达.结果 成功克隆到HBeAg基因,并构建了重组pcDNA-HBeAg真核表达载体;基因测序证实克隆的HBeAg基因中共有12个位点发生单碱基置换突变(C1819G,A2007T,C2046T,C2061G,G2106A,C2109A,C2146T,T2172C,C2203T,A2235G,G2253A,C2298T),1个位点发生缺失突变(2346 del T);成熟HBeAg蛋白中149位缬氨酸(valine,V)突变为苯丙氨酸(phenylalanine,F)(V149F),在HBeAg蛋白羧基端融合有一段长11个氨基酸的多肽(RLESRGPVZTR).PCR、免疫斑点、Western Blot和免疫细胞化学方法证实重组pcDNA-HBeAg真核表达载体可在CHO细胞中表达分泌型HBeAg蛋白.结论 重组HBeAg真核表达载体的构建和表达为HBeAg的临床诊断和深入研究提供了条件.     

小儿皮肤血管瘤c-myc蛋白表达与其细胞增殖和凋亡的关系

目的　探讨小儿皮肤血管瘤中c myc蛋白表达水平与血管瘤增生消退、细胞增殖活性及凋亡程度的关系。方法　以5 8例小儿皮肤血管瘤组织为研究对象 ,用免疫组织化学SP法分别检测c myc蛋白和增殖细胞核抗原的表达 ,并用末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记技术做原位细胞凋亡检测。结果　 5 8例血管瘤组织中c myc蛋白表达率消退期显著高于增生期 (P <0 .0 1)。随着c myc蛋白表达强度增加 ,其细胞增殖活性相应降低 ,凋亡相应增加 ,c myc蛋白 ( )组、( )组分别与 (-)组、( )组比较 ,增殖指数和凋亡指数的差异均有显著性 (P <0 .0 1)。结论　小儿血管瘤内皮细胞c myc蛋白表达强度的增加可诱导内皮细胞凋亡 ,同时使细胞增殖受到相对抑制 ,提示c myc基因在血管瘤发生、发展和退化中起重要作用。     

bFGF与ki-67双重免疫组化染色法

双重免疫组化染色是同在一张切片上显示两种不同抗原的免疫组化法 ,能同时观察细胞及组织中两种不同抗原的分布情况 ,对于研究它们之间的关系具有重要意义。本实验成功地在一张切片上显示卵巢肿瘤组织中碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)与增殖细胞核抗原 (Ｋｉ 6 7) ,用以观察ｂＦＧＦ表达的细胞是否为增殖细胞 ,介绍如下。1　材料与方法1 1　标本　 45例卵巢肿瘤组织 ,常规 10 %福尔马林固定 ,石蜡包埋 ,5ｍｍ厚切片。1 2　试剂　ｂＦＧＦ多克隆抗体 (ＳａｎｔａＣｒｕｓ公司产品 ) ,Ｋｉ 6 7单克隆抗体 (ＭａｘｉｎＢｉｏ公司产品 ) ,双…     

凋亡相关基因 Bax、FasL、c - FLIP 在浆液性卵巢癌中的表达

目的:探讨凋亡相关基因Bax、Fas L、c-FLIP在浆液性卵巢癌中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学SP法及实时定量PCR法检测卵巢浆液性囊腺瘤(16例)、交界性浆液性囊腺瘤(25例)、浆液性囊腺癌(48例)组织中Bax、Fas L、c-FLIP蛋白及mRNA的表达情况。结果:Bax、Fas L、c-FLIP在卵巢浆液性囊腺瘤组织的细胞浆中未见明显的棕黄色颗粒沉着,而在交界性浆液性囊腺瘤、浆液性囊腺癌组织的细胞浆中可见明显的棕黄色颗粒沉着,其中以浆液性囊腺癌阳性表达最高。与卵巢浆液性囊腺瘤组相比,交界性浆液性囊腺瘤、浆液性囊腺癌中Bax、Fas L、c-FLIP mRNA表达显著增高(P<0.05)。结论:Bax、Fas L、c-FLIP凋亡相关基因在卵巢癌中蛋白及mRNA的表达呈一致升高趋势,可能通过调控凋亡相关途径共同参与了卵巢癌的发生发展过程,为临床上卵巢癌防治提供新靶点。     

特发性肠系膜静脉肌内膜增生症临床病理特征观察及文献回顾

目的 探讨特发性肠系膜静脉肌内膜增生症临床病理特征。方法 收集1例少见的特发性肠系膜静脉肌内膜增生症,通过回顾临床信息、组织形态特点,复习国内外相关文献,总结其临床病理特征。结果 患者女性,30岁,间断性右下腹痛6个月余。以克罗恩病治疗无效,随后手术切除右半结肠。术前活检见固有层纤维素沉积及黏膜下层“动脉化”毛细血管;手术标本发现肠系膜侧显著的中小静脉肌内膜增生,部分静脉腔显著狭窄或闭塞,弹力纤维染色提示内膜下弹力纤维增生紊乱,考虑特发性肠系膜静脉肌内膜增生。结论 特发性肠系膜静脉肌内膜增生症是一种少见的缺血性结肠炎,确诊依赖手术标本肠系膜中小静脉肌内膜的增生,活检标本内皮下纤维蛋白沉积和毛细血管“动脉化”或可帮助诊断。     

浆液性卵巢肿瘤组织中DCR3、Survivin、PDCD5的表达

目的:探讨DCR3、Survivin、PDCD5凋亡相关基因在浆液性卵巢肿瘤组织中的表达。方法:采用免疫组化及Real-time PCR两种方法观察浆液性囊腺瘤16例、交界性浆液性囊腺瘤25例、浆液性囊腺癌48例组织中DCR3、Survivin、PDCD5的蛋白及mRNA表达。结果:DCR3、Survivin、PDCD5在卵巢浆液性囊腺瘤组织的细胞浆或核未见明显的棕黄色颗粒沉着,而在交界性浆液性囊腺瘤组织的细胞浆或核中可见弱的棕黄色颗粒沉着,浆液性囊腺癌可见强的棕黄色颗粒沉着。与卵巢浆液性囊腺瘤组相比,交界性浆液性囊腺瘤、浆液性囊腺癌中DCR3、Survivin、PDCD5 mRNA表达水平显著增高(P＜0.05)。结论:DCR3、Survivin、PDCD5凋亡相关基因在浆液性卵巢肿瘤中的蛋白及mRNA表达变化呈一致升高的趋势,其机制可能与调控凋亡有关,进而参与了卵巢肿瘤的发生发展过程,并可为卵巢肿瘤的防治提供一些新策略。     

p16INK4a蛋白可作为乳腺癌特异性分子标志

目的探讨p16INK4a 蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法收集2014 年~2015 年间手术切除的132 例乳腺癌标 本,采用罗氏全自动免疫组化染色仪进行免疫组织化学染色,检测ER、PR、Her-2、Ki67、CK5/6、和p16INK4a表达,并按照不同 表达模式进行结果判读和分子分型,观察p16INK4在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌免疫表型、分子亚型及临床指标的相关性。 结果132例浸润性乳腺癌中Luminal A型58例、Luminal B型32例、Her-2型21例、basal-like（BLBC）型12例、Normal-like型9 例。p16INK4a蛋白表达阴性（0）、弱阳性（1+）、阳性（2+）和强阳性（3+）表达样本分别占总数的5.30%（7/132）、11.36%（15/132）、 30.30%（40/132）、53.03%（70/132）。按照p16INK4a表达强度,将阴性（0）和弱阳性（1+）病例合并为阴性组（≤1+）、将阳性（2+） 和强阳性（3+）病例合并为阳性组（≥2+）,p16INK4a 阴性（≤1+）表达率为16.67%（22/132）、p16INK4a 阳性（≥2+）表达率为 83.33%（110/132）。按照构成比进行统计分析,发现p16INK4a蛋白的表达强度除在不同年龄分组中具有统计学差异（P<0.05） 之外,与ER、PR、Her-2及分子分型和是否存在转移之间均无统计学差异（P>0.50）。结论p16INK4A代偿性高表达是浸润性乳 腺癌细胞周期异常的主要机制,且p16INK4A可作为浸润性乳腺癌细胞特异性的分子标志,采用IHC技术检测p16 INK4a 的表 达不仅为乳腺癌诊断提供了一种重要方法,也为乳腺癌的机制研究提供有价值的信息。     

婴幼儿血管瘤及血管畸形组织中p16及TRAIL的表达及其意义

目的　检测婴幼儿血管瘤组织中抑癌基因 p1 6及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的表达 ,并探讨它们在血管瘤增生、消退过程中的作用。方法　采用免疫组化SP法检测 32例增生期、2 0例消退期血管瘤及 1 4例血管畸形组织中p1 6和TRAIL的表达。结果　p1 6在增生期和消退期血管瘤组织中阳性表达率分别为 78.1 % (2 5/ 32 )、90 .0 % (1 8/ 2 0 ) ,血管畸形组织中全部为阴性。经秩和检验 :Hc=2 6 .6 ,三者之间差异存在显著性意义 (P <0 .0 1 ) ,两者之间差异有显著性意义(P <0 .0 5)。TRAIL在增生期和消退期血管瘤组织中阳性表达率分别为 2 1 .9% (7/ 32 )、80 .0 % (1 6/2 0 ) ,血管畸形中全部为阴性 ,卡方检验 :χ2 =2 7.8,三者之间差异存在显著性意义 (P <0 .0 1 ) ,两两之间比较经 χ2 分割 ,增生期与消退期之间有差异 (P <0 .0 5) ,消退期与血管畸形之间有差异 (P <0 .0 5) ,增生期与血管畸形之间无差异 (P >0 .0 5) ,血管瘤与血管畸形之间有差异。结论　p1 6和TRAIL的表达水平与血管瘤的增生、消退有关 ,p1 6可抑制内皮细胞的分裂增殖 ,TRAIL可通过诱导内皮细胞凋亡发挥作用 ,两者均可促进血管瘤消退     

人乳头瘤病毒6,11的原位检测

目的：探讨组织原位检测HPV的方法。方法：应用免疫组化法、DNA原位杂交法、PRINS（primed insitu labeling)技术检测34例尖锐湿疣（CA）和8例女阴假性湿疣（pseudo-condyloma)组织中人乳头瘤病毒抗原（HPV－Ag)和病毒核酸序列（HPV－DNA）。结果：尖锐湿疣组织中HPV－Ag阳性率为70．6％（24／34），原位杂交法HPV（6，11）－DNA阳性率为91．2％（31／34），PRINS法HPV（6，11）－DNA阳性率为100％（34／34）。原位杂交法及PRINS法与免疫组化法阳性率比较差异均有显著性（P均＜0．05）；女阴假性湿疣组织中均为阴性。结论：PRINS法检测HPV－DNA，敏感快速，阳性率高于免疫组化和原位杂交法。