miR-640通过抑制SLIT1介导Wnt/β-catenin通路促进脑胶质瘤对替莫唑胺的耐药

摘 要：［目的］评价miR-640介导Wnt/β-catenin通路对脑胶质瘤耐药细胞增殖、侵袭及替莫唑胺(temazolamide,TMZ)敏感性的影响。［方法］ 利用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）测定脑胶质瘤细胞内miR-640的表达。U87/TMZ细胞分为NC inhibitor组、 miR-640 inhibitor组和miR-640 inhibitor+si-SLIT1组。用不同浓度（15、30、60、120、240 、480和960 μmol/L）TMZ处理细胞,检测细胞对TMZ的耐药性;运用细胞计数试剂盒8（CCK-8）、Transwell实验检测U87/TMZ细胞增殖活力和侵袭力;用双荧光素酶报告基因实验验证miR-640与SLIT1的靶向关系。采用Western blot检测Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白表达水平。［结果］ miR-640在脑胶质瘤细胞中高表达,转染后miR-640 inhibitor组的miR-640表达水平、侵袭细胞数目（57±23 vs 153±31）、IC50值（131.61±8.97 vs 293.33±11.28）、增殖率（18.48±4.23 vs 43.84±8.94）均比NC inhibitor组低（P<0.05）。miR-640靶向调控SLIT1的表达,miR-640 inhibitor+si-SLIT1组β-catenin、c-myc、Cyclin D1蛋白表达水平均高于miR-640 inhibitor组（P<0.05）。［结论］miR-640通过SLIT1介导Wnt/β-catenin通路促进脑胶质瘤增殖、侵袭及对替莫唑胺的耐药性。     

长链非编码RNA INK4位点反义非编码RNA与微RNA-125a在支气管哮喘患儿血浆中的表达及临床意义

目的 探讨lncRNA INK4位点反义非编码RNA （ANRIL）在支气管哮喘患儿血浆中的表达及其与患病风险、疾病严重程度和miRNA-125a的关系。方法 连续纳入急性发作期支气管哮喘患儿、缓解期支气管哮喘患儿和匹配的健康儿童各70例,收集受试者实验室检查及肺通气功能检测结果。采用qRT-PCR检测受试者血浆中lncRNA ANRIL和miRNA-125a表达水平,并用ELISA法检测受试者血浆中炎性因子（TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17）水平。结果 LncRNA ANRIL在急性发作期支气管哮喘患儿血浆中的表达水平高于缓解期支气管哮喘患儿和健康儿童（P均<0.001）,在缓解期支气管哮喘患儿血浆中的表达水平高于健康儿童（P=0.002）。ROC曲线表明lncRNA ANRIL能很好地区分3组受试者。LncRNA ANRIL表达水平与急性发作期支气管哮喘患儿疾病严重程度有关（P=0.001）,与TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17表达水平均呈正相关（P均<0.05）,而与第1秒用力呼气容积（FEV₁）/用力肺活量（FVC）、FEV₁占预计值的百分比（FEV₁% Pred）均呈负相关（P均<0.05）。LncRNA ANRIL表达水平与缓解期支气管哮喘患儿TNF-α、IL-1β和IL-17表达水平及健康儿童IL-6表达水平均呈正相关（P均<0.05）。同时,lncRNA ANRIL表达水平还与3组受试者miRNA-125a表达水平均呈负相关（P均<0.05）,并且miRNA-125a表达水平与急性发作期支气管哮喘患儿FEV₁/FVC、FEV₁% Pred均呈正相关（P均<0.001）。结论 LncRNA ANRIL对儿童支气管哮喘及急性发作有诊断价值,对哮喘严重程度和患儿炎症水平有潜在的预测价值;lncRNA ANRIL可能通过靶向调控miRNA-125a参与儿童支气管哮喘的发生、发展。