分泌型卷曲相关蛋白4在不同DNA错配修复功能状态Ⅱ期肠癌中的表达及意义

目的探究分泌型卷曲相关蛋白4（SFRP4）在DNA错配修复（MMR）功能正常与MMR功能缺陷的Ⅱ期结肠癌中的表达及 意义。方法收集新鲜的Ⅱ期结肠癌组织标本,并根据MMR 状态分为pMMR 和dMMR 组。利用Affymetrix Human oeLncRNA 基因芯片检测两组不同MMR状态结肠癌组织中差异表达的mRNA情况。通过q-PCR和Westernblot 技术检测 dMMR和pMMR肠癌组织、细胞株中SFRP4的表达并分析两组间表达差异情况;通过免疫组化技术检测增殖标志物Ki-67的表 达并分析SFRP4与Ki-67表达的相关关系。利用HCT116细胞株,干扰SFRP4的表达,通过流式细胞术检测干扰SFRP4前与干 扰后HCT116细胞株的凋亡率并分析其差异。结果PCR和Western blot的结果提示SFRP4在dMMR状态的肠癌组织、细胞株 中的表达明显高于pMMR的肠癌组织（P=0.014）、细胞株（P=0.0079）,免疫组化结果提示SFRP4与Ki-67蛋白在肠癌组织的表 达呈负相关关系（P=0.041）。siRNA干扰SFRP4的表达后HCT116细胞株凋亡率下降,包括早期凋亡（P=0.003）和晚期凋亡率 （P=0.024）。结论SFRP4在dMMR型肠癌表达较pMMR型表达增高,促进肠癌细胞凋亡、抑制增殖,可能有助于改善MMR缺 陷型Ⅱ期肠癌预后。     

循环肿瘤细胞数目与血清中Cyfra21-1、CEA、Fg表达水平的关系

目的:探讨肿瘤患者外周血循环肿瘤细胞(CTCs)与常用的肿瘤指标细胞角质素19可溶片段（Cyfra21-1）、癌胚抗原（CEA）及凝血功能指标纤维蛋白原（Fg）表达水平的关系,比较CTCs阳性组和阴性组转移灶数目差异。方法:采集66例进展期晚期肺癌住院患者治疗前7.5ml外周血,保存于4℃冰箱中,24小时内由益善生物技术公司使用“免疫去除结合纳米过滤法”行CTCs检测。同时检测血清中Cyfra21-1、CEA、Fg水平,收集并分析CTCs数目与转移灶数目、临床T分期、转移淋巴结的关系。结果:纳入患者中CTCs检出率为86.4%。CTCs数目与Cyfra21-1水平有相关关系,相关系数为0.365（P=0.003）;CTCs数目与Fg水平相关,相关系数为0.330（P=0.007）;CEA与CTCs两变量无明显相关性。两组患者的肿瘤转移器官数目大于3个的比例有显著差异。结论:两组患者Cyfra21-1异常增高率有显著差异,且CTCs数目与Cyfra21-1表达水平正相关,可由Cyfra21-1初步估计CTCs水平。而外周血中Fg异常增高率无显著差异,但二者表达水平呈明显正相关,因此分析CTCs数目需要考虑Fg表达水平的影响。     

ApoG2诱导乳腺癌细胞MDA-MB231自噬的最低浓度探讨

目的:探究不同浓度棉酚衍生物ApoG2对乳腺癌细胞株MDA-MB231诱导自噬的最低浓度,寻找抗肿瘤效应的最适合浓度。方法:CCK8法检测细胞的增殖活性;透射电镜下观察细胞超微结构;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期阻滞情况;细胞免疫荧光法检测各组细胞LC3-II荧光强度;RT-PCR及Western blot法检测细胞自噬蛋白LC3-I及LC3-II表达强度。结果:CCK8法示ApoG2对乳腺癌MDA-MB231细胞呈浓度、时间依赖性抑制增殖且各组间差异存在统计学意义;透射电镜下发现ApoG2可诱导凋亡及自噬;流式细胞仪检测发现ApoG2诱导凋亡呈浓度依赖性,使细胞周期阻滞于S期且10μmol/L浓度组最明显;细胞免疫荧光法发现10μmol/L组细胞LC3-II荧光最弱;RT-PCR及Western blot法示细胞自噬蛋白LC3-I表达各组间无明显差异,LC3-II在10μmol/L浓度组表达量最弱,80μmol/L浓度组表达量最强。结论:10μmol/L为ApoG2诱导乳腺癌细胞MDA-MB231自噬最低浓度,也是抑制自噬,促进凋亡的抗肿瘤最适浓度。     

稳定表达新抑癌基因WTX的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞株的建立

目的构建含有全长WTX(Wilms tumor gene on the X chromosome)目的基因的表达载体,建立稳定表达WTX基因的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞系,为WTX基因功能研究提供保障。方法以人胚肾293FT细胞为模板,经PCR扩增获得全长WTX cDNA序列,将全长WTX目的基因序列克隆入带有绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP-N1表达载体,建立pEGFP-WTX表达载体。经限制性内切酶酶切鉴定、测序并转染293FT细胞观察报告基因表达情况,判断pEGFP-WTX表达载体构建是否成功。构建成功的pEGFP-WTX表达载体转染人胃癌BGC-823细胞,建立稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞。qRT-PCR及免疫组化检测转染细胞WTX表达。结果 PCR方法从人胚肾293FT细胞扩增获得全长WTX cDNA,经测序鉴定序列完全正确;pEGFP-WTX质粒DNA经酶切鉴定片段大小正确、转染294FT细胞可见清晰的绿色荧光表达。BGC-823/WTX-EGFP细胞能够稳定表达WTX。结论本研究成功构建了含有全长WTX cDNA的表达载体系统,建立了稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞,为WTX基因功能研究奠定了良好基础。