流式细胞术检测抗中性粒细胞抗体方法的建立及临床初步应用

目的建立适用于临床的流式细胞术（FCM）检测抗中性粒细胞抗体（ANA）的方法,并作临床初步应用。方法采用FCM,以前向散射和侧向散射参数区分全血标本中的淋巴细胞和粒细胞,设定粒细胞门,用CD16b-藻红蛋白（PE）和CD177-别藻蓝蛋白（APC）单克隆抗体分别检测中性粒细胞中表面表达CD16b和CD177抗原细胞的百分率。用所建方法检测健康对照32名,确定参考范围,以此作为判断受检者血液中抗CD16b或CD177抗体存在与否的依据。检测外周血白细胞（WBC）总数〈4.0×109/L且中性粒细胞绝对计数（ANC）〈2.8×109/L的59例患者的CD16b和CD177百分率,并对其中中性粒细胞表达CD16b和/或CD177百分率低于参考范围（即判为相应抗体阳性）的患者给予激素治疗,观察疗效。结果健康人群中性粒细胞中表达CD16b和CD177的百分率分别为98.36%±1.53%和74.95%±11.07%,据此分别确定了健康人群中性粒细胞表达CD16b和CD177的参考范围分别为CD16b〉95.36%、CD177〉53.25%（即〉x珋-1.96s）。59例患者中有23例（39.0%）ANA阳性,其中ANC〈2.0×109/L患者的ANA阳性率（50.0%）远高于ANC〉2.0×109/L患者（27.6%）。ANA阳性患者经激素治疗后,WBC和ANC上升。结论 FCM检测抗中性粒细胞CD16b和CD177抗体是自身免疫性中性粒细胞减少症（AIN）实验简便、快捷的诊断方法,有助于AIN的诊断、鉴别诊断和疗效判断。     

线粒体异常与肿瘤的关系

线粒体生物氧化功能的改变、线粒体激活介导的细胞凋亡途径异常、线粒体DNA突变和缺失均与肿瘤的发生发展密切相关,为线粒体为靶点的肿瘤诊断和治疗奠定基础.现综述与肿瘤相关线粒体异常的研究进展.     

猪FasL基因在猪软骨细胞上的表达和鉴定

目的: 实现猪Fas配体(FasL)基因在猪软骨细胞中表达和鉴定。方法: 用RT- PCR扩增猪FasL基因片段, 构建重组pGCEN-FasL逆转录病毒载体, 并转染PA317细胞。经G418筛选获得高滴度的病毒液, 感染猪软骨细胞, 应用FACS和Westernblot检测软骨细胞上FasL的表达。结果: 经酶切分析、测序证明, 成功地构建pGCEN- FasL逆转录病毒载体。转染的软骨细胞表面FasL的表达率为 57%。Westernblot显示, 在Mr为 37 000处有 1条特异性蛋白带, 具有诱导Fas 细胞凋亡的作用。结论: 成功地构建重组猪FasL基因的逆转录病毒载体, 并在转染的软骨细胞上高表达具有生物学活性的FasL, 为建立同种异体软骨细胞移植的免疫耐受提供了实验依据。     

肿瘤相关线粒体蛋白12对移植瘤细胞增殖的影响

目的探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对小鼠移植瘤细胞增殖的影响。方法采用脂质体法将TAMP12基因及空载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选获得稳定高表达TAMP12细胞株(SMMC-7721-TAMP12)及对照细胞(SMMC-7721-pcDNA3.1),实时定量PCR和蛋白印迹检测TAMP12在这两组细胞中的表达。将SMMC-7721-TAMP12和对照SMMC-7721、SMMC-7721-pcDNA3.1三组细胞分别接种于BALB/cnu/nu小鼠的前肢腋下,连续观察荷瘤小鼠中肿瘤的生长状况。接种4周后处死小鼠,取瘤块分别测量瘤体质量和体积,应用实时定量PCR和免疫组化方法检测三组移植瘤中TAMP12的表达;透射电镜观察移植瘤细胞中亚细胞器形态;并应用基因芯片技术检测三组移植瘤肿瘤细胞中的基因差异表达。结果将经实时定量PCR和蛋白印迹检测显示高表达TAMP12的SMMC-7721和对照细胞分别接种裸鼠后,三组荷瘤小鼠中肿瘤的生长曲线呈现明显差异,转染TAMP12的荷瘤小鼠中肿瘤生长速度明显快于对照组荷瘤小鼠。肉眼观察可见实验组肿瘤组织中血管较对照组丰富;电镜观察发现实验组的细胞分裂增殖明显。基因芯片显示,该基因的高表达可促进多个与细胞增殖相关的基因表达上调。结论TAMP12基因具有促进细胞增殖的作用,其机制可能与调节细胞增殖的胰岛素样受体介导的信号转导通路有关。     

肿瘤相关线粒体蛋白12对移植瘤细胞增殖的影响

目的探讨肿瘤相关线粒体蛋白12（TAMP12）对小鼠移植瘤细胞增殖的影响。方法采用脂质体法将TAMP12基因及空载体转染肝癌细胞系SMMC-7721，经G418筛选获得稳定高表达TAMP12细胞株（SMMC-7721-TAMP12）及对照细胞（SMMC-7721-pcDNA3.1），实时定量PCR和蛋白印迹检测TAMP12在这两组细胞中的表达。将SMMC-7721-TAMP12和对照SMMC-7721、SMMC-7721-pcDNA3．1三组细胞分别接种于BALB／C^nu/nu小鼠的前肢腋下，连续观察荷瘤小鼠中肿瘤的生长状况。接种4周后处死小鼠，取瘤块分别测量瘤体质量和体积，应用实时定量PCR和免疫组化方法检测三组移植瘤中TAMP12的表达：透射电镜观察移植瘤细胞中亚细胞器形态；并应用基因芯片技术检测三组移植瘤肿瘤细胞中的基因差异表达。结果将经实时定量PCR和蛋白印迹检测显示高表达TAMP12的SMMC-7721和对照细胞分别接种裸鼠后，三组荷瘤小鼠中肿瘤的生长曲线呈现明显差异，转染TAMP12的荷瘤小鼠中肿瘤生长速度明显快于对照组荷瘤小鼠。肉眼以察可见实验组肿瘤组织中血管较对照组丰富；电镜观察发现实验组的细胞分裂增殖明显。基因芯片显示，该基因的高表达可促进多个与细胞增殖相关的基因表达上调。结论TAMP12基因具有促进细胞增殖的作用，其机制可能与调节细胞增殖的胰岛素样受体介导的信号转导通路有关。     

线粒体异常与肿瘤的关系

线粒体生物氧化功能的改变、线粒体激活介导的细胞凋亡途径异常、线粒体DNA突变和缺失均与肿瘤的发生发展密切相关,为线粒体为靶点的肿瘤诊断和治疗奠定基础.现综述与肿瘤相关线粒体异常的研究进展.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析及SCCmec分型

目的了解上海市普陀区人民医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药情况及SCCmec型别,为预测耐药菌株的发展趋势、为临床预防和治疗MRSA感染提供理论依据。方法收集该院2012年1月至2016年12月临床分离的MRSA共380株,采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验,采用多重聚合酶链反应检测SCCmec型别。结果所有菌株对利奈唑胺、万古霉素均敏感,敏感率为100.0%;对利福平、复方磺胺甲噁唑耐药率较低,分别为5.0%和7.6%;对红霉素、左氧氟沙星、四环素高度耐药,耐药率分别是100.0%、94.2%、93.4%和90.0%;对青霉素耐药率为100.0%。380株MRSA有SCCmecⅡ型281株(73.9%),SCCmecⅢ型59株(15.5%),SCCmecⅣa型5株(1.3%),另有35株(9.2%)未能分型。结论上海市普陀区人民医院分离的MRSA标本以SCCmecⅡ型为主,具有多重耐药的特征,不同SCCmec型别的耐药谱有所差异。     

TIL识别的HLA-A2限制性人黑色素瘤特异抗原肽的研究

目的：探讨TIL识别的人黑色素瘤HLA-A2限制性的肿瘤抗原肽特性。方法：通过亲和层析柱从三种肿瘤细胞系（624-Mel、Chap-Mel和JY）中纯化HLA-A2蛋白和结合的多肽分子，经弱酸高温处理和离心超滤后，应用反相．高效液相色谱层析（RT-RPLC）分离各多肽组份，并将其各组份与T2细胞共同孵育、进行重建TIL识别的人黑色素瘤特异表位试验，鉴定肽分子生物活性，通过质谱分析所获活性肽分子特性，参照活性肽序列，制备人工合成肽加以进一步证实。结果：从RT-RPLC层析的624-Mel的肽组份，经特异表位鉴定发现3个活性峰（P19、P25和P31）。其中P31，TIL杀伤率达67％，质谱分析表明肽分子量为948，氨基酸序列为H^＋Ala Lue Trp Lue Phe Phe Gly Val Lue OH^-的9肽分子。经特异表位测定表明人工合成肽具有纯化活性肽的生物活性特征。结论：分离鉴定的这-9肽分子是一种TIL识别的HLA-A2限制性肿瘤抗原肽，为肿瘤防治、合成肽疫苗的研究奠定了可靠的实验基础。     

树突状细胞在免疫耐受中的作用

树突状细胞 (dendriticcell,DC )在诱导和维持外周耐受及免疫调节中发挥着重要作用。综述了关于DC调节免疫耐受的机制 ,并介绍了若干DC亚群在诱导免疫耐受中的不同作用