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1.
左丽  郭辉玉 《中华医学杂志》1997,77(11):868-869
聚合酶链反应和原位杂交检测畸胎组织巨细胞病毒DNA左丽郭辉玉为进一步探讨巨细胞病毒(CMV)与胎儿畸形相关性及其致畸机制,我们采用聚合酶链反应(PCR)和原位杂交检测了畸胎组织巨细胞病毒(CMV)DNA。一、对象和方法1.标本来源:10例畸胎由贵州省...  相似文献   
2.
登革2型病毒E蛋白免疫优势表位的筛选鉴定   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 用噬菌体展示肽库筛选登革2型病毒(DEN2)E蛋白的抗原表位,并确定该抗原表位性质。方法 以DEN2型特异的E单克隆抗体作为筛选分子,生物淘洗噬菌体随机12肽库,将筛选的噬菌体阳性克隆进行ELISA检测、DNA序列测定及展示肽的氨基酸序列推导,通过噬菌体展示肽序列与DEN2E蛋白的氨基酸一级结构的对比,初步确定E蛋白的抗原表位;用模拟该表位线性序列的合成十肽进行抗体结合试验、噬菌体竞争抑制试验及与DEN感染患者的血清学试验,确定其为免疫优势线性表位。结果 肽库淘洗获得的11个ELISA阳性的噬菌体克隆有相似的结构基序WFKKGSS,其展示肽与DEN2E蛋白390~398 AA序列有3~5个氨基酸相同。对应于DEN2E蛋白390~399AA的合成十肽能与淘洗单抗特异反应,并可抑制噬菌体阳性克隆与该单抗结合。该合成肽与DEN2感染患者血清有较高的免疫反应性。结论 本实验通过噬菌体随机肽库的生物淘洗确定的DEN2E蛋白(E390~398AA)线性序列为免疫优势表位,其对应的合成肽E10可望用于DEN2感染的快速诊断。  相似文献   
3.
目的 :探讨抗疱疹病毒药物黄芪A6 组分(A6)和无环鸟苷(ACV)联合抗 1型单纯疱疹病毒(HSV1 )的作用机制。方法 :利用竞争PCR检测A6 和ACV联合抗HSV1 的协同作用 ,并与细胞病变(CPE)抑制法进行比较。结果 :竞争PCR测定A6、ACV和A6 ACV对HSV1 的最小抑制浓度(MIC)分别为 1 88mg/ml、3 3 7μg/ml和 0 47mg/ml 0 84μg/ml;CPE抑制法测定A6、ACV和A6 ACV对HSV1 的MIC分别为 6 2 5mg/ml、5 0 μg/ml和 0 94mg/ml 1 2 5 μg/ml;联合抑制指数的分数(FICI)均小于 0 5 ;显示明显的联合协同抑制作用。结论 :定量PCR是筛选抗病毒药物的有效方法 ;结果还表明A6 和ACV对HSV1 的抑制作用主要表现在病毒增殖周期的复制阶段。  相似文献   
4.
目的 克隆 2型登革病毒E基因并用酵母真核表达 ,获得全长的重组E蛋白 ,为其结构与功能的研究提供条件。方法 从感染DEN2 (NGC株 )后病变的C6 /36细胞上清中提取RNA ,通过RT -PCR扩增E基因片段 ,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒 ,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定 ,取Mut+菌诱导表达 ,SDS -PAGE、免疫印迹检测表达产物。结果 RT -PCR得到 1 5kb的E基因片段 ,酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长E基因 ;Mut+ 酵母转化菌可分泌表达约 6 9kDa的蛋白 ,与DEN2E单抗的免疫印迹证实它为型特异的重组E蛋白。结论 成功将克隆的全长DEN2E基因在酵母菌中表达 ,获得的重组E蛋白具有免疫反应性。  相似文献   
5.
目的 确定严重急性呼吸系统综合征(SARS)病例尸解肺组织和咽嗽液中病原体种类。方法 用超薄切片电镜技术观察广东省传染性非典型肺炎流行早期3例死亡病例尸解肺组织标本,用RT-PCR法扩增尸解肺组织和SARS病人咽嗽液中SARS冠状病毒特异核酸片段,并进行序列测定。结果 在死亡病人肺组织中观察到衣原体的网状体、中间体以及原体颗粒,并见衣原体包涵体样结构;用RT-PCR法在2例尸解肺组织扩增出预期大小的DNA片段,测序后经相似性(BLAST)比较,其与SARS冠状病毒相应基因片段高度同源;用巢式RT-PCR技术在SARS病人咽漱液中扩增出SARS冠状病毒特异基因片段。结论 在SARS尸解肺组织中发现衣原体样颗粒,在尸解肺组织和咽漱液中扩增出SARS冠状病毒核酸片段,说明SARS患者可合并衣原体等微生物混合感染。  相似文献   
6.
鼻咽癌细胞系SUNE中EBV-LMP1基因对上皮细胞增殖的影响   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的研究鼻咽癌细胞系SUNE中EBV┐LMP1基因对上皮细胞增殖的影响,探索LMP1在鼻咽癌发生中所起的作用。方法用LMP1基因真核表达质粒转染人胚肾上皮细胞,检测LMP1的表达,观察细胞在软琼脂中的集落形成能力,MTT吸收能力以及PCNA的表达情况。结果被LMP1基因转染的细胞生长旺盛,能在软琼脂中形成多个集落,MTT吸收能力增强,PCNA的表达水平增高。结论LMP1基因能明显改变上皮细胞的生物学行为,促进细胞的生长、增殖和转化,使转染的上皮细胞获得肿瘤细胞的生长特征。  相似文献   
7.
鼻咽癌细胞SUNE中EBV—LMP1基因对上皮细胞增殖的影响   总被引:4,自引:0,他引:4  
陈宜芳  郭辉玉 《肿瘤》1999,19(1):15-18
目的 研究鼻咽癌细胞系SUNE中EBV-LMP1基因对上皮细胞增殖的影响,探索LMP1在鼻咽癌发生中所起的作用。方法 用LMP1基因真核表达质粒转染人胚肾上皮细胞,检测LMP1的表达,观察细胞在软琼脂中的集落形成能力,MTT吸收能力以及PCNA的表达情况。结果 被LMP1基因转染的细胞生长旺盛,能在软琼脂中形成多个集落,MTT吸收能力增强,PCNA的表达水平增高。结论 LMP1基因能明显改变上皮细  相似文献   
8.
建立斑点免疫结合法(DIA)测定抗体相对亲和力。用此法出定了登革病毒Ⅱ型非结构蛋白NS1四株单克隆抗体(McAbs)的相对亲和力,4株McAbs对NS1的亲和力各不相同。按50%最大结合浓度分析,抗体株6─1/C为0.05μg/ml.1─7/F为0.67μg/ml.5D为25.00μg/ml,3─11/C为57.00μg/ml。以上结果为应用这些单克隆抗体提供了依据。同时,说明用DIA法测定McAb相对亲和力的可行性。  相似文献   
9.
应用一对通用引物同时扩增4个型登革病毒(DEN)的NS1基因部分片段,然后采用嵌套式聚合酶链反应(PCR)方法对DEN进行分型鉴定。通用引物扩增基因序列长度为413bp;DEN各型内引物扩增序列长度分别是:DEN1型为262bp;DEN2型为189bp;DEN3型为392bp;DEN4型为97bp。应用嵌套式PCR法直接分型检测登革热患者血清标本21份,发现DEN1型阳性18份,DEN2型阳性2份。该法能在2d内完成对DEN的分型鉴定,为登革热的早期快速诊断提供了可靠的方法。  相似文献   
10.
用登革病毒免疫Balb/c小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞,经PEG融合处理,共获得90株分泌登革病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。按照单抗质量标准,对杂交瘤细胞进行了严格的鉴定,筛选出19株具有型特异的细胞株,再从中选出4个血清型的型特异的单抗组成诊断盒,可用于登革病毒的准确的鉴定和分型。  相似文献   
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