自身启动子调控miR-7真核表达载体的构建及其意义

目的 构建带有miR-7自身启动子的miR-7重组真核表达载体,研究其对人肺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响.方法 预测miR-7启动子序列,设计含有该序列和miR-7前体序列目的片段的引物,PCR扩增后亚克隆入pGL3.0-Basic载体以构建miR-7自身启动子调控的真核表达载体pGL3.0-Basic-miR-7-promoter(命名为p-miR-7-pro);将所构建载体转染人肺癌95D细胞,Real-time PCR探针法检测95D细胞中miR-7的表达水平;MTT和克隆形成实验分别检测95D细胞的增殖和克隆形成能力;划痕法观察95D细胞体外迁移能力的变化;FACS检测95D细胞的凋亡情况.结果 酶切和测序结果证明成功构建p-miR-7-pro真核表达载体,转染95D细胞后可有效表达miR-7;与对照组相比,p-miR-7-pro转染组95D细胞的体外增殖能力受到明显的抑制(0.60 ±0.03 vs 0.19 ±0.05,P＜0.05);同时其迁移能力也显著降低(473 ±7 vs 99 ±2,P＜0.05);而细胞凋亡则显著增加(9.233 ±0.586％vs 12.967 ±0.643％,P＜0.05).结论 成功构建由自身启动子调控的miR-7真核表达载体,为后续研究miR-7在肺癌基因治疗中的作用提供重要实验基础.     

改良负压封闭引流术在游离皮瓣修复术后供区植皮中的应用

目的:探讨改良负压封闭引流术(vacuum sealing drainage,VSD)在口腔癌患者游离皮瓣修复术后供区植皮中的应用效果.方法:选择50例口腔癌游离皮瓣修复患者,其中30例采用改良VSD法进行供区植皮后处理,20例患者进行常规加压包扎法处理.采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析.结果:改良VS...     

HBVPreS1-Ag、PreS2-Ag及PreS2-Ab联合检测的临床意义

目的探讨HBVPreS1-Ag、PreS2-Ag及PreS2-Ab联合检测HBV感染中的临床意义.方法采用ELISA法对180份血清标本同时进行HBVM、HBVPreS1-Ag、PreS2-Ag及PreS2-Ab检测,并对其结果进行分析.结果HBVPreS1-Ag、PreS2-Ag在HBeAg阳性组中检出率为87.9%,90.9%;在HBsAg阳性组中检出率分别为51.2%,52.4%.HBVPreS1-Ag、PreS2-Ag与HBeAg阳性符合率分别为67.4%,68.2%.180份血清标本中HBVPreS1-Ag、PreS2-Ag分别检出阳性标本43例和44例,两者阳性符合率为95.3%,经X2检验,两者间无差异显著性(P＞0.05).PreS2-Ab检出阳性35例,总体阳性率为19.4%,略低于HBsAg总体阳性率(25%).但是HBsAb阴性组中有11.8%PreS2-Ab阳性.结论HBVPreS1-Ag、PreS2-Ag相关性显著高于与HBsAg相关性.作为反映HBV复制指标HBVPreS1-Ag与HBVPreS2-Ag无显著性差异(P＞0.05)且均优于HBeAg.HBVPreS2-Ab阳转早于HBsAb,可作为反映病毒消除的早期迹象,三者联合检测对全面判断HBV感染后病毒的复制、疗效的评估及预后判断均有非常积极的作用.     

间歇性禁食与肿瘤细胞免疫的研究进展

间歇性禁食(IF)可引起机体能量代谢过程变化,改善健康状态并影响多种疾病的进程。新近研究显示,间歇性禁食能改变肿瘤细胞能量代谢,抑制其生长并影响机体肿瘤细胞免疫应答。此外,抗PD-1单抗为代表的免疫检查点抑制剂(ICB)疗法会改善肿瘤微环境中T细胞的葡萄糖利用率,提示IF与ICB联合使用在临床肿瘤免疫治疗中具有潜在的应用前景。本文综述了IF与肿瘤细胞免疫的相关研究进展并讨论了仍待阐明的科学问题,以期为IF在临床肿瘤免疫治疗中的应用提供帮助。     

miR-7敲减CD4~+ T细胞过继转输对小鼠急性肝损伤模型的影响

目的:观察过继转输微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)敲减(knockdown,KD)CD4~+ T细胞对小鼠急性肝损伤模型的影响,并探讨其意义。方法:利用磁珠分选技术分别获得正常野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠脾脏中CD4~+ CD62L~+ T细胞;CFSE染色标记后,按每只小鼠2×10~6个细胞,经尾部静脉注射给同系WT小鼠,并利用伴刀豆球蛋白A建立急性肝损伤模型;观察过继转输后2组小鼠肝脏的形态、重量及其重量指数的变化;HE染色观察小鼠肝脏组织的病理学变化;real-time PCR检测小鼠肝脏组织中凋亡相关分子Bax和P53的表达;流式细胞术检测小鼠肝脏组织中CFSE标记的CD4~+ T细胞活化相关膜分子CD62L表达水平以及细胞因子白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)的表达变化。结果:与对照组相比,过继转输miR-7KD小鼠CD4~+ CD62L~+ T细胞组(miR-7KD转输组)小鼠的肝脏重量明显减轻(P0.01),但重量指数显著增加(P0.05);HE染色显示miR-7KD转输组的肝脏细胞损伤增加;real-time PCR结果显示miR-7KD转输组肝脏组织中凋亡相关细胞分子Bax和P53的相对表达水平均明显升高(P0.05);流式细胞术检测结果进一步显示肝脏组织中的CFSE~+细胞活化相关分子CD62L的表达水平明显降低(P0.01),细胞因子IFN-γ的表达水平明显增加(P0.05),而IL-4的表达水平显著降低(P0.01)。结论:过继转输miR-7敲减CD4~+ T细胞可显著加重急性肝损伤模型小鼠的肝组织损伤。这为后续深入探讨急性肝损伤的发生机制提供了重要的实验基础。     

乙型肝炎病毒前S2抗原抗体系统检测的临床意义

目的探讨前S2抗原抗体系统检测的临床意义.方法采用ELISA法对92例标本进行HBVM和PreS2-Ag及PreS2-Ab检测,将其结果的相关性进行分析.结果PreS2-Ag在HBsAg阳性组、HBeAg阳性组的检出率分别为64.71%、96.97%,均明显高于其在对应阴性组中的检出率(P＜0.01);PreS2Ag与HBsAg、HBeAg的符合率分别为73.91%、85.87%,PreS2-Ag的阳性率低于HBsAg的阳性率但高于HBeAg的阳性率,PreS2-Ag与HBsAg、HBeAg的总体检出率间均关联显著(P＜0.01),PreS2-Ag与HBeAg的不一致部分相差显著(P＜0.01),表明PreS2-Ag与HBsAg、HBeAg均高度相关,PreS2-Ag优于HBeAg.PreS2-Ab在HBeAb阳性组中的检出率(72.22%)明显高于在HBeAb阴性组中的检出率(23.21%)(P＜0.01),PreS2-Ab与HBeAb符合率为75%,二者之间差异无显著性(P＞0.05),说明PreS2-Ab与HBeAb总体上具有一定平行关系.结论PreS2-Ag是HBV感染、复制的敏感指标,且优于HBeAg;PreS2-Ag与PreS2-Ab的连续监测对HBV感染与复制的判断和抗病毒疗效及病情预后的动态观察有重要意义.     

盐水稀酸稀碱三步法在白带检查中的应用分析

目的：了解白带生理盐水稀酸稀碱三步法（下简称＂三步法＂）在妇科检查中的作用及其优越性。方法：2011年11月22日-2012年1月20日（共60d）每天取有外阴瘙痒症状的白带患者9例,分别进行生理盐水涂片法、三步法、革兰氏染色法检验,比较三种方法霉菌、滴虫的检出率。结果：540例标本中生理盐水涂片法检出霉菌212例、滴虫18例,阳性率42.6%;三步法检出霉菌399例、滴虫21例,阳性率77.8%;革兰氏染色法检出霉菌375例、滴虫15例,阳性率72.2%。结论：盐水稀酸稀碱三步法比盐水涂片法和革兰氏染色法更能提高霉菌、滴虫的检出率,值得临床推广使用。     

miRNA-126 基因敲减小鼠脾脏中免疫细胞的组成变化

目的:观察miRNA-126基因敲减(Knock down,KD)小鼠脾脏中免疫细胞组成比例变化并探讨其意义。方法:Realtime PCR探针法检测miR-126KD小鼠脾脏中miR-126表达水平,计算脾脏总细胞数;HE染色观察脾脏组织的病理学变化;流式细胞术(FACS)分别检测脾脏中DCs细胞、巨噬细胞、γδT细胞、NKT细胞,CD3~+T细胞和其亚群以及CD19~+B细胞的比例并计算细胞绝对数;免疫印迹法(Western blot,WB)检测脾脏组织中磷酸化NF-κB和磷酸化Akt的表达水平。结果:与野生型(WT)小鼠相比,miR-126KD脾组织中miR-126表达水平明显降低(P0.05),细胞总数明显增加(P0.05),且发生明显病理学改变;固有免疫细胞中NK细胞的比例和细胞绝对数显著增加(P0.05),但巨噬细胞的比例显著降低(P0.05);适应性免疫细胞中CD3~+T细胞和CD4~+T细胞的比例和绝对细胞数都显著增加(P0.05),而CD19~+B细胞仅绝对数显著增加(P0.05);最后miRNA-126KD小鼠脾脏组织的磷酸化NF-κB和磷酸化Akt水平明显增加(P0.05)。结论:miRNA-126敲减小鼠脾脏中各免疫细胞亚群的组成发生明显改变,可能与NF-κB和Akt信号通路传递变化有关,为后续探讨miR-126在机体免疫应答中的作用提供了前期实验基础。     

产后出血采用米索前列醇联合缩宫素防治效果分析

目的探讨产后出血采用米索前列醇联合缩宫素防治的效果。方法选取该院在2010年10月—2013年01月收治的160例产后出血患者随机分为对照组和治疗组,对照组患者单独使用缩宫素治疗,治疗组患者使用米索前列醇联合缩宫素治疗。结果两组患者在30min和2h的出血量、第三产程的时间以及产后出血率上均存在显著差异性,具有统计学意义（P〈0.05）;两组患者均没有出现严重的不良反应。结论产后出血采用米索前列醇联合缩宫素进行治疗的临床效果显著,值得广泛推广和使用。