快速提取人周围血细胞线粒体DNA及其纯化方法的研究

目的 探讨并建立快速分离纯化人周围血细胞线粒体DNA(mtDNA)的方法.方法 收集抗凝周围血,首先使用溶血素破碎红细胞,离心收集并裂解白细胞,去除细胞膜和核DNA后获得mtDNA;再经过去除蛋白质和RNA,提纯mtDNA,核酸定量仪定量测定,凝胶电泳检测.结果 本方法能够得到无蛋白质及核DNA污染,纯度较高的mtDNA样品.结论 本研究中建立的快速分离周围血细胞mtDNA的方法,能够快速,可靠地提取较高纯度的mtDNA,可用于线粒体的相关研究中.     

137Csγ射线慢性照射诱导大鼠外周血GADD45A基因表达变化的研究

目的 探讨长期慢性照射条件下辐射诱导的大鼠外周血GADD45 A基因的表达变化.方法 将SD大鼠置于137 Cs放射源下累积照射,吸收剂量分别为0.05、0.1、0.2 、0.4 、0.6 、0.8 、1、2、3 、4和5Gy,照射完成组禁食2h后腹主动脉采血,利用实时荧光定量PCR检测外周血GADD45 A基因的表达...     

60Co γ射线诱发人正常肝细胞HL-7702 HAVCR2和MXR7基因表达变化研究

目的 探讨电离辐射诱导人正常肝细胞HL-7702甲型肝炎病毒受体2(HAVCR2)和MXR7基因的表达变化,为寻找辐射致肝脏损伤早期诊断标志物提供实验依据.方法 将对数生长期的人正常肝细胞HL-7702分为10组,利用中国辐射防护研究院钴-60(60Co)照射装置对各组肝细胞照射,吸收剂量率为1.29 Gy/min,吸收剂量分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 Gy,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测肝细胞HL-7702 HAVCR2和MXR7基因的变化,分析剂量-反应关系.结果 HAVCR2基因表达在照射后4、24 h总体上调;其中,0.2～0.8 Gy剂量组在照射后24 h基因相对表达量与照射剂量具有很好的剂量-反应关系,满足回归方程:y=0.14x2-0.48x+ 1.34;1.0～3.0Gy剂量组在照射后24 h,基因相对表达量与照射剂量呈现很好的剂量-反应关系,满足回归方程:y=0.44x+0.56.MXR7基因表达在照射后4、24 h较对照组显示出明显差异;其中,0.2～0.8 Gy剂量组MXR7基因表达在照射后4h与对照组相比总体上调,但随照射剂量增大,上调幅度降低;照射后24h,其基因表达未见明显规律;1.0～5.0 Gy剂量组MXR7基因表达在照射后24 h整体上调,且基因的表达与照射剂量呈现一定的剂量相关性,满足方程为y=0.57x+0.43.结论 电离辐射可以诱导人正常肝细胞HL-7702 HAVCR2和MXR7基因的差异表达,且基因表达与照射剂量存在一定的剂量相关性.     

电离辐射诱导人外周血线粒体DNA4977 bp缺失的初步定量PCR分析

目的 观察不同剂量γ射线对人外周血线粒体DNA4977bp缺失的影响,探索线粒体DNA4977bp缺失作为生物剂量计的可行性。方法 采集3名健康人外周血进行离体照射,利用荧光定量PCR技术,检测射线照射后外周血细胞中线粒体DNA4977bp缺失的发生情况。结果 发现0~8Gy范围内,随着剂量的增加mtDNA49bp相对缺失量有增加的趋势,使用Origin7.5统计软件进行拟合,建立了以人血细胞mtDNA4977bp缺失为指标的剂量效应关系曲线方程Y=1.2693+1.0660X+0.0198X²。结论 不同剂量γ射线对人外周血线粒体DNA4977bp缺失的有一定的影响,且线粒体DNA4977bp与受照剂量有一定的效应关系,因此,线粒体DNA4977bp缺失在生物剂量估算中具有潜在的应用价值。     

单细胞凝胶电泳技术用于估算大剂量电离辐射的初步探索

目的：初步探索碱性单细胞凝胶电泳（single cell gel electrophoresis,SCGE）方法用于大剂量电离辐射生物剂量估算的可行性。方法：用不同剂量水平（0～16Gy）的60Coγ线照射正常人离体外周血,分别于照射后即刻和1 h后进行SCGE检测,用CASP软件分析血细胞＂彗星＂尾矩（tailmoment,TM）,建立剂量-效应曲线。结果：外周血细胞＂彗星＂尾矩随着照射剂量的增加而增加。以＂彗星＂尾矩为指标,使用统计软件Origin 7.5进行拟合,受照即刻在0～16 Gy剂量范围内彗星TM值与受照剂量D之间的剂量-效应曲线为曲线模式,曲线方程为Y=0.836 7＋0.530 9D＋0.079 9D2（R2=0.996 2,P〈0.05）,而0～8Gy剂量范围内剂量-效应曲线为线性模式,直线方程为Y=0.400 3＋1.129 1D（R2=0.996 3,P〈0.05）。受照1h后0～16Gy剂量范围内,彗星TM值与受照剂量D之间的关系曲线为Y=0.461 6＋0.6560D＋0.062 1D2（R2=0.9984,P〈0.05）,0～8 Gy剂量范围内的关系曲线为Y=0.107 1＋1.128 3D（R2=0.999 5,P〈0.05）。结论：用碱性SCGE分析淋巴细胞＂彗星＂尾矩有望成为一种估算大剂量电离辐射的生物剂量计。     

单次60Co γ射线照射致大鼠尿液代谢谱变化及其时间相关性

目的：探讨γ射线单次照射对大鼠尿液代谢物的影响,初步筛选与γ辐射损伤密切相关的尿代谢物。方法：15只成年雄性SD大鼠接受60Coγ线单次全身照射,剂量6.0 Gy,剂量率0.7 Gy/min。照射前1 d及照射后第1、2、3、4、8、18、30、45 d分别收集大鼠尿液。检测尿样1H NMR谱,对1H NMR谱数据进行主成分分析（PCA）和偏最小二乘判别分析（PLS-DA）,寻找对照射后各时间点1H NMR谱与照射前1H NMR谱差异均有较大贡献并且变化趋势一致的差异代谢物（简称共同差异代谢物）,分析这些代谢物相对含量变化与照后时间的相关性。结果：60Coγ线照射可造成大鼠尿液1H NMR谱明显变化。对照后1～45 d大鼠尿液1H NMR谱变化贡献较大的共同差异代谢物有牛磺酸、氮氧化三甲胺、脯氨酸、肌苷、柠檬酸盐、琥珀酸盐、醋酸盐和乳酸盐。照后1～45d,脯氨酸和牛磺酸相对含量均比照射前明显升高,柠檬酸盐、琥珀酸盐相对含量均比照射前降低;而三甲胺氮氧化物、醋酸盐和乳酸盐相对含量则呈现先升高（照后1 d）后下降（照后2～45 d）趋势。结论：大剂量γ射线照射造成的大鼠机体代谢紊乱在照射后45 d仍未得到完全恢复,表现为受照大鼠尿中代谢物牛磺酸、脯氨酸、肌苷、柠檬酸、琥珀酸、醋酸盐和乳酸盐相对含量的持续变化。牛磺酸、脯氨酸有望成为大剂量急性辐射损伤的组合代谢标记物。     

不同剂量γ射线诱发MDM2基因表达初步研究

目的 观察电离辐射对离体人周围血白细胞中MDM2基因表达的影响.方法 采集了3名健康人周围血进行60Co γ射线照射,提取白细胞总RNA,以β-actin作为内对照基因,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative pol-ymerase chain reaction,qPCR)方法探索辐照后MDM2表达的剂量一效应关系.结果 0～2 Gy剂量范围内,MDM2的mRNA相对表达水平随照射剂量增加而上调,通过拟合建立了0～2 Gy剂量范围内MDM2/β-actin相对表达量与照射荆量间的剂量-效应直线方程(γ=1.366 4+1.112 0x,P<0.001,相关指数=0.90).结论 电离辐射可以诱发MDM2基因表达发生改变,在0～2 Gy范国内MDM2的mRNA相对表达水平随照射剂量增加而明显上调.     

^60Coγ射线诱发人外周血GADD45A基因表达的变化研究

目的探讨电离辐射诱导人外周血GADD45A基因的表达变化,为寻找急性照射条件下辐射损伤早期诊断标志物提供实验依据。方法采集无急慢性疾病、不抽烟、年龄在26～29周岁的3名男性非放射性工作者外周血各10ml,分为10组,每组1ml。利用中国辐射防护研究院。^60Co照射装置对采集的血样分组照射,剂量率为0．313Gy／min。吸收剂量分别为0．05、0．1、0．2、0．4、0．6、0．8、1、2和3Gy,照射后的人外周血于37℃培养箱中静置2h后提取RNA,利用实时荧光定量PCR技术对外周血GADIM5A基因进行检测。结果实时荧光定量PCR检测结果表明各剂量组与对照组相比,其基因表达均有显著变化。0．05～0．6Gy剂量组与对照组相比基因表达下调,其中0．05～0．2Gy之间,随着照射剂量的增加,基因表达量逐渐降低;0．2～0．6Gy之间,随着照射剂量的增加基因表达量又逐渐增加。0．8Gy时,基因表达量增幅较大,高于对照组和1Gy剂量组。1～3Gy剂量组基因表达量均高于对照组,且随着剂量增大,表达量增加,具有明显剂量相关性。结论电离辐射可以诱导人外周血GADD45A基因的差异表达,1～3Gy之间具有明显剂量相关性。0．05～0．2Gy之间外周血淋巴细胞表现出辐射刺激效应。