m6A修饰调控的LDB2抑制肺腺癌细胞增殖

目的研究LIM域结合蛋白2（LDB2）在肺腺癌中的表达模式及作用。方法从mRNA和蛋白表达数据库中分析在肺腺癌中表达下调基因的交集。通过qRT-PCR、Western blot和免疫组化的方法验证LDB2在肺腺癌中的表达模式。在GEO和TCGA数据库中分析LDB2与肺腺癌患者预后的相关性。在H1299细胞中过表达LDB2，通过细胞计数实验、软琼脂克隆实验及流式细胞术证明LDB2在肺腺癌中的作用。生信预测结合后期MeRIP-qPCR实验证实LDB2转录本上存在m⁶A结合位点。通过qRT-PCR和Western blot实验检测YTHDC2对LDB2的转录调控。RIP实验验证YTHDC2能否与LDB2转录本结合。结果通过分析TCGA、GEO及CPTAC 3个数据集中在肺腺癌中低表达的差异基因，最终聚焦于LDB2基因。免疫组化结果证实该基因在80例肺腺癌组织中的表达量也显著低于17例正常癌旁组织的表达量。与正常肺上皮细胞16HBE相比，LDB2在肺腺癌细胞中的表达量亦明显降低。生信分析提示高表达的LDB2与肺腺癌患者良好的预后正相关。在H1299细胞中过表达LDB2后，发现LDB2可诱导H1299细胞发生S期阻滞，从而抑制该细胞的增殖能力和软琼脂克隆形成能力。生信预测结合后期MeRIPqPCR实验证实LDB2转录本上存在m⁶A位点。GEPIA数据库提示YTHDC2在肺腺癌组织中低表达，且与LDB2在肺腺癌中表达正相关（r=0.22，P < 0.0001）。在H1299细胞中过表达YTHDC2，可明显增加LDB2的表达。最后，在过表达YTHDC2的H1299细胞中开展RIP实验，定量结果显示LDB2在YTHDC2组的含量是其在IgG组含量的19.35倍，YTHDC2可结合在LDB2转录本上调控其表达。双荧光素酶报告基因实验证实YTHDC2可上调野生型而不是缺失型报告基因载体活性。结论m⁶A编码器YTHDC2在肺腺癌中上调LDB2的表达。过表达LDB2可明显诱导肺腺癌细胞发生S期阻滞，抑制肺腺癌细胞增殖能力。     

微小RNA-218在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的:检测微小RNA-218(microRNA-218,miR-218)在鼻咽癌组织中的表达情况,并探讨其临床意义.方法:收集鼻咽癌活检组织标本54例,同时以35例正常及慢性炎性反应鼻咽黏膜活检组织作为对照,采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RFQ-PCR)法检测鼻咽癌组织及对照组织中miR-218的表达情况,分析miR-218表达水平与鼻咽癌临床病理参数之间的关系,以及与患者预后的关系.结果:与对照鼻咽黏膜组织相比,miR-218在鼻咽癌组织中的表达水平普遍下调.鼻咽癌组织中miR-218平均表达量明显低于对照鼻咽上皮组织,差异有统计学意义(P=0.000).miR-218表达水平在低分化鼻咽癌组织明显低于高/中分化鼻咽癌(P=0.032),临床Ⅲ/Ⅳ期鼻咽癌组织明显低于临床Ⅰ/Ⅱ期鼻咽癌(P=0.007),有转移的鼻咽癌组织明显低于无淋巴结转移的鼻咽癌(P=0.019).Kaplan-Meier生存分析发现,miR-218表达水平越高,患者生存时间越长(P＜0.05).结论:miR-218与鼻咽癌的发生、临床进展及预后密切相关,它可能成为鼻咽癌新的潜在的治疗靶点及诊断预后分子标志物.     

miR-216b通过靶向调控蛋白激酶Cα基因的表达抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭

目的 明确miR-216b是否通过靶向调控蛋白激酶Cα(PKCα)基因的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭.方法 构建PKCα 3'非编码区(UTR)-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告系统检测miR-216b对PKCα 3'UTR-荧光素酶活性的影响.将miR-216b模拟物转染鼻咽癌细胞CNE2,采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测PKCα mRNA和蛋白的表达水平.将PKCαsiRNA转染CNE2细胞,通过MTS细胞增殖实验和Transwell侵袭实验观察PKCα基因表达下调对CNE2细胞增殖和侵袭的影响.将PKCα重组质粒与miR-216b模拟物共转染CNE2细胞,通过MTS细胞增殖实验检测CNE2细胞的增殖能力.结果 双荧光素酶报告检测结果显示,miR-216b能特异性地与PKCα mRNA的3'UTR结合,下调荧光素酶活性,其活性约为转染对照模拟物细胞的62.4％.过表达miR-216b的CNE2细胞中PKCα mRNA和蛋白的表达水平均降低,与对照细胞比较,分别降低49.1％和55.7％.siRNA干扰PKCα表达能抑制CNE2细胞的增殖和侵袭能力,能部分模拟miR-216b的抑瘤功能.过表达PKCα能部分逆转miR-216b对CNE2细胞的增殖抑制作用.结论 miR-216b通过靶向调控PKCα基因的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭.     

平阳霉素诱导的人舌癌多药耐药相关蛋白质表达谱的建立

目的:建立平阳霉素(pingyangmycin,PYM)诱导的人舌癌多药耐药相关蛋白质表达谱。方法:以前期本室通过用PYM浓度梯度诱导法建立的舌癌PYM多药耐药细胞Tca8113/PYM与其亲本细胞Tca8113为模型,用四甲基偶氮唑盐法检测该耐药细胞株的多药耐药性,运用比较蛋白质组学方法筛选耐药细胞与其亲本细胞中的差异蛋白质表达,并对部分差异蛋白质表达进行实时定量PCR及Western免疫印迹验证。结果:目前Tca8113/PYM细胞对PYM的耐药性约是Tca8113细胞的20倍,同时表现出对顺铂、紫杉醇、丝裂霉素C、四氢吡喃阿霉素和阿霉素存在交叉耐药;比较蛋白质组学筛选了18种差异表达蛋白质,其中在Tca8113/PYM细胞中表达上调的有13种,下调的有5种,实时荧光定量PCR与Western免疫印迹结果与蛋白质组学的结果趋势一致。结论:建立了舌癌PYM耐药相关蛋白质表达谱,为深入研究舌癌多药耐药的分子机制提供了新线索。     

miR-205通过靶向调控TBX18抑制神经胶质瘤细胞的侵袭能力

目的:探讨微小RNA-205(miR-205)在神经胶质瘤组织中的表达模式及其在胶质瘤细胞侵袭中的作用及可能机制。方法:用real-time PCR检测配对神经胶质瘤组织中miR-205的表达,同时用免疫组化方法检测配对组织中TBX18蛋白的表达量;用脂质体将miR-205模拟物(miR-205 mimics)、miR-205抑制物(miR-205 inhibitor)以及相应对照(control)导入U251胶质瘤细胞后,Transwell实验检测细胞的侵袭能力变化;生物信息学分析结合萤光素酶报告基因实验观察miR-205对TBX18的靶向调控作用;采用RNA干扰技术下调U251细胞中TBX18的表达,用Transwell实验检测细胞侵袭能力变化。结果:miR-205在82.6%所检测的神经胶质瘤组织中表达下调,而TBX18在神经胶质瘤组织中表达上调,两者表达呈负相关;过表达miR-205使U251细胞的侵袭细胞数下降(P0.01),抑制miR-205表达后U251侵袭细胞数增加(P0.01);miR-205在U251胶质瘤细胞中能直接靶向抑制TBX18的表达,干扰TBX18的表达亦使U251细胞的侵袭细胞数下降(P0.01)。结论:miR-205在神经胶质瘤中表达下调,miR-205可能通过靶向调控TBX18影响胶质瘤细胞的侵袭能力,这将为完善胶质瘤侵袭的分子机制及开发新治疗策略以提高胶质瘤治疗效果提供有力的理论依据。     

TCRP1通过PI3k-Akt途径介导口腔鳞癌顺铂化学治疗耐受

目的:研究新的耐药相关基因TCRP1在口腔鳞癌组织中的表达及其与顺铂临床疗效的关系,同时对TCRP1的作用机制进行初步探索。方法:采用免疫组织化学法检测TCRP1在舌癌组织中的表达及其与临床顺铂化学治疗疗效之间及体外药敏实验的相关性,Western印迹法及免疫共沉淀甄别TCRP1下游的作用分子。结果:在TCRP1低表达的患者中,缓解率达84.62%,而高表达患者组中缓解率为37.5%。体外药敏结果显示类似的结果。TCRP1表达改变影响Akt信号通路分子的表达,而且TCRP1与Akt存在物理上的相互结合。结论:TCRP1的表达影响口腔鳞癌的顺铂化学治疗疗效。TCRP1介导顺铂耐药的作用机制至少部分与TCRP1对Akt信号通路调节有关。     

PIK3CA在不同鼻咽癌细胞株中的表达及其与放射敏感性的关系

放射治疗是鼻咽癌的主要治疗手段,而相对放射抵抗的亚细胞系残存并增殖,成为复发的根源.临床实践表明,即使是同一病理类型的鼻咽癌患者对放射线的敏感性也不同,对于不同的鼻咽癌患者的治疗需要放疗的个体化.因此,发现预测鼻咽癌放射敏感性相关分子标志物,对指导鼻咽癌个体化治疗和改善其预后具有重要的意义.     

Wnt信号通路转录上调EGFR促进非小细胞肺癌 吉非替尼耐药

目的 探讨Wnt信号通路和表皮生长因子受体（EGFR）在非小细胞肺癌（NSCLC）吉非替尼耐药中的作用 及其机制。方法 运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和免疫印迹实验（Western blot）检测EGFR在亲代HCC827细 胞与吉非替尼耐药细胞（HCC827/R）中的表达;免疫组化染色检测耐药前后3对NSCLC肿瘤组织中EGFR的表达。 双荧光素酶报告基因实验（Luciferase）检测亲代 HCC827 细胞与耐药 HCC827/R 细胞 Wnt 信号通路活化情况;在 Jaspar数据库中预测EGFR基因启动子区上TCF/LEF转录因子结合位点;染色质免疫共沉淀实验（Chip）和Luciferase 实验检测转录因子对基因表达的调控;功能阻断实验检测Wnt信号通路/EGFR途径介导吉非替尼耐药的作用。结 果 与亲代HCC827细胞相比较,HCC827/R细胞的EGFR在mRNA和蛋白水平表达均明显增高（P＜0.05）。免疫组 化染色结果显示在 3 例吉非替尼耐药前后 NSCLC 配对肿瘤组织样品中有 2 例耐药后 EGFR 表达较耐药前增加。 Luciferase实验结果显示,与亲代细胞比较,Wnt/β-catenin信号通路在耐药HCC827/R细胞中异常活化（P＜0.05）。生 物信息学分析预测到EGFR基因启动子区-1476~-1468区域存在Wnt/β-catenin信号通路下游转录因子TCF3/TCF4 结合位点,Chip和Luciferase实验证实Wnt/β-catenin信号通路可转录上调EGFR表达。功能阻断实验结果显示当利 用Wnt3a刺激亲代HCC827细胞的同时敲低EGFR,吉非替尼对细胞的抑制率较单独利用Wnt3a刺激细胞时的细胞 抑制率得到恢复（P＜0.05）。结论 Wnt/β-catenin信号通路转录上调EGFR促进NSCLC的吉非替尼耐药,其为提高 NSCLC吉非替尼靶向治疗效果提供了新的实验依据。     

他尼氟酯诱导乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨黏蛋白调节剂他尼氟酯(Talniflumate)对乳腺癌细胞的作用及其与化疗药紫杉醇联用后的协同效应。方法:体外培养乳腺癌细胞。采用淋巴细胞增殖活性检测(MTS)法检测不同浓度Talniflumate单独和联用紫杉醇对乳腺癌细胞存活率的影响,流式细胞术检测上述用药对乳腺癌细胞凋亡的影响。Western blo...     

α-烯醇化酶在舌鳞状细胞癌患者顺铂化疗耐药中的作用及其临床意义

目的探讨α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)在舌鳞状细胞癌患者顺铂化疗耐药中的作用,及其与临床病理特征、预后的关系。方法选取接受过顺铂化疗的舌鳞状细胞癌患者石蜡标本87例,用免疫组化法检测舌鳞状细胞癌细胞中ENO1蛋白表达变化,分析ENO1表达与其临床病理特征的关系。对所有患者进行随访,采用Kaplan-Meier进行生存分析。结果顺铂处理后,舌鳞状细胞癌各细胞系中ENO1蛋白表达水平均升高。ENO1高表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移及复发相关(P <0. 05),与患者年龄、性别及分化程度无相关性(P> 0. 05);Kaplan-Meier生存分析显示,ENO1高表达患者的平均生存时间短于ENO1低表达患者(P <0. 05)。结论顺铂化疗诱导了舌鳞状细胞癌ENO1蛋白表达上调,升高的ENO1水平提示患者顺铂耐药、预后不良,这可以为临床使用顺铂提供重要的用药指导。