人组织中大肠癌负相关基因ST13的蛋白表达研究

目的原核表达大肠癌负相关基因ST13，制备ST13蛋白单克隆抗体，研究人大肠等组织中表达的ST13蛋白的生物学特性。方法将ST13 ORF克隆至GST融合蛋白表达质粒，原核表达并以Glutathione纯化GST—ST13蛋白，以凝血酶切得到ST13蛋白。以GST-ST13融合蛋白免疫小鼠，以ST13蛋白筛选杂交瘤细胞株，按杂交瘤技术制备ST13蛋白单克隆抗体，并以ST13蛋白亲和层析纯化单抗。以该单抗作Western—blot及免疫组化检测临床标本。结果蛋白表达和纯化以SDS-PAGE证实。融合蛋白表达量占大肠杆菌总蛋白20％，每升培养物回收融合蛋白2．5mg，纯度为91．3％。建立了3个ST13蛋白单抗的杂交瘤细胞株，腹水中单抗的ELISA效价达10^4-10^5，并具有对ST13蛋白的高度特异性。Western—blot证实组织细胞中天然ST13蛋白的SDS—PAGE表观分子量约50KD，比其计算分子量大约10KD，但无糖基化修饰。免疫组化表明该蛋白均匀分布于SW480细胞及大肠上皮细胞浆，计算机分析系亲水性分子。免疫组化还表明该蛋白可表达于大肠、胃及肝等多种组织上皮，但在各种正常组织和肿瘤组织之间，正常组织之间，以及肿瘤组织之间的的着色强度不一。结论原核表达了ST13蛋白，制备了相应的单抗，建立了检测组织标本中ST13蛋白的方法。研究表明人组织ST13蛋白系表观分子量50KD的细胞浆可溶性分子，可表达于大肠等多种上皮组织。ST13蛋白在大肠癌组织呈低表达，在多种正常和肿瘤组织中的表达程度不一。cDNA同源性及蛋白质特性比较表明ST13与Hip(hsp70-interacting protein)为同一蛋白质，提示ST13／Hip经Hsp70等分子伴侣途径而在大肠癌发生发展中起作用。     

打造与国际接轨的PBL医学教育评价系统

在基于问题的学习（PBL）教学过程中，评价系统发挥着举足轻重的作用，指引着PBL教学成功的方向。文章将介绍浙江大学医学部八年制临床医学专业PBL教育模式现行使用的评价系统，并对评价的特点、应用、内容与目标进行分析，以飨同行。     

环境理化因素对表皮生长因子受体及其信号通路的影响

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）为典型的受体酪氨酸激酶,能够与多种配体结合,在细胞增殖、存活、黏附、分化和凋亡等生命活动中发挥重要作用。EGFR及其介导的信号通路的异常与肿瘤的发生发展密切相关。很多环境理化因素可通过影响EGFR磷酸化、或其结构功能和细胞分布、或其配体和其它相关分子表达,干预EGFR信号转导过程、影响靶基因的表达从而最终影响细胞生命活动。文中就此做一简要综述,以期更好地理解环境理化因素引起的细胞应激以及致突变致癌的表遗传分子机理。     

胃癌细胞凋亡与p53蛋白异常相关性研究

采用ＤＮＡ末端转移酶介导的Ｂｉｏ－ｄＵＴＰ原位末端标记技术（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学技术，分别对６０例胃癌标本的细胞凋亡和ｐ５３蛋白异常作同步研究和相关性分析。结果在６０例胃癌组织中细胞凋亡指数为１．８％～１９．４％（平均９．３±３．９％），ｐ５３蛋白异常表达率为６３．３％（３８／６０）；ｐ５３蛋白阳性组细胞凋亡指数为３．７±１．１％（１．８％～７．９％），而ｐ５３蛋白阴性组细胞凋亡指数１４．７±２．４％（７．４％～１９．４％），两组间有显著性差异。结果表明胃癌中存在较高频率的ｐ５３蛋白异常和细胞凋亡，ｐ５３蛋白异常与胃癌细胞凋亡间存在着负相关性     

T淋巴细胞功能分子——TSP-1

T细胞能释放多种淋巴因子参与免疫反应。近年,众多资料表明,激活的T细胞还可分泌一种存在于其胞浆颗粒内的丝氨酸蛋白酶而发挥作用。1986年,Pasternack、Masson、Young和Simon等相继从溶细胞性T淋巴细胞系(CTLL)提     

PCR和核酸杂交技术检测性罪错妇女宫颈沙眼衣原体感染

ＰＣＲ和核酸杂交技术检测性罪错妇女宫颈沙眼衣原体感染蔡挺，邵吉民，周琳，郑巧形浙江医科大学（邮政编码３１００３１）我们采集性罪错妇女宫颈细胞，用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合生物素化寡核苷酸探针检测沙眼衣原体ＤＮＡ，同时分离培养淋球菌，以探讨衣原体感染在...     

环境理化因素对表皮生长因子受体及其信号通路的影响

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)为典型的受体酪氨酸激酶,能够与多种配体结合,在细胞增殖、存活、黏附、分化和凋亡等生命活动中发挥重要作用.EGFR及其介导的信号通路的异常与肿瘤的发生发展密切相关.很多环境理化因素可通过影响EGFR磷酸化、或其结构功能和细胞分布、或其配体和其它相关分子表达,干预EGFR信号转导过程、影响靶基因的表达从而最终影响细胞生命活动.文中就此做一简要综述,以期更好地理解环境理化因素引起的细胞应激以及致突变致癌的表遗传分子机理.     

浙江大学基础医学国家理科基地本科生人才培养浅析

浙江大学基础医学理科基地自1996年试办至今在理科基地人才培养方面,始终坚持人才培养的目标和思路,不断在生源、培养模式、师资队伍、教学设施、实习基地等方面为培养高质量的理科基地学生创造优良的条件,取得了良好的成绩,培养出一批又一批优秀的基础医学理科基地毕业生.     

大肠癌相关基因ST13的原核表达及鉴定

目的：原核表达大肠癌相关基因ST13,并予以鉴定。方法：将ST13cDNA经PCR扩增和亚克隆,与GST原核表达载体pGEX-4T-2重组,转化E.coli INVαF′菌表达,经Glutathione Sepharose 4B亲和层析GST-ST13融合蛋白,再以凝血酶切得到ST13蛋白。结果：限制性酶切和NDA测序表明,ST13cDNA ORF正确克隆于pGEX-4T-2多克隆位点。经IPTG诱导表达 的GST-ST13融合蛋白主要存在于可溶性上清,表达量占大肠杆菌总蛋白20%,经亲和层析,每升诱导菌回收融合蛋白2.5mg,纯度为91.3%,Western-blot证实,原核表达的ST13蛋白、细胞中天然ST13蛋白的10%SDS-PAGE表观分子量,约50kD。结论：成功构建了ST13基因原核表达质粒,并大量表达和纯化了ST13蛋白。     

沙眼衣原体外膜主蛋白研究进展(综述)

衣原体属包括3个种,即沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, Ct)、鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体.Ct不仅可引起眼部感染,且系性传播疾病的重要病原体.迄