肺癌放射抗性细胞系构建及生物行为研究

目的 构建肺癌放射抗性细胞系, 观察细胞在形态、凋亡、侵袭迁移能力和上皮间质转化的改变。方法 采用小剂量等分割照射法、亚致死剂量照射法及梯度递增照射法筛选肺癌A549和H1299放射抗性细胞系, 显微镜下观察细胞形态学改变, 克隆形成实验检测放射敏感性, CCK-8法检测细胞受照后存活率;流式细胞仪检测凋亡率;Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力的变化;蛋白印迹法检测上皮间质转化标志蛋白表达。结果 梯度递增照射法构建肺癌放射抗性细胞系可行性好, 得到放射抗性细胞A549R和H1299R, 形态学观察示放射抗性细胞向间质细胞形态转变。分别以A549和H1299细胞为对照, A549R和H1299R细胞D₀、D_q、SF₂增加(P=0.017和0.033、0.001和0.000、0.000和0.008), α和α/β值减少(P=0.018和0.001、0.007和0.009)。A549R和H1299R细胞在不同照射剂量下存活率均大于对照组(P值均<0.05), 受照后凋亡率降低(P=0.02和0.01), 侵袭率及迁徙率增高(P=0.000和0.001及0.001和0.002), E-钙黏蛋白表达下调和波形蛋白表达增高(P=0.00和0.01及P=0.02和0.01)。结论 成功构建肺癌放射抗性细胞系, 其侵袭迁移能力增强, 并且可能与上皮间质转化有关系。     

构建STK11基因融合质粒检测其对肺癌细胞迁移能力的影响

目的 构建表达STK11（serine/threonine kinase 11,STK11）基因和报告基因EGFP融合蛋 白的重组质粒,并转染肺癌A549和H460细胞株,检测其对肺癌细胞迁移能力的影响。方法 构建重 组质粒pEGFP-STK11,双酶切和测序进行鉴定。重组质粒转染A549和H460细胞株,荧光显微镜观察 EGFP蛋白表达情况,Western blot检测STK11蛋白表达情况,划痕实验检测其对肺癌细胞迁移能力的 影响。结果 酶切和测序结果表明pEGFP-STK11重组质粒构建成功;在转染A549和H460细胞后24h观 察到绿色荧光最强;Western blot结果显示STK11蛋白在转染后24 h条带最深;划痕实验显示,转染组 细胞迁移距离小于0.9%氯化钠溶液对照组（P<0.05）。结论 成功构建STK11基因重组质粒,并能转 染A549和H460细胞,转染后对肺癌细胞迁移能力起一定抑制作用。     

肝激酶B1增强肺癌H460细胞放射敏感性的体内研究

目的 研究肝激酶B1(LKB1)对肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤放射敏感性的影响。方法 构建肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予空载质粒(pEGFP-Ctrl)、照射+空载质粒(IR+pEGFP-Ctrl)、过表达LKB1质粒(pEGFP-LKB1)、照射+过表达LKB1质粒(IR+pEGFP-LKB1)处理;观察移植瘤生长情况,计算抑瘤率及放射增敏比;并采用免疫组织化学和蛋白印记技术检测各组瘤组织中LKB1表达情况,分析LKB1与放射敏感性的关系。结果 相较于pEGFP-Ctrl组,IR+pEGFP-Ctrl组、pEGFP-LKB1组和IR+pEGFP-LKB1组的肿瘤生长都受到不同程度的抑制,抑瘤率分别为31.30%、14.78%和43.48%,其中IR+pEGFP-LKB1组较其他组最为明显。IR+pEGFP-LKB1组LKB1的放射增敏系数为1.18。转染pEGFP-LKB1组的LKB1在免疫组织化学和蛋白印记水平上表达增高,其余组未见LKB1表达。结论 成功构建肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤模型,LKB1具有增强肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤放射敏感性作用。     

射波刀治疗脑动静脉畸形的剂量学分析

目的：探究影响射波刀治疗脑动静脉畸形（arteriovenous malformation,AVM）的肿瘤靶区（gross tumor volume,GTV）和正常组织剂量分布的因素,分析不同直径的准直器对脑AVM剂量分布的影响,为脑AVM射波刀治疗计划的设计提供参考。方法：选取2015—2020年在某院经脑AVM栓塞术后接受射波刀治疗的12例脑AVM患者,根据GTV横断面长径的30%、40%、50%、30%+40%+50%选取不同尺寸的准直器,为每位患者制订4个不同的治疗计划,分别作为A组、B组、C组、D组。分析GTV形状和体积、准直器的大小对靶区剂量分布的影响,并对靶区外的剂量跌落情况进行分析。采用SPSS 20.0软件进行统计学分析。结果：GTV宽度、高度、体积和规则度对适形性指数、新适形性指数、几何适形性指数和治疗射野数的影响均有统计学意义（P<0.05）。C组与A组、B组和D组相比,GTV的最小剂量、中位吸收剂量、靶区覆盖率、靶区梯度指数和处方剂量线提高,GTV的适形性指数、新适形性指数、几何适形性指数及射波刀治疗计划的治疗机器跳数、治疗节点数和治疗射野数降低,且差异有...