miR-140靶向调控SOX2在结肠癌中的作用机制研究

目的 分析miR-140在结肠癌中的作用机制.方法 qRT-PCR检测miR-140在结肠癌细胞和组织中的表达;CCK8法、细胞划痕实验检测miR-140对结肠癌HT29细胞增殖和迁移的影响.TargetScan筛选miR-140的潜在靶基因并通过双荧光素酶报告基因试验进行验证;采用qRT-PCR和Western bl...     

穿心莲内酯体内诱导人胃癌BGC823细胞凋亡作用及机制探讨

目的:探讨穿心莲内酯的体内抗肿瘤作用和诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法:选取体质量18～20g的6周龄雌性BALB/C裸鼠制备裸鼠移植瘤模型,用400、200和100mg/(kg.d)穿心莲内酯进行体内药敏实验,测定肿瘤生长抑制率,透射电镜形态学观察,RT-PCR和免疫组织化学检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。结果:穿心莲内酯对裸鼠移植瘤有明显的抑瘤效应,低剂量组的抑瘤率为22.2%(P=0.029),中剂量组为44.7%(P=0.009),高剂量组为57.8%(P=0.007),且抑瘤率随剂量增加逐渐增高。光镜和电镜下可见细胞凋亡形态改变。穿心莲内酯低、中、高剂量分别作用14d后,Caspase-3水平均逐渐增加,与阴性对照组(0.71±0.14)比较,低剂量为1.04±0.19(P=0.034),中剂量为1.55±0.34(P=0.008),高剂量为1.89±0.36(P=0.005),并呈剂量依赖性关系;同时,随着药物剂量的增加,肿瘤细胞质的Bax蛋白表达逐渐增加,与阴性对照组(0.179±0.042)比较,低剂量为0.248±0.055(P=0.04),中剂量为0.310±0.051(P=0.032),高剂量为0.337±0.050(P=0.021);Bcl-2蛋白表达逐渐降低,与阴性对照组(0.353±0.066)比较,低剂量为0.291±0.032(P=0.035),中剂量为0.241±0.036(P=0.024),高剂量为0.218±0.042,P=0.018。结论:穿心莲内酯对裸鼠移植瘤有显著的抗肿瘤作用,其抗肿瘤机制可能与下调Bcl-2表达、上调Bax表达、引起Caspase-3的活化进而诱导细胞凋亡有关。     

TRIM59基因沉默对结直肠癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 探讨三结构域蛋白59(TRIM59)对人结直肠癌HCT116细胞生物学功能的影响及其作用机制。方法 构建重组TRIM59干扰质粒RNA(si-TRIM59),采用脂质体转染法将TRIM59敲减质粒转染至结直肠癌细胞HCT116中,RT-qPCR和Western blot验证转染效率;CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术检测TRIM59基因沉默对结直肠癌细胞增殖、克隆形成及细胞周期的影响,Western blot检测CDK4和cyclinD1细胞周期蛋白表达水平。结果 TRIM59 mRNA及蛋白在结直肠癌细胞中的表达水平高于正常结直肠黏膜细胞(P<0.05);敲减TRIM59表达后,HCT116细胞的增殖活性和克隆形成能力受到抑制(P<0.05),细胞周期阻滞在G₀/G₁期;同时,细胞周期相关蛋白CDK4和cyclinD1的表达量降低(P<0.05)。结论 TRIM59在结直肠癌细胞中高表达,下调TRIM59表达可抑制结直肠癌细胞的增殖、克隆形成能力,提示TRIM59有望成为结直肠癌基因治疗的新靶点。     

食管鳞癌组织Nanog表达临床意义分析

目的研究食管鳞癌组织中Nanog蛋白表达情况及其与食管癌患者预后的相关性。方法收集河北北方学院附属第一医院2000-01-01-2005-12-31手术切除的食管癌存档标本蜡块69例及正常食管黏膜组织（距肿瘤组织〉5cm）24例,应用免疫组化SP法检测食管鳞癌及癌旁正常黏膜组织中Nanog的表达,分析其与各临床病理因素的相关性;结合Nanog的表达情况及随访资料,Kaplan-Meier法和Log-rank检验分析Nanog与食管癌患者生存的相关性;并建立Cox回归模型评估Nanog及各临床病理因素与患者预后的相关性。结果食管鳞癌组织中Nanog表达阳性率为40.6%（28/69）,显著高于正常组织的8.3%（2/24）,χ^2=8.473,P=0.004。Nanog的表达与组织分化程度（χ^2=7.137,P=0.008）、淋巴结转移（χ^2=4.947,P=0.026）、外膜浸润（χ^2=11.110,P=0.001）和UICC分期（χ^2=5.301,P=0.021）明显相关,而与患者年龄（χ^2=0.238,P=0.626）和性别（χ^2=1.229,P=0.268）无相关性;死亡患者Nanog的表达程度为49.0%（25/51）,明显高于生存患者的16.7%（3/18）,χ^2=5.775,P=0.016;Nanog表达水平与食管癌患者预后明显相关,RR=1.913,P=0.002。结论 Nanog在食管鳞癌组织中呈高表达,与患者生存期相关,Nanog是影响食管癌患者预后的独立因素。     

基于mTOR/S6K1通路探究CXCR3对糖尿病肾病足细胞损伤、凋亡、自噬的影响

目的 探究趋化因子受体(CXCR)3对糖尿病肾病足细胞损伤、凋亡、自噬的影响及其作用机制。方法 将分化成熟的小鼠肾脏足细胞MPC-5分为对照组,模型组,si-NC组和si-CXCR3组,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞24 h、48 h和72 h细胞活力,流式细胞法检测各组细胞凋亡水平,Western印迹检测细胞凋亡关键蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3表达水平,ELISA法检测各组细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8,肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,qPCR及Western印迹检测各组细胞自噬相关蛋白(beclin)1、人自噬相关蛋白(ATG)5及ATG7表达水平,同时检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/蛋白核糖体S6蛋白激酶(mTOR/S6K1)信号通路关键蛋白的蛋白表达水平及其磷酸化修饰水平。结果 与对照组相比,模型组和si-NC组细胞增殖受到显著抑制,并且随着时间增加抑制能力增强,与模型组和si-NC组相比,si-CXCR3组细胞增殖显著提高(P<0.05);与对照组相比,模型组和si-NC组细胞凋亡均...     

人工气管移植实验研究

目的探讨能与人体气管愈合成为一体的人工气管的实验方法。方法用长5cm羊气管,实验时切除羊颈段气管5cm,用人工气管重建。手术后1、2周,1、3、6、12个月摄X线片、支气管镜检查,然后处死检查大体和镜下病理,观察人工气管愈合情况。结果8只实验动物人工气管与自体气管均顺利达到生物性愈合,黏膜成活,实验动物长期存活。3个月时有部分软骨细胞融解吸收,但支架位置良好,管腔通畅。6、12个月后标本显示人工气管完全成活。但吻合口处有少量肉芽增生,管腔轻度狭窄。结论人工气管可以与自体气管形成生物性愈合,气道管腔通畅,动物长期生存。     

人工气管移植试验研究

目的：探讨一种能与人体气管愈合成为一体的人工气管的制做方法。方法：选用大动物（羊）,切除颈段气管5cm,用异体新鲜组织（羊）制成5cm长的人工气管,与实验动物气管上下端吻合。手术后半个月、一个月、三个月、六个月拍X线片、支气管镜检查,观察人工气管愈合情况。定期观察吻合口愈合、血运及人工气管内情况,为临床人工气管应用提供实验依据。结果：本组4只实验动物实行人工气管移植,均获成功。结论：通过该方法可使人工气管移植成功,但例数较少,尚需进一步研究,以便早日应用于临床。