顺铂与CIK细胞对A549细胞杀伤协同作用机制的初步研究

目的:探讨不同浓度顺铂作用人肺腺癌A549细胞24h后,NKG2D配体表达的改变及细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)杀伤活性的变化。方法:MTT法测定顺铂作用A549细胞24h的50%抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测IC50、1/2IC50和1/4IC50浓度顺铂分别作用A549细胞24h后,A549细胞表面NKG2D配体表达的变化,配体包括MHC-I类链相关分子MICA和MICB以及人巨细胞病毒糖蛋白UL16结合蛋白ULBP1、ULBP2和ULBP3;乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,CIK细胞对IC50浓度的顺铂作用前及作用24h后A549细胞的杀伤活性。结果:不同浓度顺铂作用24h后,A549细胞表面MICA(F=12.490,P=0.002)、MICB(F=41.492,P<0.001)、ULBP2(F=375.773,P<0.001)和ULBP3(F=59.594,P<0.001)表达均显著升高;ULBP1表达降低,F=55.693,P<0.001。效靶比10∶1时,IC50浓度顺铂作用24h前、后的A549细胞的杀伤活性分别为(11.88±1.57)%和(17.64±1.44)%,F=21.770,P=0.010;20∶1时分别为(35.56±1.98)%和(46.39±3.51)%,F=21.653,P=0.010;30∶1时分别为(45.03±1.74)%和(73.81±1.62)%,F=439.578,P<0.001。结论:顺铂提高A549细胞NKG2D配体MICA、MICB、ULBP2和ULBP3的表达,增强A549细胞对CIK细胞杀伤的敏感性。     

紫杉醇增强肺癌细胞NKG2D配体表达和CIK细胞杀伤活性

目的研究不同浓度紫杉醇作用人肺腺癌A549细胞48小时后NKG2D配体表达的改变及CIK细胞杀伤活性的变化。方法 采用MTT法测定紫杉醇对A549细胞24小时的50%抑制率(IC50);流式细胞术检测IC50、1/2 IC50、1/4 IC50浓度紫杉醇作用A549细胞48小时后A549细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达的变化;乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,CIK细胞对IC50浓度的紫杉醇作用前及作用48小时后A549细胞的杀伤活性。结果 不同浓度紫杉醇作用48小时后A549细胞表面MICA、MICB、ULBP2、ULBP3表达显著升高,ULBP1表达降低(P<0.05)。效靶比10∶1、20∶1、30∶1时,CIK细胞对A549细胞的杀伤活性分别为(11.08±1.22)%、(36.22±0.91)%、(45.73±2.00)%;CIK细胞对IC50浓度紫杉醇作用48小时后的A549细胞杀伤活性分别为(20.79±3.33)%,(53.47±1.62)%、(66.39±0.77)%,与作用前比较均明显增强(P<0.05)。结论 紫杉醇作用后能提高A549细胞NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP2、ULBP3)的表达,从而增强A549细胞对CIK细胞杀伤的敏感性。     

HER2 阳性乳腺癌组织MICA/B高表达延长患者的无病生存期

目的：探讨人表皮生长因子受体2（humman epidermal growth factor receptor 2,HER2）阳性乳腺癌组织中主要组织相容性复合体-I 类链相关蛋白A和B(MHC class I chain-related protein A/B,MICA/B)的表达水平与患者无病生存期（disease-free survival,DFS）的关系。方法：收集南方医科大学郑州人民医院2009 年1 月至2010 年6 月HER2 阳性乳腺癌癌旁组织存档蜡块26 例及乳腺癌蜡块100 例,免疫组化染色检测癌旁组织及癌组织MICA/B的表达水平,采用Kaplan-Meier 生存曲线分析其与患者临床病理特征和DFS的关系。结果：MICA/B在癌旁组织中呈阴性(0/26);乳腺癌组织中MICA/B表达率为92%（92/100）,其中高表达为65%（65/100）;MICA/B 在Ⅰ期的高表达率高于Ⅱ~Ⅲ期（77.55% vs 52.94%,P<0.05),在T1 期的高表达率高于T2~T4 期（75.00% vs 52.27%,P<0.05）;ER、PR 阳性（阳性细胞数≥1%）组MICA/B 高表达率显著低于ER、PR 阴性组（ER：52.38% vs 74.14%;PR：51.35% vs 73.02%,均P<0.05）。MICA/B的表达与患者的临床分期、ER、PR的表达及肿瘤大小有关（均P<0.05）,与绝经状态、组织学分级及淋巴结转移无关（均P>0.05）。无论靶向治疗组（90.6% vs 72.2%,P<0.05）或非靶向治疗组（78.4% vs 58.8%,P<0.05）MICA/B高表达组6 年DFS均显著高于低表达组。结论：HER2 阳性乳腺癌组织中MICA/B高表达与患者的DFS密切相关,可作为患者预后的潜在预测指标。     

吉非替尼上调NKG2D配体表达增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性北大核心CSCD

目的:研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼对人肺腺癌A549细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤活性的影响及其分子机制。方法:MTT法测定吉非替尼对A549细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测吉非替尼、EGFR下游分子LY294002(PI3-K抑制剂)、SB203580(MAPK抑制剂)、STAT21(STAT3抑制剂)、Rottlerin(PKC抑制剂)作用A549细胞24小时后A549细胞NKG2D配体的表达。乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,NK细胞对吉非替尼作用前、后A549细胞的杀伤活性。结果:吉非替尼上调A549细胞MICB、ULBP1表达,增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性,EGFR下游分子MAPK、STAT3抑制剂不影响A549细胞NKG2D配体的表达,PI3-K抑制剂下调A549细胞MICA表达,PKC抑制剂上调ULBP1表达。结论:吉非替尼上调NKG2D配体表达增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性。     

IL-12增强CIK细胞对食管癌EC9706细胞的杀伤活性

目的：探讨IL-12对细胞因子诱导的杀伤 (cytokine-induced killer,CIK) 细胞的表型和CIK细胞在体外对食管癌EC9706细胞杀伤活性的影响。 方法: 体外分离人外周血单个核细胞,分为两组：对照组以IFN-γ、IL-2和CD3单抗诱导培养CIK细胞;IL-12组在对照组基础上加用IL-12培养。培养至第14天,流式细胞仪检测两组CIK细胞的免疫表型;LDH释放法测定效靶比20 ∶1、30 ∶1时两组CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性;观察效靶比30 ∶1时,NKG2D单抗对两组CIK细胞杀伤活性的影响。 结果: IL-12组与对照组相比较,CIK细胞免疫表型的CD3+CD56+细胞比例\[(28.23±1.71)% vs (16.34±059) %, P<0.05\]、CD3+细胞及CD3+CD56+细胞中NKG2D的表达\[(77.45 ±2.15)% vs (66.87±0.73)%, (92.94±077)% vs (82.18±066)%;均P<0.05\]、CD3+细胞中穿孔素的表达\[(51.78±0.63)% vs (43.54±0.95)%,P<0.05\]都明显增强;CD3+细胞颗粒酶B表达无明显变化\[(26.90±0.67)% vs (26.76±0.33)%,P>0.05)\]。效靶比20 ∶1和30 ∶1时,IL-12组CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性均较对照组明显增强\[(43.92±1.67)% vs (35.34±1.22)%,(55.95±0.88)% vs (43.91±110)%;均P<005\];以NKG2D单抗阻断后,IL-12组、对照组CIK细胞杀伤活性均明显下降\[(19.72±0.56)% vs (55.95±0.88)%, (19.83 ±1.20)% vs (43.91±1.10)%;均P<0.05\]。 结论: IL-12能够上调CIK细胞NKG2D和穿孔素的表达,从而增强CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性。     

血清降钙素原、C-反应蛋白与白细胞介素-6在乳腺癌手术后切口感染妇女中的改变分析

目的:探讨血清降钙素原(PCT)、血清C-反应蛋白(CRP)与血清白细胞介素-6(IL-6)在乳腺癌手术后切口感染妇女中的改变情况,以期为乳腺癌手术后切口感染的诊断、防治及改善患者预后提供理论依据.方法:选择自2018年1月—2019年1月在郑州人民医院接受手术治疗的乳腺癌患者180例,根据患者是否发生手术后切口感染将患者分为两组,研究组即术后切口感染组22例,参照组即未发生术后切口感染组158例.对比两组患者的血清PCT、血清CRP与血清IL-6的表达水平,同时对两组患者的临床病例资料进行统计分析,利用单因素及多因素logistic回归分析研究影响乳腺癌患者手术后发生切口感染的危险因素:将单因素分析中具有统计学意义的项目纳入到多因素logistic回归分析模型.结果:乳腺癌患者手术后切口感染的发病率较高,达到了12.2％;研究组患者的血清PCT、血清CRP与血清IL-6表达水平(3.55±0.61 ng/L,41.52±8.52 mg/L,45.52±13.11 ng/L)均明显高于参照组患者(0.88±0.15 ng/L,18.66±3.21 mg/L,12.46±2.89 ng/L),P<0.05;患者临床资料的单因素分析结果显示有无糖尿病史、有无放疗化疗史、血红蛋白水平、住院总时间及使用抗生素种类是乳腺癌患者手术后发生切口感染的危险因素,P<0.05;多因素logistic回归分析结果显示有无糖尿病史、有无放疗化疗史、血红蛋白水平、住院总时间及使用抗生素种类等五种因素均是乳腺癌患者手术后发生切口感染的独立危险因素,P<0.05.结论:乳腺癌患者手术治疗容易发生手术切口感染,血清PCT、血清CRP与血清IL-6表达水平可以作为乳腺癌手术后切口感染的在效诊断指标;有无糖尿病史、有无放疗化疗史、血红蛋白水平、住院总时间及使用抗生素种类等五种因素均是乳腺癌患者手术后发生切口感染的独立危险因素,要根据患者的临床资料采取干预措施以有效防治乳腺癌患者手术后切口感染.     

BDNF对食管癌细胞株ECa9706体外侵袭能力的影响

目的:本研究观察脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对食管癌细胞株ECa9706体外增殖和迁移能力的影响以及机制.方法:采用MTT和Transwell方法分别观察BDNF以及酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,Trk B)抑制剂K252a对ECa9706细胞增殖和迁移能力的影响,采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,q PCR)和Western blot方法分别检测ECa9706细胞中Trk B和磷脂酶C(phospholipase C,PLC)-γ1的m RNA和蛋白表达水平.结果:BDNF可显著促进ECa9706细胞增殖和迁移能力,该作用可被K252a拮抗.与对照组相比,BDNF可诱导Trk B的m RNA和蛋白表达显著增加,并提高PLC-γ1的蛋白表达水平.结论:BDNF/Trk B/PLC-γ1在食管癌细胞迁移浸润中具有重要作用.