正常生育男性成熟精子mRNA的种类和特征

目的:剖析具有正常生育能力男性成熟精子mRNA的种类和丰度。方法:健康并育有后代的成年男性10例,禁欲1周后取精液,上游法优化精子,Trizol试剂提取精子总RNA。混合所有总RNA进行基因表达系列分析(SAGE)。结果:所建SAGE文库共获877个克隆,测序得到21 052个标签,出现两次以上的独特性标签有2 712种。经与SAGEm ap数据库比对,19.7%的独特性标签没有基因匹配,代表新基因;其余能匹配的基因中,67%具有蛋白质结合或核酸结合能力,41%具有催化活性,13%与信号转导有关,与细胞运输、精子结构、转录调节相关者分别达到10%左右。结论:人成熟精子中存在数量庞大、种类繁多的mRNA。     

五行汤抗肿瘤及经钙离子介导的促肿瘤细胞凋亡作用

目的:明确五行汤的抗肿瘤作用并初步探讨其机制.方法:不同浓度五行汤处理培养肿瘤细胞, MTT检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA变化;电镜观察细胞形态变化;特异性荧光探针检测胞浆钙离子浓度变化.结果:五行汤对多种肿瘤细胞生长有较特异的抑制作用;五行汤处理后的SGC-7901细胞经流式细胞仪检测出现亚二倍体峰,并呈时间-浓度依赖性;琼脂糖凝胶电泳呈现的DNA Ladder;电镜显示五行汤处理后的SGC-7901细胞呈现凋亡特征;Fluo-3 AM染色荧光显微镜观察到胞浆钙离子浓度升高;胞内钙离子拮抗剂Bapta AM可以明显降低五行汤处理后SGC-7901细胞的凋亡率,且对细胞的保护作用呈浓度依赖性.结论:五行汤有较明确的抑制肿瘤细胞生长作用,可能通过钙离子介导的肿瘤细胞凋亡发挥作用.     

肝癌抑制基因-1与转运功能相关的451 bp序列区的确定

背景与目的:肝癌抑制基因-1(HCCS1)是一种潜在的肝癌抑制基因,并且在细胞内蛋白分拣运输中也发挥着重要作用,其抑癌作用有可能是通过其蛋白转运的功能而发挥的,本文以寻找HCCS1序列中与转运相关的最小功能序列区域为目的.方法:通过亚克隆技术,构建以pEGFP-C2为载体的含不同长度HCCS1cDNA片段的亚克隆,将构建的亚克隆转染子宫颈癌HeLa细胞,通过免疫荧光共聚焦显微镜观察不同长度HCCS1蛋白的分布,以及与6-磷酸甘露糖受体(M6PR)的共定位.结果:成功构建了以pEGFP-C2为载体的10个含有不同长度HCCS1片段的亚克隆;HCCS1cDNA从3'端向5'端逐渐缺失的片段中:2 100 bp片段至778 bp片段编码的不同长度HCCS1蛋白呈颗粒状分布于核周的胞质内,其中2 100 bp片段至1 571 bp片段编码的不同长度HCCS1蛋白均呈颗粒状、极性分布于核周的胞质内,且与M6PR有共定位;而1 120 bp片段至778 bp片段编码的不同长度HCCS1蛋白虽然也呈颗粒状分布于核周,但极性分布消失,且与M6PR共定位消失;HCCS1cDNA片段678 bp片段至339 bp片段编码的不同长度HCCS1蛋白呈散点状弥散分布于胞质以及胞核内.结论:确定了HCCS1cDNA 1 571 bp片段的3'端451 bp的序列为与HCCS1转运功能相关的最小区域范围.     

山西省消化道癌死亡率现状及就诊情况分析

山西省消化道癌死亡率现状及就诊情况分析王毓銮，赵仰星山西省肿瘤研究所（太原０３００１３）在我国北方，消化道癌是危害人民生命健康的主要癌种。本文就１９９０～１９９２年山西省十分之一人口全死因调查资料中消化道癌死亡率及该类死者的生前就诊情况做了分析。资料...     

TKM──血液DNA快速提取法

在临床ＰＣＲ检验中，血卟啉对酶促反应的影响不容忽视，因此在纯化ＤＮＡ的过程中，常需将红细胞清除，以消除血卟啉对实验结果的干扰。用ＴＫＭ法提取血液ＤＮＡ，方便、经济、快捷且效果良好。该ＤＮＡ可用于ＰＣＲ的分析，结果极为理想，完全可以替代其他血液ＤＮＡ的提取方法。     

五行汤经钙离子/溶酶体途径介导的SGC-7901细胞凋亡

目的 探索五行汤经钙离子/溶酶体途径介导的SGC-7901细胞凋亡机制.方法 吖啶橙染色检测溶酶体膜完整性,胞浆蛋白免疫印迹法检测凋亡途径蛋白变化,Annexin V结合实验和CCK-8法检测不同抑制剂对细胞凋亡和存活的影响.结果 凋亡细胞的溶酶体膜渗漏,溶酶休释放蛋白酶Cathepsin D和Cathepsin B至...     

TKM—血液DNA快速提取法

在临床ＰＣＲ检验中，血卟啉对酶促反应的影响不容忽视，因此在纯化ＤＮＡ的过程中，常需将红细胞清除，以消除血卟啉对实验结果的干扰。用ＴＫＭ法提取血液ＤＮＡ，方便、经济、快速且效果良好。该ＤＮＡ可用于ＰＣＲ的分析，结果及为理想，完全可以替代其他血液ＤＮＡ的提取方法。     

健康人成熟精子中mRNA的种类特征

目的分析具有正常生育能力男性成熟精子mRNA的种类特征。方法健康并育有后代的成年男性11例,禁欲3～5d后取精液,上游法纯化精子,Trizol试剂提取精子总RNA。混合所有总RNA进行基因表达系列分析(SAGE),随后对所得SAGE文库进行功能聚类性分析。结果所建SAGE文库共获877个克隆,测序得到21052个标签,出现两次以上的独特性标签有2712种。SAGE文库用DAVID软件进行功能性聚类分析,高丰度的389个基因能聚合成25组功能性的基因。最突出的是一组核蛋白基因、参与DNA依赖的基因转录和转录调节;其次是与胞质,核糖体蛋白以及蛋白质合成相关的基因;其他基因类别还包括蛋白多肽水解相关蛋白;具有蛋白激酶活性,蛋白氨基酸磷酸化、蛋白修饰相关蛋白;免疫相关蛋白等。结论人成熟精子中存在数量庞大、种类繁多的mRNA,这些mRNA可能并不仅仅是在精子形成过程中残留下来的,它的功能可能包括重新翻译以替代降解的蛋白、染色质的重组装,受精过程中传递一些父系必须的RNAs到卵子中以进行表观遗传。