人脐血CD34~+细胞在NOD/SCID小鼠上有效重建造血系统

目的探讨人脐血CD34+造血干细胞在非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(no obese diabetic/severecombined Immunodeficiency,NOD/SCID)小鼠模型上造血重建的作用。方法利用密度梯度离心法,从新鲜脐血中分离出单个核细胞,利用免疫磁珠分选法筛选CD34+造血干细胞,经尾静脉输注入经亚致死剂量照射后的NOD/SCID小鼠体内,移植后3、7、10、14 d分别用断尾法取小鼠外周血,血常规计数外周血动态变化情况;移植后4、6、8、10周,取其外周血,运用PCR法检测外周血中人特异性Alu基因的表达情况。结果免疫磁珠分选得到的CD34+细胞浓度达91.2%,照射后小鼠骨髓腔内有核细胞和巨细胞数量明显减少或消失,达到清髓目的。移植后第3天移植组小鼠外周血各系细胞均明显低于正常组(P<0.01),移植后第7天,移植组小鼠外周血象开始恢复,明显高于阴性对照组[白细胞:(3.90±0.53)×109/L vs(1.30±0.18)×109/L,血红蛋:(139.8±5.0)g/L vs(79.8±11.0)g/L,白血小板:(253.0±17.5)×109/L vs(52.0±6.9)×109/L,(P<0.01)],移植后第10天,移植组小鼠外周血象恢复到辐照前水平,与正常组无差别。移植4周后,PCR方法在小鼠外周血中可检测到人特异Alu基因序列,未移植组小鼠照射后2周内全部死亡。结论经照射后的NOD/SCID小鼠通过人脐血CD34+细胞植入可建立起人鼠嵌合模型。NOD/SCID小鼠经照射后,不破坏骨髓造血微环境及造血基质,可用于异基因细胞移植模型。人脐血CD34+细胞移植入NOD/SCID小鼠,其造血系统能有效重建。     

黄芪甲苷对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制研究

目的:研究黄芪甲苷对肝癌细胞系MHCC97-H增殖和侵袭能力的影响。方法:MTT法检测5、10、20、40、80、100μg/ml不同终浓度和24、48、72h作用时间下黄芪甲苷对MHCC97-H细胞增殖的影响。Tran-swell侵袭实验检测100μg/ml黄芪甲苷处理48小时对MHCC97-H细胞侵袭能力的影响。选择100μg/ml黄芪甲苷处理48小时作为处理条件,实时定量PCR、Westernblot检测黄芪甲苷处理后MHCC97-H细胞MMP-2、9mRNA和蛋白质表达水平的变化,明胶酶谱法检测黄芪甲苷处理后MHCC97-H细胞培养上清中MMP-2、9分泌水平的变化。结果:各浓度和作用时间下黄芪甲苷对MHCC97-H细胞增殖均无明显抑制作用。100μg/ml黄芪甲苷处理48小时后,MHCC97-H细胞侵袭能力降低,MMP-2、9分子mRNA和蛋白质表达水平均下降,且细胞培养上清中分泌的MMP-2、9减少。结论:体外黄芪甲苷对MHCC97-H细胞增殖无明显抑制作用,但黄芪甲苷可以通过降低MHCC97-H细胞MMP-2、9分子的表达起到降低其细胞侵袭能力的作用。     

Cyclin D1、Ki-67及PTEN在乳腺癌中的表达及意义

目的:研究细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Ki-67蛋白及第10号染色体同源缺失磷酸酶-张力蛋白基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)在乳腺癌组织中的表达,并探讨其在乳腺癌、乳腺增生症中的意义。方法:运用免疫组织化学SP法,对120例乳腺浸润性导管癌(A组)及20例乳腺增生症(B组)标本进行Cyclin D1、Ki-67及PTEN检测。结果:Cyclin D1在乳腺浸润性导管癌(A组)中的阳性表达率为59.2%(71/120),在乳腺增生症(B组)的阳性率为15.0%(3/20),差别具有统计学意义(P<0.05)。Ki-67在A组中的阳性率为80.0%(96/120),在B组的阳性率为10.0%(2/20),差别具有统计学意义(P<0.05)。PTEN在A组中的阳性率为49.2%(59/120),在B组的阳性率为90.0%(18/20),差别具有统计学意义(P<0.05)。结论:在乳腺浸润性导管癌中,Cyclin D1和Ki-67明显高于乳腺增生症,PTEN阳性表达低于乳腺增生症,并且三者之间存在关联性,可以作为乳腺癌预后和靶向治疗指标应用于临床。